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[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙晓璇 雷治海 杨桂红 刘新义 叶平
【目的】研究神经肽W(NPW)及其受体1(NPWR1,GPR7)mRNA在兔各器官组织的表达情况。【方法】利用基因克隆方法克隆出兔神经肽W及其受体的cDNA序列片段,以GAPDH为内参基因,采用相对定量RT-PCR方法检测NPW及NPWR1 mRNA在兔体内各组织中的表达情况,用原位杂交方法研究NPWR1阳性细胞在兔脑的分布定位。【结果】克隆出兔NPW及其受体NPWR1的基因部分序列,NPW基因片段长234 bp,NPWR1基因片段长508 bp,GenBank登录号分别为HQ596517和HQ596518;经DNAStar软件分析,不同物种之间NPW及其受体基因序列的同源性较高。NPW及其受...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
侯玉晶 雷治海 苏娟 姚远 李月勤 于晓磊 刘倩
【目的】研究神经肽S(NPS)及其受体(NPSR)mRNA在兔全身各组织的表达情况,以及热应激对兔下丘脑、垂体和肾上腺轴NPS及NPSR mRNA表达的影响。【方法】利用基因克隆方法克隆出兔神经肽S及其受体的cDNA序列,以GAPDH为内参基因,采用相对定量RT-PCR方法检测NPS及NPSR mRNA在兔体内各组织中的表达情况以及热应激对NPS及NPSR mRNA在下丘脑-垂体-肾上腺轴表达的影响,【结果】克隆出兔NPS及其NPSR cDNA序列,兔NPS cDNA全序列为270 bp,NPSR的部分序列为847 bp,GenBank登录号分别为EU978456和FJ713102;经DNAS...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨桂红 黄一帆 林珊珊 祁保民 王全溪
分别采用基因克隆技术、细胞分离培养技术和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法首次克隆了番鸭神经肽S(NPS)的基因,并探讨NPS对番鸭脾淋巴细胞体外增殖能力的影响.基因测序结果显示,所克隆的番鸭NPS c DNA序列为181 bp,与其他物种NPS的同源性极高,其中与鸡NPS的亲缘关系最近.MTT法研究结果显示:0.01-1000 nmol·L-1NPS可促进番鸭脾淋巴细胞体外的增殖,其中以10 nmol·L-1NPS的促进效果最优;10 nmol·L-1NPS协同脂多糖(LPS)及1 nmol·L-1NPS协同植物血凝素(PHA)对促进脾淋巴细胞增殖的效果最好.上述结果表明,番鸭NPS基因在进化上是高...
关键词：
番鸭 神经肽S 基因克隆 脾淋巴细胞增殖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹磊 梁宏伟 李忠 王晓阳 丁为群 邹桂伟
【目的】克隆黄颡鱼神经肽Y基因(NPY),研究其在不同组织及在饥饿情况下脑组织中的表达情况,探讨其在黄颡鱼摄食活动中的作用。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆黄颡鱼NPY基因的cDNA序列全长,对其编码氨基酸进行生物信息学分析;利用半定量PCR和实时荧光定量PCR技术,对NPY基因在黄颡鱼成体不同组织(脑、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、胃、肌肉、鳃、性腺)中的表达情况进行研究,并检测饥饿不同时间(0,24,48,72,96,120,144和168h)以及饥饿168h重新投饵1,3和5h后黄颡鱼脑组织中NPY表达水平的变化。【结果】黄颡鱼NPY基因cDNA序列全长772bp,开放阅读框282...
关键词：
黄颡鱼 NPY基因 饥饿 基因表达
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱志强 李云 郑凯迪 朱仙珍 刘彪 张磊
利用RT-PCR的方法获得了厚颌鲂(Megalobrama pellegrini)NPY基因的编码序列。结果显示:厚颌鲂NPY基因长度为302 bp,包含了NPY基因291 bp的整个开放阅读框,共编码96个氨基酸,其分子量预测值为10987.4,理论等电点为5.72。通过ClustalX软件,将厚颌鲂与21个物种NPY的氨基酸序列进行比对,再结合Blastp分析的结果发现,厚颌鲂NPY氨基酸序列与鲤、中华倒刺鲃、鲫、斑马鱼、岩原鲤等鲤科鱼类的同源性最高,其同源性分别为100%、97%、95%、93%、93%。根据包括厚颌鲂在内的22个物种的NPY氨基酸序列的同源性构建进化树,其同源性与各鱼种...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
樊明欣 雷治海 李庆梅 王红星
用原位杂交与免疫组织化学相结合的方法研究了 5头三元杂交仔猪前脑内leptin长型受体mRNA与神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明 ,leptin长型受体mRNA和NPY免疫反应阳性神经元分布于下丘脑漏斗核和前室周核、海马、杏仁核及大脑皮质。上述结构内一些表达leptin长型受体mRNA的神经元也含有NPY免疫反应阳性物质 ,即leptin长型受体与NPY共存于同一神经元内。提示leptin可能通过下丘脑漏斗核和室周核以及边缘系统的海马和杏仁核 ,甚至大脑皮质中表达leptin长型受体mRNA的NPY免疫反应阳性神经元调节动物的摄食、能量代谢、生长和繁殖等活动。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蓝洁 梁旭方 张焱鹏 翟丽娟 万功伟
为探究草鱼（Ctenopharyngodon idellus）神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)与神经肽Y受体（NPY receptor,YR）的相互作用及信号传递机制，对草鱼YR的基因结构、组织表达和细胞信号传导途径进行分析。结果显示，在草鱼基因组中获取了7个YR基因的序列，分别为Y1R、Y2R、Y2-2R、Y4R、Y7R、Y8Ra和Y8Rb。对草鱼YR进行同源性分析，发现7个YR编码的氨基酸序列在硬骨鱼类中高度保守。组织表达结果显示，草鱼YR主要在中枢组织表达，但也可以位于外周组织，包括眼睛、鳃和肠道。NPY可以激活人胚胎肾细胞（HEK293t）中Y2R、Y4R和Y8Rb的表达，Y2R与cAMP/PKA信号通路偶联；Y4R与MAPK/ERK信号通路偶联；而Y8Rb可激活cAMP/PKA和MAPK/ERK 2条信号通路。脑室注射NPY可引起Y1R、Y2R、Y4R和Y8Rb表达量显著升高。研究结果表明，草鱼Y2R、Y4R和Y8Rb具有功能性，能够有效传递信号，NPY的作用很可能由这些受体介导。
关键词：
草鱼 神经肽Y受体 神经肽Y 信号通路
[期刊] 林业科学
[作者]
魏绍冲 姜远茂
冬枣(Ziziphus jujuba‘Dongzao’)是我国的特色鲜食果品之一,果实富含维生素C和环磷酸腺苷等成分,具有较高的营养和药用价值。冬枣采后贮藏过程中极易失水、皱缩、酒软或霉烂等,致使其供应期甚短。乙烯的生理作用是由位于细胞内质网上乙烯受
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈亚冰 兰道亮 黄偲 林宝山 黄勇 李键
【目的】克隆并分析高原牦牛Toll样受体1基因(TLR1)的特点。【方法】提取麦洼牦牛脾脏RNA,反转录合成cDNA,以其为模板分段扩增后拼接获得麦洼牦牛TLR1基因编码区序列,采用相关分析软件对基因进行序列分析,并对其编码的蛋白质进行基本理化性质分析及预测。【结果】分段扩增获得了TLR1基因1 484bp的上游序列和823bp的下游序列,拼接后获得2 287bp的cDNA序列。TLR1基因系统进化树及同源性比对结果表明,TLR1基因极其保守,牦牛TLR1基因与黄牛、绵羊等哺乳动物遗传距离很近。预测TLR1基因含有1个2 184bp的开放阅读框,编码727个氨基酸,其编码蛋白的分子质量为83....
[期刊] 水产学报
[作者]
杨峰 秦超彬 卢荣华 孙君君 杨丽萍 聂国兴
为探讨Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ在鱼类糖类和脂质代谢中的作用，本实验采用ＲＡＣＥ方法获得了草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ的全长Ｃ ｄＮＡ序列（登录号：Ｋｐ７３３８４６），利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析；采用实时定量ｐＣＲ技术，检测了Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ在１９个不同组织中的表达特性以及高糖（４５％）、高脂（８％）和高糖高脂饲喂对草鱼肝脏中该基因表达的影响。结果显示，草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ Ｃ ｄＮＡ全长２１８６ Ｂｐ，其中开放读码框为１１２２ Ｂｐ，编码３７３个氨基酸；跨膜结构分析表明草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ为典型的７次跨膜蛋白；同源性分析结果显示，草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ与．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
高雪 吕伟华 王红伟 张颖
为了解下丘脑神经肽(kisspeptin)在施氏鲟(Acipenser schrenckii)生殖调控中的作用,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和RACE技术首次克隆得到施氏鲟2个kisspeptin基因的全长cDNA序列,命名为kiss1和kiss2,并对它们编码氨基酸序列的特征及时空表达模式进行分析。结果表明,施氏鲟kiss1基因的cDNA全长为522 bp,编码130个氨基酸;kiss2基因的cDNA全长为518bp,编码149个氨基酸;Kiss1和Kiss2均以α-螺旋和无规则蜷曲为二级结构中的主要元件,且为含有信号肽、无跨膜结构、分泌到细胞外的不稳定亲水性蛋白质。氨基酸序列比对及进化分析表明,施氏鲟Kiss1和Kiss2具有高度保守区域,与达氏鲟(Acipenser dabryanus)Kiss1和Kiss2蛋白序列一致性最高,亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示,施氏鲟kiss1和kiss2的表达具有组织特异性,其中kiss1在性腺中的表达量最高,而kiss2在脑中的表达量最高。kiss2在早期性腺发育过程中的表达量检测显示,在孵化后0～49 d, kiss2的表达量较低,而kiss1的表达量则较高,在孵化后21 d达峰值;随着性腺的发育(孵化后64～199 d), kiss2的表达水平逐渐升高并在139 d达到最高,随后下降;与kiss2表达模式不同, kiss1的表达量在孵化后184 d达到峰值。以上结果表明, kisspeptin基因在施氏鲟早期性腺发育过程中具有重要的作用,且其调控功能存在差异。本实验为进一步阐明kiss1和kiss2的生理功能和分子调控机制奠定了理论基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贺立红 陈建业 于伟民 王勇 陆旺金
【目的】分析香蕉果实成熟及贮藏冷害下乙烯受体基因的表达特性,探讨热处理(38℃,3d)提高果实耐冷性与乙烯受体基因表达的关系。【方法】根据已报道的ETR基因的氨基酸保守序列设计引物,以香蕉果皮总RNA为模板,利用RT-PCR方法克隆香蕉的ETRcDNA,采用Northern杂交分析该基因的表达特征。【结果】香蕉果实在自然成熟进程中,两个基因在果皮和果肉中呈现不同的表达模式:果皮和果肉中Ma-ETR1的表达随果实成熟而逐渐减弱,而Ma-ERS3的表达仅在果实成熟后期略有增强;外源丙烯处理和38℃高温抑制果皮和果肉中Ma-ETR1的表达,却促进了Ma-ERS3的表达;低温促进果皮中Ma-ETR1和...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
应益益 马敏 陆艳 刘灿 李雪刚 杨凤连
采用RT-PCR和RACE技术,克隆了麦蛾OrCo基因全长序列,并将该基因命名为ScerOrCo。序列分析结果显示,ScerOrCo全长为1 876bp,开放阅读框长1 422bp,编码473个氨基酸,序列中有7个跨膜区。ScerOrCo基因的氨基酸序列与粘虫Mythimna separate嗅觉受体的同源性高达87%。qRT-PCR检测结果表明ScerOrCo只在麦蛾触角中特异性表达,且雌雄虫间表达量无显著差异。
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯海燕 莫斯科 房永祥 景志忠
旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体(Tcell receptor,TCR)α链(AB087988)为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因(pTCR-α)。结果表明:克隆的TCR-α基因具有完整的ORF,全长819 bp,编码272个氨基酸,预测蛋白分子量为30 kDa,含18个强碱性氨基酸,23个强酸性氨基酸,87个疏水性氨基酸和103个极性氨基酸,含有一段20个氨基酸的信号肽序列;与GenBank上登载的TCR-α参考序列(AB087988)的同源性为94.6%,与其...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
彭丽娜 邱亚峰 繆剑华 李向东 王晓杜 袁经权 王寿昆 李力 马志永
从小鼠巨噬细胞中提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术扩增小鼠Toll样受体9(mTLR9)cDNA,构建真核表达质粒p3XFLAG-CMV-7.1-mTLR9,转染293T细胞,利用Western Blotting检测蛋白表达,并用双荧光素酶报告基因系统检测mTLR9对其介导的信号通路下游转录因子NF-κB转录活性影响.结果表明,本试验成功克隆到小鼠TLR9cDNA,构建的重组体转染细胞后表达的蛋白分子质量与预计相符,并能激活下游转录因子NF-κB的转录活性.
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