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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
江成 林二培 黄华宏 童再康
为了挖掘光皮桦材性相关基因,本研究以光皮桦木质部为材料,通过对RNA的提取、cDNA的反转录及纯化的对比分析,以及选扩体系优化等,建立了相应的cDNA-AFLP体系。结果表明:采用CTAB和RNAiso试剂相结合的方法得到的RNA质量较好,cDNA经纯化后选扩效果明显变好。选扩体系为:4.0μL预扩产物(稀释40倍)、1.6μL的引物(10.0μmol/L)、0.2μL的dNTP(2.5 mmol/L)、0.4μL的Mg2+(25.0 mmol/L),以及0.2μL的Taq DNA聚合酶(5 U/μL)。进一步以来自不同木质化茎段的cDNA为模板,筛选出31对扩增效果较好的引物组合,同时分离出...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 连森阳 傅星源 王光瑛 李昂
以番鸭脑垂体为材料,用Trizol法提取总RNA,用Superscipt II-RT合成第一链cDNA,RNase H和DNA Polymerase合成第二链cDNA,最后用EcoRⅠ/MseⅠ分步酶切cDNA各2 h,经T4连接酶合成双链cDNA,预扩增反应后产物稀释40倍进行选择性扩增反应.经1%琼脂糖电泳及6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的结果显示,番鸭脑垂体总RNA的提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好.番鸭cDNA-AFLP反应体系的建立为番鸭就巢的分子机理研究奠定了基础.
关键词：
番鸭 cDNA-AFLP 体系建立
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙涌栋 李贞霞 张兴国 陈碧华 李新峥
以黄瓜为研究材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜黄瓜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明,适用于黄瓜dscDNA的酶切组合为TaqI和VspI,dscDNA酶切用量为300 ng,用作预扩增模板的连接产物稀释倍数为1倍,作为选择性扩增模板的预扩增反应产物的适宜稀释倍数为30倍。
关键词：
黄瓜 cDNA-AFLP 分析体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
王文跃 李国瑞 黄凤兰 尚雨丝 王超 罗蕊 邱靖 王丹 张智勇 陈永胜
以蓖麻茎秆为试材,研究了影响cDNA-AFLP标记蓖麻差异基因反应体系的几个关键因素,建立了适宜蓖麻的cDNA-AFLP分析体系。结果表明:当裂解液为1.4 mL时提取的RNA浓度最高,EcoRⅠ和MseⅠ的组合6 h可将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物用于预扩增,预扩增产物稀释15倍时作为选择性扩增模板可以获得条带丰富且重复性好的结果。蓖麻cDNA-AFLP反应体系的建立为进一步研究蓖麻株高、叶型等相关基因奠定了基础。
关键词：
cDNA-AFLP 蓖麻 体系建立
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
马洪双 夏新莉 尹伟伦
以胡杨为研究材料,建立适用于胡杨抗逆研究的cDNA-AFLP反应体系,对影响反应体系的关键因素(RNA提取、内切酶组合、预扩增体系、选择性扩增体系)进行了探索和优化。结果表明:通过改进后的CTAB法能成功获得高质量的RNA;EcoRⅠ/MseⅠ的组合4.5h内将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物直接用于预扩增;稀释10倍的预扩增产物作为模板用于选择性扩增;通过优化体系得到的选择性扩增产物,银染检测后条带清晰稳定,经RT-PCR检测,证明优化后的cDNA-AFLP技术差异显示的结果可以准确反映基因在植物体中差异表达的真实情况,并利用该技术成功筛选出42对可以获得带型丰富且重复性好的...
关键词：
胡杨 cDNA-AFLP 抗逆机制
[期刊] 华北农学报
[作者]
唐美玲 孔瑾 徐维华 韩振海
以山葡萄品种左山一的叶片和花芽为材料,对cDNA-AFLP体系的几个关键因素进行摸索,建立了适宜山葡萄的cDNA-AFLP反应体系。结果表明,提取山葡萄的花芽RNA适宜用改良的CTAB法,提取叶片RNA适宜用SDS-酸酚法。在2×Y/TBuffer的作用下,500 ng的cDNA利用MseI与EcoRI双酶切4 h即可酶切完全,将16℃连接过夜的产物稀释5倍作为预扩增的模板,预扩增产物稀释20倍作为选扩模板能获得带型稳定可重复性好的结果。
关键词：
山葡萄 cDNA-AFLP
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
尤卫艳 黄华宏 程龙军 童再康 朱玉球
采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-硅珠法提取光皮桦Betula luminifera嫩叶DNA,利用近缘种日本白桦B.platyphylla var.japonica和欧洲白桦B.pendula的引物,建立光皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析。结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量、Mg2+浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500mmol·L-1,1.0×16.67nkat时结果最...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郑杰 于颖 贺卓熙 路明远 孙宇 尹天龙 王超
【目的】木质部细胞壁的组成及特性是决定材性的重要因素，研究木质部细胞壁形成的分子调控机制对于木材改良具有重要意义。本研究探究了白桦木质部原生质体初生壁再生过程的分子调控机制，并鉴定出重要调控基因，旨在为林木材性性状研究提供数据和材料。【方法】分别以培养0 h和2 h的白桦木质部原生质体为材料，通过荧光增白剂染色观察初生壁再生过程。利用转录组分析技术研究初生壁再生前后的差异表达基因及其参与的调控途径，将检测到的差异表达基因在GO、KEGG、PlantTFDB数据库中进行比对分析。【结果】荧光显微镜观察结果显示：原生质体分离后不具有细胞壁，培养2 h再生初生细胞壁。以|log2(FC)|≥1(FC为差异倍数)且q
关键词：
白桦 原生质体 初生细胞壁再生 转录组
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈晓凤 黄凤兰 李国瑞 王文跃 张智勇 包春光 吴春桃 张现世
以蓖麻种子为研究对象,优化其cDNA-AFLP反应体系,为研究不同蓖麻材料或不同发育阶段的蓖麻种子内脂肪酸基因表达差异奠定理论基础。试验结果表明:提取蓖麻种子总RNA;将RNA逆转录为cDNA,用高频限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ进行酶切,并与EcoRⅠ、MseⅠ接头连接,得到连接产物;连接产物稀释40倍作为预扩增模板,进行预扩增;优化选择性扩增反应体系,得到最佳反应体系为:10×PCR Buffer 2.0μL、dNTPs(10 mmol/L)1.4μL、Mg2+(25 mmol/L)1.4μL、模板稀释80倍1.0μL、Ex扩增引物(50 pmol/μL)1.2μL、My扩增引物(50 ...
关键词：
蓖麻 脂肪酸 cDNA-AFLP
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙晓敏 陈争 王京京 童再康 李美飞 张敏
【目的】建立光皮桦叶片高效再生体系,为光皮桦的良种培育及遗传转化研究提供依据。【方法】以光皮桦无菌叶片为外殖体,分别用含0.6mg/L TDZ的MS、WPM和1/2MS培养基进行不定芽诱导分化,筛选最佳基本培养基;向筛选出的最佳基本培养基中添加0.05mg/L NAA及不同质量浓度(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2mg/L)TDZ的激素组合组成不定芽分化培养基,用于诱导不定芽分化,筛选最佳不定芽诱导分化培养基;以1/2MS培养基为基本培养基,分别附加0,0.05,0.1,0.5,1.0,2.0mg/L的IBA或0.5,1.0,2.0,3.0mg/L的NAA组成生根培养基,...
关键词：
光皮桦 叶片外植体 再生体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵继荣 雒淑珍 张增艳 刘红霞
cDNA-AFLP是一种新的mRNA指纹图谱技术,具有重现性高、准确、可靠的特点,可对生物体转录组进行全面分析,广泛应用于基因表达特性研究、植物遗传标记分析和分离植物基因等方面。近年来随着该技术的不断发展和应用,在研究中取得了很多成果。本研究就cDNA-AFLP技术的原理和特点,在植物基因表达研究中的应用现状和发展前景进行了综述。
关键词：
cDNA-AFLP mRNA 基因表达
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
陈争 姜小凤 童再康
为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg.L-1DNA模板,0.500μmol.L-1引物,1.250 mmol.L-1Mg2+,0.250mmol.L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat.L-1rTaq酶。通过梯度PC...
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
郭金剑 池伟 赵鑫珠 王丽 曾燕如 张秋月
以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料,利用改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法与CTAB裂解-硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP(扩增片段长度多态性)分析体系进行了摸索。结果表明:"!改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;#"采用EcoR I/MseⅠ酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;&%适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT+M-CAT,E-ACT+M-CTG,E-ACG+M-CAT,E-ACG+M-CTG。扩增产物经60 g.L-1变性聚丙...
[期刊] 林业科学
[作者]
刘雪梅 刘瀛 宋福南 邢磊 戴超 杨传平
白桦是雌雄同株的单性花树种,已发现的天然的雄花序突变体,其结构和生殖发育均不同于正常雄花序,显示出明显的雄性不育特征。为揭示该雄花突变体的发育机制,采用cDNA-AFLP分子标记技术,分析白桦雄花突变体发育早期的差异基因表达谱,共获得81个ESTs,51个ESTs与GenBank中的基因相似性较低,视为新基因,30个ESTs与已知蛋白具有较高同源性。GO和KEGG对其功能的注释表明,这些蛋白参与催化活性、结合活性、生物调节信号转导、生物合成以及基因编码转录因子和花发育等过程。选择5个与白桦花发育有关的ESTs,分别为MAP激酶、泛素结合酶、纤维素合成酶、热激蛋白和细胞色素P450,应用Real...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李大志 陈霄 邓子牛 杨宇红 熊兴耀 谢丙炎
应用cDNA-AFLP技术研究番茄根部组织应答BABA(β-Aminobutyric Acid,β-氨基丁酸)诱导后基因转录谱,得到与植物获得性抗性相关的差异表达片段29条,克隆测序后获得10个上调基因片断.经过生物信息学分析和功能预测,其同源基因都是植物体在抗病、抗逆反应中的表达序列标签.根据功能可将其分为5类:第1类是防御反应基因,为病程相关蛋白基因P69家族成员,具有蛋白水解酶功能;第2类是转运蛋白基因,负责细胞内外离子、水和小分子物质的跨膜运输;第3类是信号传导蛋白,是Ca2+信号传导途径上重要的功能蛋白;第4类是分子伴侣蛋白BIF1,协助蛋白质的复性;第5类属功能未知基因.研究表明:...
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