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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘光清 张玉颖 云涛 倪征 张淼涛 梁华丽 华炯刚 李双茂 杜青云 盛祖恬
采用3′RACE方法对兔病毒性出血症病毒(RHDV)JX／CHA／97株基因组3′端全序列进行了扩增、克隆和测序,并利用ONAstar和DNAman软件分析了RHDV JX／CHA／97株与各参比毒株3′NCR的序列同源性,用RNA structure软件对3′NCR的二级结构进行了预测和分析。结果表明,所扩增的目的基因片段长1500 bp,包括部分VP60基因序列、ORF2基因、3′端非编码区(3′Non Coding Region,3′NCR)和poly(A)尾巴,其中 3′NCR位于ORF2终止密码子TAG之后,长59 bp,poly(A)至少含有27个A;3′NCR序列具有较高的同源性...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张帅 王崇明 岳志芹 宋晓玲 白昌明 尹伟力 黄倢
为深入探讨急性病毒性坏死病毒(Acute Viral Necrosis Virus,AVNV)魁蚶株的致病机理以及IAP-86蛋白的功能,从感染AVNV的濒死魁蚶外套膜中提取总RNA,反转录获得c DNA。根据NCBI公布的AVNV全基因组序列中ORF86序列设计两对反向套式引物,通过c DNA末端快速扩增(RACE)技术获得ORF86 5?端和3?端的非编码区,拼接获得全长c DNA序列。Blast序列比对显示,该基因与牡蛎疱疹病毒的同源性为100%,与栉孔扇贝AVNV的同源性为99%,并存在重叠基因。生物信息学分析预测,该蛋白不含信号肽,不存在跨膜区,最大疏水指数为1.800,最小疏水指数...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨宁宁 徐明国 张江伟 易继海 陈创夫
为了探讨牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白NS3(P80),并获得具有较高免疫原性的NS3重组蛋白，利用生物信息学研究方法对NS3蛋白氨基酸进行序列分析；经PCR技术扩增NS3基因序列；通过无缝克隆技术构建pET-22b(+)-NS3重组表达质粒，将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，诱导其表达NS3重组蛋白并提纯；通过Western Blotting方法检测其反应原性；将获得的较高纯度的NS3重组蛋白免疫BABL/c小鼠，收集血清，ELISA方法分别检测血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平；最后通过病毒中和试验检测其中和病毒的能力。结果表明：NS3蛋白氨基酸序列中无信号肽和跨膜区，二级结构主要以无规则卷曲为主，且NS3氨基酸序列中含有优势抗原表位；利用PCR和无缝克隆技术成功构建了pET-22b(+)-NS3重组表达载体，经诱导表达获得了较高纯度的NS3重组蛋白，大小约为75 ku,与理论大小相符；Western Blotting结果表明，NS3重组蛋白具有较高的反应原性；ELISA检测NS3重组蛋白免疫后的小鼠能够产生高水平的IgG、IgG1和IgG2a抗体，结果显示，免疫组小鼠产生的抗体水平极显著高于PBS阴性对照组(P<0.01);血清中和抗体水平也极显著高于PBS阴性对照组(P<0.01)。总之，成功获得了纯度高且具有免疫原性的NS3重组蛋白。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐为燕
兔病毒性出血症是中国首先报道的一种毁灭性传染病。此病在各种病名下遍及欧洲大部分地区，但均无病原特征的描述。兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）是一种新发现的病毒，直径３２～３４ｎｍ，二十面体对称，无囊膜，存在于感染细胞的核和胞浆内。它对酸（ｐＨ３）、热（６０℃）、乙醚（２０％）和ＭｇＣｌ２（１ｍｏｌ／Ｌ）有坚强的抵抗力。在ＣｓＣｌ中的浮密度为１．３６～１．３８ｇ／ｃｍ２；在蔗糖梯度中的沉降系数为１６２Ｓ。它能凝集人红细胞，滴度可达１０×２１８以上。在细胞培养中很难适应。核酸为线状单股ＤＮＡ，末端有发夹结构。用体外合成的双股ＤＮＡ，取其酶切片段插入ＢＳ质粒后，转化ＤＨ大肠杆菌。从重组质粒提取的２个片段（ｐＹ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙智锋 杜念兴 徐为燕
通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对６株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定簇，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。单抗的识别表位与其生物学活性密切相关
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵立红 范立中 徐福南
对兔出血症的凝血象和组织病理学变化进行了动态研究。结果表明：兔出血症伴有弥漫性血管内凝血（ＤＩＣ）病理过程，并呈动态发展规律。凝血象检测发现：感染后６ｈ凝血酶原时间（ＰＴ）、白陶土部分凝血活酶时间（ＫＰＴＴ）缩短或正常，为高凝期，该期短，很快进入低凝期。感染后１８ｈＰＴ、ＫＰＴＴ显著延长，死前更明显。血小板数（ＰＣ）呈渐进性降低，纤维蛋白（原）降解产物（ＦＤＰ）在感染后６ｈ显著增加（Ｐ＜０．０１），感染后１８ｈ达高峰值。组织病理学观察表明：肺的病变严重而且有规律，感染后１２ｈ肺的微血栓检出率最高，同时在心、肝、肾、脑等器官也见微血栓。感染后２４ｈ或死兔的肺出血严重，血栓少见，表现为纤溶亢进的特...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘伟 王恩丽 柳纪省 杨彬 兰喜
利用RT-PCR方法从猪沙波病毒CH430株中克隆出非结构蛋白p70基因并测序,结果显示,p70基因全长1 995 nt,编码665个氨基酸,经同源性比对及遗传进化树分析表明,CH430株为基因Ⅲ型沙波病毒毒株。生物信息学分析显示该蛋白理论等电点(pI)为5.96,理论分子质量为72 876.6 u;其序列上共发现25个磷酸化位点,分别为Ser(6)、Thr(13)、Tyr(6),而蛋白的磷酸化与信号传导有关,预测该蛋白为一重要的信号传导分子;无信号肽和跨膜区;该蛋白含有胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶和RdRp功能域;胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶功能域核心结构为1个由7个β折叠形成柱状结构和1个由1个α螺旋...
[期刊] 水产学报
[作者]
周井祥 李新伟 王好 吕文亮 朱霞
为了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF81蛋白的结构特征和进化关系,用框镜鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取其DNA,经PCR扩增,获得ORF81基因,将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组质粒。应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF81基因的结构和功能,并与GenBank上已公布的3株KHV构建系统进化树。结果显示,获得了长771 bp的ORF81基因,编码256个氨基酸;预测ORF81基因的理论分子量为28 246.50 u,等电点为8.404;疏水性大于亲水性;信号肽切割部位最可能位于29位的S(丝氨酸);有4个跨膜区;抗原表位预测显示抗原性良好;结构预测显示,不...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨丽荣 闫海霞 全鑫 薛保国 达楞巴雅尔
分析了灰斑古毒蛾核型多角体病毒(Orgyia ericaenucleopolyhedrovirus,OrerNPV)EcoR I-O片段分子生物学特征,为研究egt基因分子特性和杆状病毒遗传改良提供科学依据。克隆和分析了OrerNPVEcoR I-O片段所包含的2个基因,并应用生物软件对OrerNPV蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶(egt)基因及其启动子进行了比对分析。结果表明OrerNPVEcoR I-O片段包含egt基因和Ol-129同源基因,在该区域中编码egt基因的开放阅读框(ORF)由1 539个核苷酸组成,可以编码512个氨基酸,预计蛋白质分子质量为57.9 kDa。OrerNPV和...
[期刊] 水产学报
[作者]
徐黎明 刘洪柏 卢彤岩
基质蛋白(matrix protein,M)是传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoieticnecrosis virus,IHNV)主要结构蛋白之一,是病毒感染后造成细胞凋亡的主要作用蛋白。为分析IHNV M蛋白的序列及结构特征,研究利用敏感细胞(EPC)培养传染性造血器官坏死病毒-Sn分离株(IHNV-Sn),根据M蛋白基因开放阅读框(open reading frame,ORF)的序列设计引物,利用RT-PCR的方法克隆得到M蛋白全长ORF,并且构建至表达载体pET27b(+)中,构建出pET27-M重组质粒。生物信息学分析结果显示,M蛋白基因的序列长度为588...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙智锋 杜念兴 徐为燕
将抗兔出血症病毒(RHDV)的 AA8-1和 CG4-1两株单抗(McAb)分别致敏双醛化人红细胞,混合后建立单抗反向间接血凝(McAb-RPHA)方法。其敏感性较常规血凝试验(HA)高256倍,最小检出量为0.214 ng/ml。此法对感染兔的心、肝、脾、肺、骨髓、血液等检出率均为100%;脊髓、淋巴结、肌肉等组织的检出率分别为62.5%,58.3%和37.5%。HA 的检出率除肝为100%外,其余均低于 McAb—RPHA,不能检出脊髓、淋巴结和肌肉样品中的病毒抗原。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杜娟 兰文升 刘荭 郑晓聪 陈孝煊
通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48ku。诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
包世俊 邢小勇 丁小琴 高翔 安凯 伏小平 薛慧文
马麝(Moschus chrysogaster,Alpine Musk Deer)是中国特有的一种麝属动物资源,属于世界自然保护联盟(IUCN)"濒危"级野生动物。其主要分布于青藏高原及周边区域,包括青海、宁夏贺兰山、甘肃祁连山及肃南山地、四川西部地区、云南北部高山地区及西藏东南部,其中以甘肃兴隆山马麝种群密度较大。20世纪90年代初,兴隆山国家自然保护区建立了中国第一个马麝人工驯养基地。但随着基地养殖规模的扩大及马麝种群
关键词：
病毒性出血症
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙雪婧 杜晓华 杨孝朴 罗玉柱 刘霞
【目的】丰富牦牛CYGB基因研究的基础数据,对牦牛CYGB基因的CDS区进行克隆和生物信息学分析。【方法】提取牦牛大脑海马区组织的总RNA并运用RT-PCR技术反转录为cDNA,并根据GenBank中普通牛CYGB基因cDNA序列(GenBank登录号:DV874786.1),使用Primer3.0在线软件设计特异性引物,运用PCR扩增技术、TA克隆技术和核酸测序技术获得CYGB基因的完整CDS区序列及部分5′端和3′端UTR区,并使用ProtParam、PredictProtein、SWISS-MODEL等在线分析软件与Lasergene7.1软件包分析CYGB的一级结构、二级结构、三级结构...
关键词：
牦牛 胞红蛋白 基因克隆 生物信息学
[期刊] 水产学报
[作者]
贾志磊 王崇明 任伟成 梁彦韬 曲朋 李赟
根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建表达质粒pET32a-dut。然后,将其转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,诱导表达蛋白分子量约为46 ku,与预期表达蛋白大小一致。经Western-blotting及质谱分析鉴定,所表达蛋白即为重组dUTPase。表达产物经Co2+柱纯化后进行酶学活性测定。结果显...
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