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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
押辉远 王卫东 谷运红 秦广雍
用转座子显示技术研究了小麦反转录转座子Wis2-1A在剂量为5×1017N+/cm2的低能离子束处理后的转录对其邻近基因表达的影响,结果发现,在较高剂量下,由于Wis2-1A的高水平转录导致其邻近的某些基因沉默.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李登云 孙岩 蒋鹏飞 亢展展 王静娜 华琳琳 张洋 张德礼
【目的】研究H3N2和H1N1甲型流感病毒感染对仔猪肺脏CDK9基因表达的影响,揭示流感发病机制与CDK9基因的相关性。【方法】以接种PBS的仔猪为空白对照,利用实时荧光定量PCR技术和半定量免疫组织化学法,检测H3N2和H1N1甲型流感病毒接种感染7d后,仔猪肺脏CDK9的mRNA和蛋白表达的变化,并在电子显微镜下观察CDK9阳性细胞的定位。【结果】实时荧光定量PCR检测表明,H3N2和H1N1甲型流感病毒感染仔猪7d后,肺脏组织内CDK9基因mRNA的相对表达量分别为0.42和0.36,与对照(1.0)相比显著降低(P<0.05)。半定量免疫组织化学检测结果显示,仔猪受到H3N2和H1N1...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴丽芳 李红 宋道军 吴李君 余增亮
用低能氩离子束介导将改良的绿色荧光蛋白基因 (mGFP4)导入小麦栽培品种皖 92 10和皖麦 32号的成熟胚细胞。在含有 10 0～ 140mg/L巴龙霉素培养基上继代培养后 ,获得了一批抗性愈伤组织。经过分化培养 ,皖 92 10获得 5株再生苗 ,皖麦 32号获得 32株绿苗 ,对照的 2 0 0枚成熟胚未获得再生苗。对再生苗进行PCR检测 ,均扩增出 6 0 0bp的nptⅡ基因片段。取 4株长势好的绿苗进行Southern杂交分析 ,结果表明这 4株绿苗皆为转基因植株。根据PCR分析结果统计 ,皖 92 10和皖麦 32号的平均植株转化率分别是 1 3 %和 4 1%
[期刊] 华北农学报
[作者]
王卫东 闻捷 苏明杰 秦广雍 霍裕平
以鉴54、豫农118及豫麦18号为材料,研究了不同剂量率、剂量离子注入对小麦幼苗生长的影响。结果表明,随着剂量率和剂量的增加小麦幼苗损伤程度逐渐加剧,具体表现在苗高降低、第一叶长变短。剂量率间差异显著,品种间有辐射敏感性差异。另外苗期还发现了一些变异,主要表现为主叶脉失绿和形态畸形。离子束诱变的合适剂量在6×1017ions/cm2以上。
关键词：
离子注入 剂量率 剂量 苗期损伤 变异
[期刊] 水产学报
[作者]
吉红 刘品 李杰 淡荣 杨公社
获得了草鱼过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)部分cDNA序列(GenBank注册号为HM015283),并进行了序列同源性分析;采用实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法,检测了PGC-1α基因在草鱼不同组织的表达状况;研究了投喂高不饱和脂肪酸(HUFAs)对草鱼肝胰脏PGC-1α基因时序表达的影响。结果显示,所获得的草鱼PGC-1α基因部分cDNA序列长度为612bp,与人、牛、小鼠、斑马鱼和金鱼等动物的同源性为75%～97%;该基因在草鱼肝胰脏、肾脏、肌肉、心脏、鳃等10个组织中均有表达,其中在肾脏和心脏中表达丰度最高,在精巢和脾脏中表达丰度最低;草鱼...
[期刊] 常州工学院学报(社科版)
[作者]
戎林海 戎佩珏
英汉两种语言中存在着大量Ｎ１＋Ｎ２＝Ｎ３结构。文章从语法和语义的角度对比、分析了英汉Ｎ１＋Ｎ２＝Ｎ３结构的表层结构（语法关系）和深层结构（语义关系）的异同，指出＂同形异构＂和＂同构异义＂是客观存在的，通过大量例证说明英语的形合和汉语的意合各有巧妙，各领风骚。文章进而强调，在具体语言实践中，望文生义是要不得的。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王方昆 袁秀芳 王一成 张存 徐丽华 刘思当
【目的】对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NS1基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)上构建成重组质粒pET-NS1,转化受体菌E.coliBL21-DE3感受态细胞,经酶切鉴定及序列分析,筛选出正确重组质粒转化子。【结果】经终浓度5mmol·L-1乳糖诱导,SDS-PAGE电泳结果显示,重组蛋白NS1得到大量表达,分子质量约为26kD。经Western-blotting分析,表达蛋白能与阳性血清发生特...
关键词：
猪流感病毒 NS1基因 反应原性
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
林健聪 孙悦 刘用垄 王锦达 王荣 张飞萍
【目的】氨肽酶N(APN)是昆虫中肠一类重要的Bt受体蛋白,Bt细菌产生的Cry毒素对昆虫的毒杀作用机理在学术界存在一定争议,但是普遍认为毒素与Bt受体蛋白的结合是产生毒力的必要环节。本研究通过基因克隆、生物信息学分析以及不同龄期组织中的表达对木毒蛾APN1基因进行研究,为后续研究APN基因家族、其他Bt受体蛋白及Cry毒素作用机制提供有益补充。【方法】以木毒蛾中肠cDNA为模板,对木毒蛾APN1基因进行克隆并进行生物学分析,利用实时定量PCR(qRT-PCR)技术分析该基因在木毒蛾发育阶段及不同组织中的表达模式。【结果】克隆获得木毒蛾APN1基因的全长DNA,命名为LxAPN1。LxAPN1序列全长为3 159 bp,ORF为3 054 bp,编码1 017个氨基酸,序列比对和进化树分析表明,LxAPN1与舞毒蛾的LdAPN1高度同源,在N-端都具有信号肽,都具有锌结合位点HEXXH(X18)E以及保守区域GAMENWG,在末端具有GPI结合位点;LxAPN1在木毒蛾卵期无表达,在所有幼虫阶段中均有表达,幼虫期过后LxAPN1表达量锐减;LxAPN1在肠道的表达量明显高于头部和表皮。【结论】LxAPN1在木毒蛾中肠被成功克隆,LxAPN1与LdAPN1高度同源,并且在进化树的分布上也极其相近,推测两者的APN1功能上近似;LxAPN1在木毒蛾2龄幼虫期表达量最高。并且在6龄幼虫肠道中表达量最高,肠道高表达与LxAPN1作为Bt受体在木毒蛾中肠发挥作用息息相关。
关键词：
木毒蛾 Bt受体 氨肽酶N 克隆
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王莹 李健 葛倩倩 翟倩倩 李东利 葛红星
以凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）为研究对象，运用Ｒｔ－ｐＣＲ方法测定ＣＹｐ２基因在凡纳滨对虾组织中的表达分布，并分析不同剂量恩诺沙星对凡纳滨对虾肝胰腺中ＣＹｐ２基因表达和氨基比林－ｎ－脱甲基酶（ａｐｎＤ）活性的影响。结果显示，ＣＹｐ２在肝胰腺、鳃、血淋巴、肌肉、甲壳、肠、胃、心脏和眼柄中均有分布，在肝胰腺中表达量最高，胃次之，血淋巴中表达量最低。口服低（１５ ｍｇ／ｋｇ）、中（３０ ｍｇ／ｋｇ）、高（６０ ｍｇ／ｋｇ）３个剂量恩诺沙星药饵后，凡纳滨对虾肝胰腺中ＣＹｐ２基因表达和ａｐｎＤ活性较对照组均呈现下降趋势；药物浓度越高，基因表达量和酶活性越低，表明恩诺沙星可抑制Ｃ．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
徐磊 杨培岭 任树梅 张涛 韩玉国
以农花5号花生为试材,研究4种注量的低能C+对农花5号M3代抗旱性能的影响。通过田间小区试验对M3代主茎高、侧枝长、叶片失水率等指标进行观测,运用直接评价、间接综合评价以及聚类分析方法对M3代抗旱性能进行分析。结果显示:适宜剂量的低能C+注入能够明显改变花生M3代的抗旱能力,本试验中,C+剂量为1015cm-2时,花生M3代的抗旱性显著强于对照;剂量1012cm-2,M3代的抗旱性略有增强;而1011cm-2和1016cm-2剂量条件下抗旱性与对照相比差异不大。因此,低能C+注入可以改变花生品性,是获得优质种子资源的一种有效方法。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张磊 沈泽恩 李红霞 徐逾鑫 李迎宾 俞菊华
白细胞介素17 (Interleukin-17, IL-17)在炎症和宿主防御中起重要作用。为了解鲤(Cyprinus carpio) IL-17N基因的功能，本实验使用同源搜索和基因克隆的方法在鲤基因组挖掘鉴定到两个IL-17N基因(CcIL-17Na和CcIL-17Nb)，均由TOP3B基因内含子2的互补序列编码。共线性比较显示，除了东方红鳍鲀(Takifugu rubripes)外，在其他已研究的鱼类中，与该基因相邻的均为SDF2L和PPM1F基因。两个CcIL-17Ns都有3个外显子，编码136个氨基酸，两者相似性高达为97.1%，CcIL-17Na、CcIL-17Nb和其他硬骨鱼类的IL-17N相似性分别为65.3%～97.1%、64.7%～96.3%，和鲤IL-17家族其他成员的相似性分别为32.9%～51.4%、31.4%～50.7%。鱼类IL-17家族系统树显示7个成员形成6支，其中IL-17A/F1和IL-17A/F3组成一支，其余6个成员单独成支，鲤IL-17N先与鲤科鱼类以94% 置信值聚在一起，然后与鲑鳟鱼类、鳉、东方红鳍鲀和尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)等以85%的置信值聚在一起，再与雀鳝(Lepisosteus oculatus)和腔棘鱼(Coelacanth)的IL-17N以95% 置信值聚为一支。实时定量PCR结果显示CcIL-17Ns在受精后0.5 h和12 h的表达量极显著高于受精后25 h、35 h、60 h、120 h及仔鱼阶段的表达量(P<0.01)；CcIL-17Ns在鲤夏花和成鱼脑中的表达量均最高，显著(P<0.05)或极显著(P0.05)。构建原核重组表达载体pMAL-c2X-17N，在大肠杆菌Transetta (DE3)中进行原核表达，使用镍柱纯化获得可溶的IL-17N重组蛋白(MBP-17N)。使用0.1 ng/mL、1 ng/mL、10 ng/mL和100 ng/mL的MBP-17N孵育鲤肾组织8 h，结果显示，不同浓度的MBP-17N均使IL-1β和NF-κB显著上调(P<0.05)。本实验通过分析鲤IL-17Ns的系统发育、测定该基因的时空表达特征，发现嗜水气单胞菌感染后各组织CcIL-17Ns表达上调、原核表达蛋白能引起炎症因子的表达，从而证实了鲤IL-17N参与炎症反应。
[期刊] 水产学报
[作者]
吉红 黄吉芹 刘品
实验获得了草鱼脂肪组织甘油三酯水解酶(ATGL)部分cDNA序列(GenBank登录号为HQ845211),并进行了序列同源性分析;采用实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法,检测了ATGL基因在草鱼不同组织的表达状况;研究了投喂n-3高不饱和脂肪酸(n-3 HUFAs)对草鱼肝胰脏ATGL基因时序表达的影响。结果显示,所获得的草鱼ATGL基因部分cDNA序列长度为687 bp,与人、牛、小鼠、长腭泥虎鱼、大黄鱼等物种的同源性为65%~75%;该基因在草鱼心脏、肝胰脏、脾脏、鳃、肾脏、肌肉、腹腔脂肪组织、脑、小肠、精巢10个组织中均有表达,其中在腹腔脂肪组织中表达丰度最高,在肝胰脏...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张敏 戴廷波 姜东 荆奇 曹卫星
在田间条件下,以豫麦34和扬麦9号2个蛋白质含量不同的小麦品种为材料,花后用0.01 mol.mL-16-BA分别处理穗部和旗叶,研究6-BA对小麦花后植株C/N物质积累与转运规律的影响及其与小麦籽粒蛋白质和淀粉形成的关系。结果表明,6-BA处理降低了小麦籽粒质量和总淀粉含量,但显著提高了籽粒蛋白质含量,且旗叶处理比穗部处理的效果更为显著。6-BA处理显著提高了籽粒谷蛋白含量,对清蛋白和球蛋白的影响较小;穗处理的籽粒醇溶蛋白含量低于对照和旗叶处理,使穗处理的谷蛋白/醇溶蛋白显著增加。与对照相比,6-BA处理降低了扬麦9号籽粒支链淀粉含量,豫麦34在不同处理间无显著差异。6-BA处理降低了营养器...
关键词：
小麦 6-BA C/N运转 蛋白质 淀粉
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郑增忍 王海霞 龚振华 张彦明 李葳 刘俊辉
针对水疱性口炎病毒(VSV)N基因设计特异性引物,在引物中分别加入EcoR 和Xho 酶切位点。RT-PCR扩增后得到目的基因,将其克隆到表达载体pET30c,连接产物转化于DH5α菌株,在含Kan+的平板上37℃培养24h,然后挑取白色菌落,鉴定为阳性者,转化于BL21菌株,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导获得高效表达。表达融合蛋白分子质量为53ku(目的蛋白大约47ku),同预期蛋白大小相近。Westernblot检测表明,其能与本病毒阳性血清发生特异性反应,表达蛋白有望成为有价值的VSV诊断抗原。
关键词：
水疱性口炎病毒 N基因 原核表达载体
[期刊] 华北农学报
[作者]
蒋琛茜 瓮巧云 樊锦涛 王冠宇 董丽萍 邢继红 董金皋
为构建拟南芥抗病相关T1N6_22基因的原核表达载体并进行高效表达,获得纯化的T1N6_22蛋白,以拟南芥Col-0的c DNA为模板,扩增获得了T1N6_22基因CDS,对其进行克隆、测序后与含有GST标签蛋白的p GEX4T-1载体相连,构建T1N6_22的原核表达载体p GEX4T-1-T1N6_22-GST。经酶切和测序鉴定正确后,将构建好的载体及空载体转化大肠杆菌BL21。结果表明,在大肠杆菌BL21菌株中成功表达了与标签蛋白融合的T1N6_22蛋白,大小约57 k Da。SDS-PAGE分析表明,高效表达的诱导条件为0.1 mmol/L IPTG诱导培养3 h。研究结果为进一步T1...
关键词：
拟南芥 T1N6_22 原核表达 纯化
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