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[期刊] 中国水产科学
[作者]
施志仪 杨显祥 李勇 李巍
通过光学显微镜、透射电镜、流式细胞仪等方法对体外培养的三角帆蚌(Hyriopsis cumingiiLea)外套膜细胞进行观察和检测,证明其具有与蚌体内细胞相同的生物学结构、分裂增殖能力和分泌珍珠质的生物活性。在此基础上,对三角帆蚌有核珍珠培育技术进行探讨。将培养细胞黏附在表面经过促黏壁物质处理的珠核表面,再插入育珠蚌体内培育,120 d后,蚌体内可形成完备的珍珠囊,并在珠核表面有明显的珍珠质沉积;6个月后,珍珠质可将整个珠核包裹起来形成有核珍珠。本研究初步证明了细胞法培育有核珍珠的可行性。[中国水产科学,2007,14(1):149-154]
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
靳雨丽 施志仪 李文娟 郝莹莹 强刚
为得到大颗粒优质的淡水有核珍珠,进行了游离细胞植入法在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)内脏团插核育珠的研究。实验采用两种培养基(培养基1、2)进行外套膜外膜细胞的培养,对不同培养时间(2、4、6、12 h)的细胞活力进行检测,同时将处理过的珠核分别置于两组细胞悬液中共培养,6 h后采用内脏团插核手术,对500只三角帆蚌进行插核,并进行为期5个月的淡水有核珍珠生产实验。实验结果表明:细胞活力随培养时间逐渐增大,培养到6、12 h时,两种培养基中的细胞活力较2、4 h时均有显著提高(P0.05);细胞在两种培养基中分别培养,在培养2...
关键词：
三角帆蚌 细胞培养 内脏团插核 有核珍珠
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李倩 施志仪 李文娟 黄凯 祁晓翔
以DMEM为基础培养基,通过优化改良培养基及缓冲液的配方,对三角帆蚌(Hyriopsis cumingii Lea)外套膜进行细胞培养,并且以显微观测、RNA/DNA的比值作为该细胞增殖的评价指标,分别对体外培养细胞的迁出时间、速度、数量以及增殖活力进行测定。分别取体外培养第24、108、120小时的细胞进行Hoechst DNA荧光标记,然后将3组标记细胞植入三角帆蚌外套膜中在蚌体内培养,在植入后第24、72、120、168、216小时运用RNA/DNA指标检测活体培养的细胞增殖活力。结果表明,经过优化后的缓冲液和培养基更有利于细胞从外套膜组织中迁出,迁出速度和细胞数量显著增加(P<0.05...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
高金平 李家乐 白志毅
三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜有核珍珠是新兴的珍珠培育技术。为了鉴定影响外套膜有核珍珠质量相关的生长性状，本研究以2龄三角帆蚌为育珠蚌，每蚌植入10颗规格为5 mm的珠核，培育19个月至商品珠，对珍珠质量性状(产珠数/成珠率、最大直径、最小直径、圆度、珍珠层厚度)与育珠蚌生长性状(壳长、壳宽、壳高、活体质量、壳质量、软组织质量)、珠核(最大直径、最小直径、圆度)进行相关及通径分析。结果显示，该批育珠蚌平均成珠率为(70.00±10.82)%，珍珠平均大小(最小直径)为(6.91±0.67) mm，珍珠平均圆度(直径差百分比)为(6.74±7.78)%。珍珠大小、珍珠层厚度与育珠蚌的壳宽、活体质量和壳质量极显著正相关(P < 0.01)，与育珠蚌的壳高和软组织质量显著正相关(P<0.05)；壳宽与珍珠大小和珍珠层厚度的相关系数最大，均为0.69；而成珠率、珍珠圆度与育珠蚌各生长性状均不相关(P>0.05)。壳宽对珍珠大小和珍珠层厚度的直接作用(0.69)及直接决定系数(0.50)最大。研究结果表明，三角帆蚌的壳宽是提升外套膜有核珍珠的大小和珍珠层厚度品质的关键性状。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
黄惟灏 沈智华 童建民 王卓锋
报导了三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)内脏团培育圆形有核珍珠的试验结果。结果显示:插植珠核的7362只手术蚌植核后一个月内成活率99.2%。经23个月养殖后,随机抽取50只。结果留核率达94%,成珠率为86%,其中中高档珠占37.2%。有核珍珠直径在9.4~11.6 mm之间,其中10 mm以上占88.4%。11.6%的珍珠表面有小于3 mm的凸起,未发现带扁而长尾巴的珍珠。试验表明:三角帆蚌内脏团内能培育出高品质的有核珍珠。此外还发现,脱核或核片分离的细胞小片仍可在内脏团内形成珍珠。
[期刊] 水产学报
[作者]
邱安东 石安静
本文对三角帆蚌珍珠囊细胞的分泌活动进行了亚显微结构的研究。发现珍珠囊表皮细胞能积极地进行物质合成 ,这些物质主要是蛋白质、硫酸化粘多糖和中性粘多糖 ,并将这些物质以微绒毛分泌、块状物分泌、细胞间隙分泌和大颗粒分泌等多种方式分泌到珍珠囊腔 ;而位于珍珠囊表皮细胞之间的、来源于外套膜结缔组织的腺细胞则含有丰富的中性粘多糖 ,并通过开口式分泌的方式释放到珍珠囊腔 ,同珍珠囊表皮细胞分泌的物质一起 ,共同参与珍珠结晶层的形成 ;珍珠囊细胞分泌的多样性与珍珠组成的复杂有关 ;珍珠囊细胞的分泌活动具有节律性和区段性的特点 ,这种区段性和节律性的分泌与珍珠多层结晶纤层的形成相适应。
关键词：
三角帆蚌 珍珠囊细胞 腺细胞 分泌活动
[期刊] 中国水产科学
[作者]
曹玉香 陆阿利 李文娟 施志仪 陶家康
研究了淡水珍珠贝——三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)在不同蚌龄下外套膜组织的细胞增殖及生物矿化相关因子活性。选择5组不同蚌龄三角帆蚌(0.5龄、1龄、2龄、3龄、4龄),通过流式细胞技术分析了外套膜细胞的增殖指数(proliferation index,PrI)和胞内Ca~(2+)浓度,并应用实时荧光定量PCR检测了与生物矿化相关的碳酸酐酶(carbonic anhydrase, CA)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)基因的表达并测定其酶活性。结果表明, 2龄蚌的外套膜细胞PrI及胞内Ca~(2+)浓度显著高于其他蚌龄(P<0.05)。本研究旨为深入探讨三角帆蚌外套膜细胞增殖能力及人工育珠过程中供体蚌的选择奠定基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李文娟 黄凯 李倩 祁晓翔 尚朝 周子睿 付元帅 施志仪
对三角帆蚌(Hyriopsis comingii)内脏团不同部位进行插核,研究各组珍珠囊形成、结构以及珍珠质沉积的差异,从而确定出有利于珍珠形成的插核核位。实验选取内脏团5个部位(I:斧足内脏团前端;II:斧足内脏团中部;III:近生殖腺部;IV:近胃部;V:近肾部)进行插核,并分别在插核后第20、50、90、150天(thd)采集内脏团插核部位进行组织固定,利用石蜡切片、HE染色研究不同插核部位珍珠囊结构及珍珠质沉积情况。结果表明:(1)插核施术后20 d,II组插核位点最早形成单层低柱状上皮细胞,为次生珍珠囊;(2)插核施术后50 d,I、II、III组均形成了珍珠囊上皮细胞,而IV、V组...
关键词：
三角帆蚌 内脏团插核 珍珠囊 珍珠质
[期刊] 水产学报
[作者]
胡宏辉 白志毅 郭思鹏 冯上乐 孙田洋 陈卫民
为了探寻三角帆蚌胚胎体外培养方法,本实验以解剖获得的雌雄配子为材料,使用与三角帆蚌体液等渗的平衡盐溶液(BSS)进行人工体外受精和体外培养,观察各阶段胚胎的形态特征,并分析计算不同胚胎发育阶段的生物学零度和有效积温。结果显示,在温度为(25±1)℃的BSS培养条件下,受精卵发育至第二极体排放、二细胞期、四细胞期、八细胞期、十六细胞期和桑葚期的时间分别为1.8、2.8、5.6、10.5、13.9和17.3 h,胚胎最长发育至桑葚期后停止发育。另外,池塘平均水温分别为26.5、28.1和29.2℃时,三角帆蚌胚胎发育至成熟钩介幼虫分别需要10、9和8 d,计算得出三角帆蚌胚胎发育的生物学零度为14.81℃,根据生物学零度计算胚胎发育至卵裂期、囊胚期、原肠期、膜内钩介幼虫期和成熟钩介幼虫的有效积温分别为12.95、25.99、42.27、69.21和118.14℃×d。研究结果初步尝试对三角帆蚌受精卵进行体外培养,并根据胚胎发育水温和时间获得三角帆蚌早期胚胎发育的生物学零度和有效积温,可为突破三角帆蚌全人工繁育技术奠定基础,对淡水贝类现代生物育种技术研发和种质资源保护具有重要意义。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
施志仪 李勇 谢先中
利用切片染色确定了碱性磷酸酶在三角帆蚌外套膜中主要分布在黏膜层。在培养的细胞中分别加入碱性磷酸酶激活剂、抑制剂和放线菌酮,并用原子吸收光谱仪检测钙离子的含量和碱性磷酸酶的活力,结果表明:当加入碱性磷酸酶激活剂时,其活力升高,钙离子浓度升高;而加入抑制剂时,其活力降低,钙离子浓度相应下降;加入放线菌酮时,碱性磷酸酶和钙离子浓度开始升高,后来下降,其结果与蛋白质抑制剂的作用相一致,综合上述结果,表明三角帆蚌外套膜的碱性磷酸酶有促进钙代谢的作用。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
白志毅 汪桂玲 李家乐
利用三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)外套膜cDNA文库EST序列,通过BLAST分析注释基因功能,发现35个与免疫防御功能相关的基因。根据其功能,这些免疫相关基因可划分为7类,即细胞免疫过程(2个)、蛋白酶和蛋白酶调节子(9个)、压力蛋白(7个)、抗菌肽(5个)、溶酶体酶(2个)、粘着蛋白(3个)及细胞凋亡和细胞周期调控相关基因(7个)。免疫相关基因在三角帆蚌外套膜中的广泛表达表明外套膜是重要的免疫组织。该研究为三角帆蚌外套膜分子免疫机理研究和抗病育种工作提供了基础性资料。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
周子睿 施志仪 李文娟 尚朝 尚攀
[期刊] 水产学报
[作者]
张根芳 刘其根 方爱萍 叶秋红 李家乐
通过对三角帆蚌壳长、壳宽、蚌总重(整体湿重)、内脏团湿重、壳重和珍珠重等指标在5-11月间的逐月连续测定,研究了常规养殖模式下育珠期2龄三角帆蚌在主要生长季节的生长规律及其与珍珠生长的相关性。结果表明:珍珠重(PW)与壳长(SL)、壳宽(SW)的关系分别为PW=0.0008SL3.3946(R2=0.6948)和PW=0.7809SW1.0227(R2=0.6888);而珍珠重(PW)与蚌重(TW)、内脏团重(BW)和壳重(W)的关系分别为PW=0.0021TW1.5434(R2=0.7337),PW=0.107BW0.9125(R2=0.7158)和PW=0.0324W1.125 9(R2=...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李星 吕高伦 郭柏莹 李家乐 王正 白志毅
光泽度为衡量珍珠价值上限的指标，为了研究三角帆蚌供片蚌和育珠蚌对有核珍珠光泽度的相对贡献，以白蚌（内壳主体色为白色的三角帆蚌）为材料，以壳长和外壳青色为选择性状，设置不同选择策略，建立8 组三角帆蚌群体，在每组群体随机选出供片组和育珠组，开展组合插核手术。经18个月培育，发现不同育珠组合中，供片蚌和育珠蚌同时来自 Ⅰ 组选择群体的YAA育珠组合所育珍珠光泽度值最大，比YGG、YHH产珍珠光泽度分别提高15.46%、21.51%；不同组供片蚌培育珍珠的光泽度差异显著，供片蚌内壳光泽度与珍珠光泽度呈极显著正相关（r = 0.717 ～ 0.939 ），建立供片组内壳光泽度和珍珠光泽度回归方程为：y=16.81+0.93x(R~(2)=0.777)，供片蚌生长性状与珍珠光泽度相关性不显著；不同组育珠蚌培育珍珠的光泽度差异显著，但育珠蚌生长性状和内壳光泽度与珍珠光泽度不存在显著相关性。以上结果说明幼蚌期选育外壳颜色青色的三角帆蚌，达到了提升珍珠光泽度的目标，可作为选育产高光泽度珍珠三角帆蚌的间接性状，供片蚌内壳光泽度与珍珠光泽度显著相关，以其作为目标性状更优。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李雪男 冯上乐 王贺 申晓雅 陈一格 白志毅 李文娟
胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2， IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用。本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2，通过pEGFP-IGF2-细胞转染，表明该蛋白定位在细胞质与细胞核中。将pET32a-IGF2转化到BL21 (DE3)中进行蛋白诱导表达，成功得到其原核表达载体，SDS-PAGE检测显示，在约25kD处有一条清晰的条带，符合目的条带大小（26.27kD），且主要表达于上清液中。为研究重组蛋白IGF2对三角帆蚌细胞活性的作用，本研究通过CCK8细胞活性测定，进一步探讨了添加不同浓度重组目的蛋白（0 μg/mL、2.5 μg/mL、5 μg/mL、7.5 μg/mL、 12.5 μg/mL、17.5 μg/mL、 22.5 μg/mL）培养的三角帆蚌外套膜细胞增殖活性。结果显示，三角帆蚌IGF2重组蛋白能显著促进三角帆蚌外套膜细胞的增殖活力（P＜0.05），且在其浓度为12.5 μg/mL时对三角帆蚌外套膜细胞的促生长效果最佳，这为促进三角帆蚌外套膜细胞传代、细胞系建立奠定了基础，也为下一步探究IGF2在贝类中的功能提供依据。
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