本文简述本研究所农产品品质研究的进展情况:(1)高赖氨酸蛋白基因转化杂交水稻恢复系,T5代转基因稻米的赖氨酸含量最高的株系比CK高46.9%;(2)发掘出稻米中分别富含钙、铁、锌、硒、黄酮、谷维素、γ-氨基丁酸、辅酶Q10的水稻优异种质;(3)发掘出甘薯中富含DHEA和β-胡萝卜素、葡萄中富含白藜芦醇和原花青素、茶叶中富含EGCG和茶氨酸的优异种质;(4)发掘出水稻、小白菜Cd和Pb累积量低的优异种质;(5)克隆出甘薯β-胡萝卜素,黄芪异黄酮,人参皂甙,水稻谷甾醇、γ-氨基丁酸和茶树EGCG等6种活性成分生物合成的9个关键酶基因.

水稻是中国重要的粮食作物之一，高产与优质一直是品种改良的主要目标。目前，中国稻米品质表现总体偏低，在一定程度上影响了其市场竞争力。稻米品质属综合性状，是指稻米或稻米相关产品满足消费者或生产加工需求的各种特性，主要涉及稻米的物理和化学特性，包括精米率、米粒形状、透明度、蒸煮时间、米饭质地与香味、冷饭质地以及营养成分等指标。通常用碾磨品质、外观品质、蒸煮与食味品质和营养品质４个方面来评价稻米品质。近１０年来，在上述稻米品质性状相关基因的克隆与功能研究领域已取得了长足的进展。水稻粒形不仅是重要的产量性状也是碾磨和外观品质的重要决定因素，目前已克隆了多个粒形相关的ＱＴＬ和基因。根据粒形相关基因的表型效．．．

大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ ｌ．）是世界上重要的经济作物，为人类生活提供所需的食用油和植物蛋白。大豆油脂、蛋白质和异黄酮含量决定了大豆的经济价值，大豆品质的优劣直接关系到食用者的身体健康，因此，越来越受到广大科研工作者的关注。大豆油脂脂肪酸组成对油的营养价值、耐储性及加工工艺等都有很大影响。油脂的组成和积累受脂肪酸合成途径中多种酶活性的影响，这些基因的表达还受到转录前、转录和转录后水平的调控，有许多相关基因参与此过程。目前大豆油脂的转录调控研究较多。研究表明，ＧｍＤＯＦ４和ＧｍＤＯＦ１１类转录因子可以激活乙酰辅酶ａ羧化酶和长链脂酰辅酶ａ合成酶，从而提高了种子油分含量。转录因子ＧｍｍｙＢ７３可．．．

端粒与寿命、衰老关系密切;而端粒相关蛋白调控端粒酶活性,从而影响端粒长度。然而,端粒或其相关蛋白在植物生长发育以及胁迫响应中的作用机制尚不清楚。因此,本研究以长寿、抗逆的侧柏(Platycladus orientalis)为研究材料,通过对20、500、1 000和1 700年树龄叶片进行RNA-seq分析,发掘PoWHY1、PoKub3和PoTRF1等端粒相关基因;采用实时定量qRT-PCR技术,研究侧柏幼苗在NaCl、H2O2、ABA胁迫处理下,这些端粒相关基因的响应模式变化;并在侧柏古树(500年)

为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子...

近20多年来,我国作物种质资源保存取得了令人瞩目的成就。至2002年底,国家已初步建立起作物种质资源保存体系,包括国家长期库和国家复份库各1座,中期库8座。长期库贮存种质已达33.4万余份,隶属35科192属712种,贮存数量居世界第一位。国家种质圃30个,共保存无性繁殖作物及多年生种质4.3万余份,隶属900多个物种。试管苗种质库2个,保存种质2300份。此外还建立了2个野生稻和1个野生大豆原生境保护区。笔者在文中介绍了我国在库存种质持久安全保存技术、超干燥贮存技术和离体保存技术等方面的研究进展,并就当前种质保存研究的几个热点问题予以评述。

为研究维甲酸类X受体 (RXR) 在甲壳动物蜕皮过程中的调控作用，实验采用RACE技术克隆获得罗氏沼虾Mr-RXR基因，通过qRT-PCR分析了Mr-RXR及其他蜕皮相关基因 (MIH、EcR、E75和CHIT) 在罗氏沼虾不同组织、不同蜕皮阶段的表达情况，并采用RNAi探究Mr-RXR对罗氏沼虾蜕皮相关基因表达的调控作用。结果显示，Mr-RXR基因cDNA全长2 241 bp (GenBank No: MZ501612)，包括36 bp的5′末端非翻译区 (UTR) 和719 bp的3′UTR，开放阅读框 (ORF) 为1 386 bp，共编码461个氨基酸。罗氏沼虾RXR氨基酸序列与甲壳动物同源性较高，存在保守的DNA结合域 (DBD) 和配体结合域 (LBD)。Mr-RXR在罗氏沼虾所有组织中均表达，精巢、眼柄、心脏等组织中表达量较高，其表达水平随蜕皮周期改变，眼柄和肌肉组织中均在蜕皮前期表达量最高，与EcR基因表达模式基本同步；E75和CHIT基因表达模式较为相似，眼柄和肌肉组织分别在蜕皮前期和蜕皮后期高表达；MIH基因仅在眼柄组织表达，且蜕皮间期表达量最高。采用3 μg dsRNA/g虾的剂量进行为期12 d的RNAi实验诱导Mr-RXR沉默，罗氏沼虾出现大量死亡，qRT-PCR显示，眼柄和肌肉中Mr-RXR干扰效率分别为79%和55%。眼柄组织中Mr-RXR基因沉默后，MIH基因表达未受影响，EcR、E75和CHIT基因表达水平显著降低，肌肉组织中，Mr-RXR沉默仅造成CHIT基因表达水平的显著下降，推测Mr-RXR可能通过影响EcR、E75和CHIT基因表达调控罗氏沼虾蜕皮过程。本研究结果将为甲壳动物蜕皮调控机制研究提供基础资料。

【目的】克隆朝鲜鹌鹑(Korean quail)OCA2基因的cDNA序列,检测其在不同羽色(白羽和栗羽)群体胚胎发育不同阶段翅组织中mRNA的表达情况,探讨OCA2基因多态性对朝鲜鹌鹑羽色的影响,筛选可能与羽色相关的多态性位点。【方法】取白羽、栗羽朝鲜鹌鹑孵化6,8,10,12和14 d的胚胎翅组织,提取总RNA,RT-PCR扩增OCA2基因cDNA序列,利用实时荧光定量PCR检测OCA2基因mRNA在朝鲜鹌鹑胚胎发育不同阶段和不同羽色鹌鹑胚胎翅组织中的表达水平;用胚胎发育10 d时的cDNA样品扩增OCA2基因cDNA序列并进行生物信息学分析。以300羽白羽朝鲜鹌鹑和栗羽朝鲜鹌鹑孵化10 d时的胚胎为研究材料,采集翅组织样品,提取基因组DNA, PCR扩增OCA2基因,通过不对称PCR-SSCP方法结合测序确定基因型,分析不同基因型对朝鲜鹌鹑羽色形成的影响。【结果】朝鲜鹌鹑OCA2基因胚胎发育6～8 d时的表达量低于胚胎发育10～14 d时的表达量,且在10 d时达到最高。6～8 d时,OCA2基因的表达水平在2种羽色朝鲜鹌鹑胚胎中差异不显著; 10～14 d时,栗羽朝鲜鹌鹑OCA2基因mRNA的表达水平显著高于白羽朝鲜鹌鹑(PG、外显子9上的c.999A>G、3′UTR上的c.2569C>T;群体遗传学分析显示,3个突变位点均表现为中度多态(0.25T位点,栗羽朝鲜鹌鹑3种基因型(CC、 CT和TT)的频率分布与白羽朝鲜鹌鹑存在极显著差异(PT突变与朝鲜鹌鹑羽色性状之间具有一定的关联性,可以作为研究朝鲜鹌鹑羽色的候选基因。

依据马肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以蒙古马基因组DNA为模板,利用PCR技术,扩增出MSTN基因第三外显子序列。将所得片段与PGEM—Teasy载体连接,转化感受态DH5a大肠杆菌。筛选出阳性克隆,酶切、PCR鉴定后,经DNA测序结果表明,所克隆到的MSTN基因第三外显子与文献报道基本一致,有一处单核苷酸有变异。

为了研究冷胁迫处理下的玉米抗坏血酸过氧化物酶的作用,根据GenBank发表的APX基因的ORF序列设计引物,利用RT-PCR从冷胁迫后的玉米自交系(E28)叶片总RNA中经cDNA转化,pMD19-T载体的亚克隆,获得APX基因开放阅读框,长度为753 bp,编码250个氨基酸残基。生物信息学分析显示,APX相对分子质量和理论等电点依次为27.3 kDa和5.56。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a(+)中,APX基因经IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小约为27.3 kDa,与预测结果一致。抗盐分析显示,重组大肠杆菌BL21(pET28-APX)的抗...

【目的】克隆西瓜自交系M08的ClP5CS基因(Cla006553和Cla017928)cDNA序列全长,探究其在抵御干旱和盐胁迫中的作用。【方法】利用西瓜基因组信息,以M80幼叶为材料,克隆Cla006553和Cla017928的编码序列,对其氨基酸序列进行生物信息学分析和同源分析;构建这2个基因的过表达载体转化农杆菌,采用浸花法浸染拟南芥,选取相应转基因T2拟南芥株系,检测其在脱落酸(ABA)、甘露醇、NaCl及干旱胁迫下的发芽率、根长、成活率及脯氨酸含量,研究Cla006553和Cla017928对拟南芥抗逆性的影响。【结果】Cla006553编码序列长2 166bp,编码721个氨基酸;Cla017928编码序列长2 145bp,编码714个氨基酸。Cla006553与Cla017928的核苷酸和氨基酸序列之间的相似性为分别为74.19%和77.12%,其氨基酸序列中含有ATP结合位点、脯氨酸反馈抑制位点、亮氨酸拉链、谷氨酰激酶结构域、NAD(P)H结合位点、亮氨酸结构域、谷氨酸半醛脱氢酶结构域。转Cla006553和Cla017928基因的拟南芥植株在ABA、甘露醇、NaCl和干旱胁迫下的发芽率、根长、脯氨酸含量、成活率等均高于对照,具有较好的耐旱和耐盐能力。【结论】克隆了西瓜P5CS的2个编码基因Cla006553和Cla017928,这2个基因均可增强转基因拟南芥植株的抗逆能力。

介绍了果树核 DNA的提取及目的基因分离的研究方法 ,并对核 DNA的几种主要提取方法的优缺点进行比较 ,列出目前已分离的果树目的基因的名称和性质

稻瘟病是全世界范围内影响水稻粮食生产的主要病害之一。培育和合理利用抗病品种是控制稻瘟病最经济、有效的措施。随着水稻(Oryza sativa)及稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)基因组测序的完成,水稻-稻瘟病菌的互作已成为研究植物与真菌相互作用的模式系统。在过去的50多年中,通过广泛的遗传分析,已经鉴定了84个稻瘟病抗性基因及大量的数量抗性遗传位点(quantitative trait locus)。其中,8个主效抗性基因及1个隐性部分抗性基因已被克隆。本文综述了迄今已鉴定及定位的稻瘟病抗性基因的研究情况,根据基因的定位信息将这些基因整合到一张连锁图谱中;对抗性基因簇以及簇内基因...

脊椎动物Hox族基因是一类重要的生长和发育调控基因,它编码具有螺旋—转角—螺旋结构的转录因子,能与下游靶基因特定区域结合并激活表达,从而调节脊椎动物胚胎发育过程中前后轴的形态建成。利用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)HoxB1b基因的全长cDNA序列,并研究了该基因的表达模式。结果表明:(1)团头鲂HoxB1b基因cDNA全长为1 479 bp,其中包括一个编码306个氨基酸残基的921 bp阅读框,聚类分析结果表明,该基因与斑马鱼、红鳍东方鲀、青鳉的相似度分别为89%、45%、40%,在脊椎动物中具有一定的保守性;(2)RT-...

【目的】旨在研究干扰素ε（Interferon epsilon，IFNE）基因在奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，bMECs）炎症中的表达模式及其潜在的分子功能。【方法】通过PCR和测序技术得到IFNE基因的编码区（Coding sequence，CDS）序列，并采用生物信息学方法分析IFNE基因及其蛋白质的特性；利用RNAi和qPCR技术检测IFNE、干扰素β（Interferon beta，IFNB）、干扰素κ（Interferon κ，IFNK）、半胱天冬酶3（Cystathione aspartase 3，CASP3）、半胱天冬酶9（Cystathione aspartase 9，CASP9）等基因在脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）诱导bMECs炎症反应中的表达量。【结果】IFNE基因的CDS长度为582 bp，可编码由193个氨基酸组成的具有亲水性且不稳定的非分泌蛋白。与对照组（0 h）相比，在LPS诱导3、6、12和24 h的bMECs中白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）的表达量均显著上调（P<0.05），白细胞介素-8（interleukin-8，IL-8）的表达量极显著上调（P<0.01），表明成功构建了炎症细胞模型。在炎症细胞模型构建成功的基础上，采用qPCR检测bMECs内IFNE基因的表达量结果表明，与对照组（0 h）相比，IFNE基因在LPS诱导bMECs第3、6、12和24 h的表达量均极显著上调（P<0.01），且在诱导6 h的表达量最高。RNAi实验结果表明，干扰IFNE可使得炎症性bMECs内的IL-8、IFNB、IFNK和白细胞介素-10受体亚基β（interleukin-10 receptor subunit β，IL-10RB）基因的表达量均显著上调（P<0.05），IL-6、IL-1β、CASP3、CASP9和BAD基因的表达量均呈极显著上调（P < 0.01）。【结论】IFNE基因在LPS诱导的bMECs炎症反应中的表达量极显著上调（P<0.01），干扰IFNE基因可通过调控IL-6、IL-8、IL-1β、IFNB、IFNK、CASP3和CASP9等基因的表达而缓解bMECs炎症反应，为奶牛乳房炎的分子治疗和抗乳房炎分子育种奠定了理论基础。