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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘家强 李锦春 谭勋 王金勇 孙卫东 王小龙
采用组织贴块法培养肉鸡肺动脉内皮细胞(PAEC),并依据细胞形态学特点和凝血因子Ⅷ相关抗原免疫组化染色结果对所培养的细胞进行鉴定。以黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(X/XO)系统作为氧自由基发生系统建立PAEC氧化损伤模型。结果表明:肉鸡PAEC在体外能够存活并传5-6代。形态学观察和Ⅷ因子抗原免疫组化染色检查证明培养的细胞符合肺动脉内皮细胞的特点。氧自由基能够明显损伤PAEC,X/XO系统作用下细胞生长被抑制,甚至导致细胞死亡,并且这种抑制作用对XO有剂量依赖性。与正常对照组相比,损伤组PAEC培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量升高,提示氧自由基促进了PAEC的脂质过氧化。这说明氧自由基对肉鸡...
关键词：
肉鸡 肺动脉内皮细胞 脂质过氧化损伤
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韩燕燕 刘思当 杨鹰
探索简单快速实用的鸡胚肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞培养方法:在严格无菌条件下对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞分离培养,待细胞融合度达约80%时进行传代,得到的内皮细胞利用差速消化法纯化,并观察2种细胞形态特征及培养特性,待细胞稳定生长后,采用荧光免疫组化技术鉴定细胞,并进行冻存和复苏,观察复苏后细胞活性。结果显示:24 h后组织块周围即有少量细胞爬出,内皮细胞大量生长后呈突起状排列,立体感强,平滑肌细胞在培养后的第5天呈现"峰谷"样外观,经免疫荧光法证明是内皮细胞和平滑肌细胞的纯培养,冻存于液氮中1~2个月复苏后细胞的活性都较好,可以恢复旺盛生长。结论:本研究提出的组织贴块法能成功获得内皮细胞和平滑...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘家强 李锦春 谭勋 孙卫东 王小龙
目的对比观察常温和低温饲养条件下肉鸡肺动脉压、血液脂质过氧化水平和肺阻力血管显微结构的变化,以探讨肺血管重构的机理及其在肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)形成中的病理意义。方法商品代艾维茵肉鸡180羽,14日龄时随机分为两组,一组为常温对照组,按常规饲养;一组为低温诱病组。试验过程中连续测定肉鸡平均肺动脉压(mPAP)、右心/全心比(RV/TV);测定血浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)水平;采集肺组织进行弹力纤维染色,应用计算机图像分析系统测定肺小动脉平均中膜厚度(mMTPA)和相对中膜面积(WA/TA)。结果低温组mPAP,RV/TV值和血浆M...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
柴娟 胡玉霞 毕师诚 谭勋
为探索内皮素-1(ET-1)对肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC)体外增殖的影响及其发挥效应的受体途径,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ET-1对PASMC体外增殖的刺激作用,并分别观察内皮素A受体(ETAR)拮抗剂BQ123和B受体(ETBR)拮抗剂BQ788对ET-1作用下的肉鸡PASMC增殖的影响。结果表明:ET-1可显著刺激肉鸡PASMC的增殖(P0.05)。结论:ET-1具有促肉鸡PASMC增殖的作用,此作用受ETAR介导。
关键词：
内皮素受体 肺动脉平滑肌细胞 肉鸡
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
郭洋 伊鹏霏 吕钊君 白慧云 韦旭斌 杜绍范 穆祥
探讨大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,为研究猪链球菌引起脑膜炎的致病机理打下基础。采用脑组织匀浆、二次过筛及酶消化技术分离大鼠脑微血管段,对分离的脑微血管内皮细胞进行了体外培养、形态学观察、免疫荧光鉴定及生长曲线的MTT法测定。结果表明:倒置显微镜下,细胞具有单层"铺路石样"排列的典型特征,免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,成功建立了大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法。
关键词：
大鼠 脑 微血管内皮细胞 培养 鉴定
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王攀 陶晓莉 沈祖楠 李和刚 潘杰 牟玉莲 李奎
【目的】探讨五指山小型猪近交系主动脉内皮细胞体外分离培养和鉴定的方法,研究LPS对内皮细胞TLR2表达的影响及TLR2介导内皮细胞炎症因子的表达情况。【方法】以3—4月龄的五指山小型猪近交系为试验材料,取其胸腹主动脉,采用0.1%I型胶原酶消化分离主动脉内皮细胞。利用细胞吸收DiI-Ac-LDL试验和流式细胞仪检测CD31的特异表达两种方法进行内皮细胞的鉴定。1μg.mL-1LPS刺激内皮细胞0、6、8和12 h,实时荧光定量PCR检测TLR2和TLR4的表达量;1μg.mL-1LPS刺激内皮细胞12 h后,10μg.mL-1LTA孵育0、6和12 h,实时荧光定量PCR检测炎症因子IL-6、...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙得发 董丽 屈长波 吕佳琪 钟翔 王恬
[目的]研究不同油脂水平日粮中添加α-生育酚琥珀酸酯(α-tocopherol succinate,TOS)对肉鸡过氧化及脂代谢的影响。[方法]选用1日龄AA肉鸡480只,随机分为8组各6个重复,每个重复10只,采用2×4因子设计,即基础日粮(N)和高脂日粮(H),4个生育酚处理:50 mg·kg-1α-生育酚醋酸酯(α-tocopherol acetate,TOA),50 mg·kg-1(TOS1)、100 mg·kg-1(TOS2)和150 mg·kg-1(TOS3)TOS,试验分前后两期共42 d。[结果]与基础日粮对照组比,高脂日粮组油脂极显著降低料肉比(P<0.01),生育酚的添加极...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
董世山 乔健 赵立红 孙茂红 张建军 田勇
应用组织贴块法、贴块配合差速贴壁法成功培养不同日龄鸡的肺动脉平滑肌细胞。一般需 4～ 7d细胞从组织块边缘长出 ,再经 5～ 1 0 d长成细胞单层。鸡日龄越小培养的肺动脉平滑肌细胞生长越旺盛。培养的肺动脉平滑肌细胞呈梭形、三角形 ,圆形核位于中央 ,胞浆丰富致密。用兔抗鸡α- actin多克隆抗体为一抗做免疫组化染色 ,平滑肌细胞占 95%以上
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨鹰 武振龙 张建军 孙茂红 董世山 高铭宇 欧德渊 范春艳 刘文菊 田勇 乔健
为研究验证内皮素-1(endothelin1,ET-1)是否参与肉鸡腹水肺动脉高压的发病过程,用低温环境下饲养的肉鸡,腹腔注射ET1受体拮抗剂BQ123,检测几项肺动脉高压指标。结果表明:在处理后7和15d,低温空白对照组和低温生理盐水对照组肉鸡肺动脉压和右心室内压显著低于常温空白对照组(P<0.05),低温+BQ123组与常温对照组相比没有显著差异,而显著低于2个未注射BQ123的低温组(P<0.05);各组之间的红细胞压积(PCV)和腹水心脏指数(AHI)在处理后7d都没有显著性差异,而到14d,低温对照组的PCV和AHI显著高于BQ123处理组和常温对照组(P<0.05)。结果说明ETA...
关键词：
内皮素-1 拮抗剂 肉鸡腹水 肺动脉高压
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冯京海 张敏红 郑姗姗 谢鹏 李军乔
【目的】研究高温和氧化应激对体外培养肉鸡骨骼肌线粒体功能的影响,初步探讨高温影响肉鸡肌肉品质的机制。【方法】从16只2周龄AA肉鸡的左右小腿后侧分离腓骨长肌,使用不锈钢支架维持肌肉束的正常长度,在95%O2、5%CO2混合气体饱和条件下,体外孵育2h。分别测定升高孵育温度或在培养介质中添加邻苯三酚后,肉鸡腓骨长肌线粒体活性氧(ROS)产量、钙泵(Ca2+-ATPase)活性和乳酸含量的变化。【结果】升高培养温度显著提高肉鸡骨骼肌线粒体H2O2的产生量(P<0.0001),并影响肌纤...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杨悦 刘鸣畅 王凯 吴黎明 杨艳歌 吴亚君
为研究油菜蜂花粉总黄酮(rape bee pollen flavonoids,RBPF)抗心血管疾病的作用机制,以RBPF为研究对象,利用人工建立的血管内皮细胞氧化损伤模型,对RBPF的抗氧化活性进行初步研究,在体外水平探索RBPF对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。采用超声醇提及大孔树脂纯化的方法提取富集RBPF,同时采用过氧化氢叔丁醇(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导细胞氧化损伤,建立人脐静脉内皮融合细胞系EA.hy926的氧化损伤模型,并利用此模型研究RBPF在细胞水平
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谭勋 潘家强 李锦春 刘艳娟 孙卫东 王小龙
240羽商品代肉鸡于14d时随机等分为常温对照组(NT),低温组(LT)和低温加L精氨酸(L arg)组(LA)。自14d起,对LT和LA组肉鸡采用低温诱导肺动脉高压综合征(PHS)。此外,LA组自14d起在饲料中按100mg·kg-1剂量添加L arg。测定右心室/全心室(RV/TV)和血浆一氧化氮(NO)水平。肺组织切片经βNADPH组织化学染色后,检测直径在100～200μm的肺小动脉平均光密度(D)值,以D值代表NOS的活性。结果显示:LT组PHS发病率显著高于对照组(P0.05),但显著低于LT组(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
洪海霞 张彦明 孙裴 苏正元 魏中锋 张永国
采用1g/L胶原酶灌注猪脐静脉,消化分离内皮细胞并在适宜条件下培养。对培养细胞的生长特性进行检测,并对细胞进行第 因子相关抗原(F- RAg)和扫描电镜形态学鉴定。结果表明,70%细胞在24h内贴壁,第3～5天生长迅速,第4～5天长成单层。培养的细胞呈单层贴壁生长,典型铺路石状,第 因子相关抗原(F- RAg)检测阳性,证明培养的细胞为血管内皮细胞。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
王海桃 刘赛
采用人脐静脉内皮细胞株ECV304体外培养的方法,复制过氧化氢(H2O2终浓度为50μg/ml)诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型,应用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,采用化学比色法分别检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性。结果显示,与正常对照组相比,过氧化氢损伤的血管内皮细胞其GSH-PX活性、T-AOC、NO含量及T-NOS活性均明显降低(P<0.01),iNOS活性明显增加(P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王慧煜 乔健 高铭宇 杨鹰 利凯 欧德渊 王建琳 田勇
为探讨内源性内皮素-1(ET-1)是否参与肉鸡血压的维持等生理调节活动,采用急慢性给予内皮素ETA受体的特异性拮抗剂BQ123,研究内源性ET-1对正常肉鸡股动脉压和肺动脉压的影响。结果表明:1)放免法检测2~6周龄正常肉仔鸡血浆(从(40.82±1.90)升高到(93.70±11.19)pg/mL)和肺匀浆内皮素(从(503.84±27.40)升高到(701.04±16.18)pg/g)的含量随日龄的增加有升高的趋势;2)急性翼静脉注射BQ123(0.4和2.0μg/kg)能够极显著降低肉鸡的股动脉收缩压、舒张压和肺动脉收缩压、舒张压(P
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