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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
陶筱帆 谢婷婷 李小霞 罗军涛 白雅静 韩兵社 张俊芳
长散布核元件-1(Long spread nuclear element-1, LINE1)是跳跃基因。前期比较基因组研究发现,南极鱼经历漫长的低温适应进化后,与南极圈外的同亚目鱼类相比较,在基因水平上LINE1的扩增效率高达8～300倍,但LINE1的扩增与鱼类抵御寒冷之间的关系尚未明了。本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行了不同时间梯度的低温处理(18℃、5 d和18℃、30 d),同时对斑马鱼成鱼也进行了不同时间的低温处理(10℃, 3 h、6 h、1 d、3 d、5 d)。采用RT-qPCR检测了LINE1的mRNA水平,并克隆了斑马鱼LINE1基因启动子区,利用Luciferase双荧光报告系统,在ZF4细胞中验证LINE1 5’UTR在低温压力下的生物活性。结果显示,短时间低温处理下,ZF4细胞中LINE1 mRNA水平有所降低,而在长时间低温处理中,LINE1的mRNA水平显著升高。在成鱼中,短时间低温处理下,LINE1 mRNA水平降低;长期低温处理下,LINE1 mRNA水平显著升高。在ZF4细胞中发现,LINE1 5’UTR具有生物活性。在低温处理(18℃,3 d)下,报告基因信号减弱,间接表明LINE1启动子活性减弱。研究结果表明,低温压力会影响LINE1在鱼类中的表达。本研究为进一步探究LINE1在鱼类适应低温环境中的作用机制奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
唐宇飞 刘晓红 常馨月 吴海珍 张元兴
为了研究白三烯Ｂ＿４受体在斑马鱼发育和免疫中的功能，本实验利用ＲＡＣＥ技术克隆得到了斑马鱼白三烯Ｂ＿４受体样（ＢＬＴ１－ＬｉｋＥ）基因ＢＬＴ１－ＬｉｋＥ１和ＢＬＴ１－ＬｉｋＥ２的全长ＣＤＮＡ序列，其分别编码３３９和３５６个氨基酸。序列和结构分析发现，其编码的２个蛋白均属于Ｇ蛋白偶联受体家族视紫红质蛋白亚族，并具有典型的Ｇ蛋白偶联受体的特征，与人的ＢＬＴ１同源度达３１％以上。进一步将２个基因与绿色荧光蛋白融合表达，发现其具有较好的细胞膜定位功能；ＷＥｓＴＥＲＮ印迹检测也证实，重组表达细胞的全细胞蛋白可与人源ＢＬＴ１的多克隆抗体发生特异性相互作用。此外，荧光定量ＰＣＲ分析结果显示，在斑马鱼幼鱼发育．．．
关键词：
斑马鱼 BLT1 基因克隆 基因表达
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈紫涵 周静 王德成 晏博
为探索chac1基因(ChaC glutathione specific gamma-glutamylcyclotransferase 1)在早期胚胎发育中的功能。本研究以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象首先分析了斑马鱼Chac1蛋白的序列特征，并用qRT-PCR检测了chac1在斑马鱼胚胎不同发育阶段和成鱼不同组织中的表达模式，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术在chac1基因的三个外显子上设计了3条sgRNA并通过测序及qRT-PCR检测其敲除效率。苏丹黑染色3dpf (days post fertilization)野生型和chac1突变型斑马鱼幼鱼的中性粒细胞数量；qRT-PCR检测突变斑马鱼髓系造血相关因子。结果显示：chac1是母源基因，在受精后0-3 hpf (hours post fertilization)时其表达量较高，之后随着母本基因的影响逐渐变小，chac1的mRNA表达量下降；在斑马鱼成鱼中，其在肌肉、卵巢、脑中高表达；此外，突变型斑马鱼较野生型斑马鱼相比，其苏丹黑染色阳性信号更多；chac1突变后髓系造血转录调控因子pu.1的mRNA水平上调。综上，chac1为母源基因，其缺失会促进早期中性粒细胞的发育并伴随着髓系造血转录调控因子pu.1的上调。本研究结果为进一步研究chac1在造血及免疫相关疾病中的功能奠定了基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
许琼琼 韩兵社 罗军涛 李艳 侯艳雯 胡鹏 张俊芳
为了研究鱼类低温下分子调控机制及其与活性氧（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ，ｒｏｓ）之间的关系，本实验对斑马鱼（Ｄａｎｉｏ ｒｅｒｉｏ）胚胎成纤维ＺＦ４细胞进行不同程度的低温胁迫（１８℃和１０℃），监测其在不同低温胁迫时间下（１ Ｄ、３ Ｄ和５ Ｄ）ｒｏｓ的变化以及丝裂原活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅＤ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，ｍａｐｋ）通路中蛋白的表达情况。结果显示：（１）ＤｃＦＨ－Ｄａ探针法表明在低温胁迫作用下，细胞内ｒｏｓ含量增加。细胞内ｒｏｓ上升水平与外界胁迫压力成正相关。低温处理３ Ｄ后，１８℃和１０℃的细胞，其ｒｏｓ含量与对照组（２８℃）相比分．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
周婷婷 范纯新 邹莎 宋佳坤
机械感觉毛细胞对于脊椎动物的听力和平衡能力至关重要,低等脊椎动物毛细胞在遭受损伤后具有很强的再生能力。鱼类侧线神经丘毛细胞与内耳毛细胞具有相似的结构、功能、发育和再生过程。我们将受精后5~6 d的斑马鱼仔鱼置于400μmol/L新霉素溶液中处理1 h破坏神经丘毛细胞。分别对处理后2、4、8、12及24 h的斑马鱼仔鱼进行组织学切片及功能基因eya1和six1b的整体原位杂交。组织学切片结果显示:对照组神经丘毛细胞与支持细胞形态及排布都很规则,毛细胞和支持细胞分别位于上层和下层;处理后2~4 h,上层毛细胞数量显著下降;处理后8~12h,支持细胞和毛细胞之间界限模糊,部分支持细胞变长,且与基膜脱...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙效文 梁利群
用 50 0对斑马鱼SSLP标记引物对黑龙江野鲤 (CyprinuscarpiohaematopterusTemmincketSchlegel)和柏氏鲤 (CyprinuspellegrinipellegriniTchang)进行种间遗传差异分析 ,共发现 110个斑马鱼标记在鲤鱼种间表现出差异 ,故可作为黑龙江野鲤和柏氏鲤间的分子标记 ,也可作为建立遗传连锁图谱的遗传标记。
关键词：
黑龙江野鲤 柏氏鲤 斑马鱼 遗传标记
[期刊] 中国农业科学
[作者]
濮俊毅 黄新新 陆承平
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12h后呈败血症病变,96h内对斑马鱼的半数致死量(LD50)在5.36×103至5.01×104cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96h内不表现任何病变,亦不出现死...
关键词：
斑马鱼 猪链球菌2型 半数致死量
[期刊] 中国水产科学
[作者]
全迎春 梁利群 孙效文 姚昆 雷清泉
用6 072对斑马鱼(Danio rerio)微卫星引物对黑龙江鲤(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)、荷包红鲤(Cyprinus carpiovar.wuyuanensis)和柏氏鲤(Cyprinus pellegriniTchang)进行种间遗传差异分析,共发现563个斑马鱼微卫星标记在鲤鱼种间表现出多态性。从中随机抽选25个标记,对斑马鱼和3种鲤鱼的遗传多样性进行分析,使用Phylip3.63软件按照Nei氏标准遗传距离计算种间遗传距离,再用MEGA3.0软件绘制NJ系统发生树,并进行1 000次bootstrap检验系统...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘飞 王凡 郑雅婷 李萌萌 冉娜娜 高晓杨 石亚男 朱娜娜 程惠敏 杨瑞
为了探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对斑马鱼早期生命阶段下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)相关功能基因表达的影响，将斑马鱼的受精卵暴露于10、30和300μg/L DEHP溶液中，同时设置空白对照，96 h后，利用实时荧光定量PCR技术，测定斑马鱼仔鱼HPG和HPA轴上12个功能基因的表达。结果显示，与对照组相比，30μg/L DEHP处理组的Cyp19b、GnRH3、Era和ERβ基因表达量显著升高，GnRH2、Pomc、Mr、Mc2r、Crh、Gr和Crhbp基因在各DEHP处理组表达量显著降低，FSH-β和Crhbp基因表达量无显著变化。以上研究结果表明：DEHP对斑马鱼胚胎/仔鱼阶段的2个主要内分泌分子通路产生了显著影响，将会导致内分泌功能的改变，从而可能影响斑马鱼的后期生长发育。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
罗蕾 陈阿琴 吕为群
促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone,CRH)、尾加压素Ⅰ(UrotensinⅠ,UⅠ)和尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)广泛存在于脊椎动物中。在鱼类中,它们在渗透压调节、繁殖、营养代谢以及应激反应中发挥着重要作用。本研究中,通过收集0、1.5、3.7、5.3、8、10、16、24、48、72、96、120和144 hpf(hours post-fertilization)的斑马鱼早期发育样品,运用荧光定量PCR技术进行检测发现CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβmRNA从0 hpf开始存在表达,而且CRH、UⅠ、UⅡα和UⅡβ的表达量随发育...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孔祥会 王桂忠 李少菁 艾春香
采用生物化学方法对低温驯化的锯缘青蟹(Scylla serrata)肝胰腺中抗氧化酶(SOD、CAT和GPX)活性和脂类过氧化产物MDA含量以及Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase、Ca2+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性进行测定。结果显示,锯缘青蟹肝胰腺中抗氧化酶(SOD、CAT和GPX)活性随驯化温度的降低而降低;而MDA含量则是随驯化温度的降低而升高,其变化正好与抗氧化酶活性相反。Na+-K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性均是随驯化温度的降低而升高;而Ca2+-ATPase活性没有表现出这一明显变化趋势,但低...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
何杰 强俊 徐跑 朱志祥
选取4种不同品系罗非鱼,分别为吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)、奥尼罗非鱼(O.niloticus×O.aureus)、红罗非鱼(O.nilotica♂×O.mossambica♀)和奥利亚罗非鱼(O.aureaus)。在26℃水温下饲养3周后,选取规格基本一致的罗非鱼(体质量50.73 g±4.23 g)进行低温驯化实验。水温以3℃/d的速度从26℃降至8℃,分别于水温为26℃、20℃、14℃和8℃时进行采样,比较不同驯化阶段4种不同品系罗非鱼血清皮质醇和免疫相关指标的变化规律。结果表明,与26℃时的免疫指标相比,水温降至8℃时,吉富与红罗非鱼血清皮质醇水平显著升高;...
[期刊] 华北农学报
[作者]
祁立中 王晓 王庆泰 王尚 张炬红
为筛选出适合快速冷驯化条件下稻水象甲成虫荧光定量PCR的内参基因，并分析快速冷驯化低温胁迫下海藻糖合成酶基因(LoTPS)的表达模式，从稻水象甲转录组数据库中筛选出10个具有完整开放阅读框的待选内参基因，以稻水象甲成虫为试验材料，通过实时荧光定量PCR测定内参基因在不同快速冷驯化条件下的表达水平，通过常用的内参基因稳定性分析方法ΔCt法和geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件综合评价待选的10个内参基因表达的稳定性，测定稻水象甲海藻糖合成酶基因在不同快速冷驯化条件下的表达变化，分析其与低温的相关性。试验结果表明，在ΔCt法分析中RPS18表达丰度最高，geNorm软件分析中较稳定表达的内参基因是RPS18和G6DPH,G6DPH在NormFinder软件分析中是表达最稳定的内参基因，BestKeeper软件分析表明，RPL13和α-tubulin表达较稳定，综合以上各分析方法得出RPS18基因在快速冷驯化条件下的稳定性较高。以RPS18为内参基因进一步分析LoTPS基因在快速冷驯化条件下的表达模式发现，LoTPS基因表达量在快速冷驯化条件下有所增加，各冷驯化处理均高于对照。因此，内参基因RPS18在稻水象甲成虫体内表达相对稳定，可以作为稻水象甲不同快速冷驯化条件下的内参基因，低温胁迫促进了在快速冷驯化条件下海藻糖合成酶基因的上调表达，且随着冷驯化时间的延长而表达量增加。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
田佳音 陈康勇 张畅 宋云杰 高谦 邹钧
肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,Tnf)作为重要的炎症因子,在抵抗细菌和病毒感染以及清除被感染的细胞等方面发挥着重要的作用。对斑马鱼进行腹腔注射免疫刺激物、细菌和病毒病原,并采用荧光定量PCR技术分析tnfα及其受体[tnf receptor superfamily(tnfrsf)member 1a]在肾脏和脾脏中的表达。实验结果显示:tnfα和tnfrsf1a在斑马鱼各组织中均有常量表达。脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和聚肌苷酸-聚胞苷酸[polyinosinic acid-polycytidylic acid,poly(I:C)]能够调控肾脏和脾脏中tnfα和tnfrsf1a的表达。腹腔注射嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染斑马鱼后,tnfα在脾脏(48 h和72 h)和肾脏(72 h)中表达显著升高;tnfrsf1a在脾脏(48 h)表达水平也有显著上调。在注射迟缓爱德华氏菌(Edwardasiella tarda)的斑马鱼中,肾脏的tnfα表达显著增加,但在脾脏的表达则完全被抑制;tnfrsf1a基因在脾脏和肾脏(6 h和72 h)有明显上调。鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)感染斑马鱼后,tnfα和tnfrsf1a在感染早期表达量有显著升高;而且在感染1～7 d中,肾脏的tnfrsf1a始终维持高水平诱导表达。实验结果表明:tnfα和tnfrsf1a在鱼类抵抗细菌和病毒感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
邱超达 鲍宝龙
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建感紫光短波视蛋白（short-wave-sensitive 1，sws1）基因缺失的斑马鱼突变品系sws1~(-/-)。通过紫光照射实验，检测野生型AB品系和sws1~(-/-)突变品系在背腹皮肤中黑色素细胞的数量、黑色素合成相关基因pomc，asip、视黄酸合成相关基因raldh2和raldh3的表达量。结果显示：在紫光照射60 d和100 d后，sws1~(-/-)斑马鱼背部皮肤黑色素细胞数量显著少于野生型斑马鱼 （P
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