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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
樊海新 李寒松 李复辉 马良友 朱平 吴金节 王希春
[目的]建立用于快速检测伏马菌素B1(FB1)的胶体金免疫层析试纸条。[方法]首先制备了FB1单克隆抗体和FB1-OVA偶联抗原,然后将FB1单克隆抗体与胶体金制成金标抗体包被在金标垫上,将FB1-OVA抗原和羊抗鼠Ig G包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面分别作为检测线和质控线。采用间接竞争法检测待检样品中的FB1与NC膜上的FB1-OVA抗原竞争结合金标抗体中的FB1单克隆抗体情况,并以检测线和质控线显示检测结果。[结果]本试验优化了金标抗体、检测抗原及羊抗鼠Ig G的包被量,检测FB1的灵敏度可达到2 ng·m L-1,最佳判定质量浓度为40 ng·m L-1。[结论]本试验制备的检测试纸...
[期刊] 水产学报
[作者]
辛志明 樊海平 吴斌 张新艳
采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体分泌细胞株,获取抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体,柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒,标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫与喷涂有抗豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜及样品吸收垫等组装成免疫层析试纸条,建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度,结果显示,试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌等13种常见病原菌没有交叉反应,与豚鼠气单胞菌显示特异性反应,检测灵敏度为1×106CFU/mL,结果显示时间小...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏武强 胡叶军 孙琛 张美珍 王伟萍 桑丽雅
通过研究胶体金免疫层析技术，建立了一种快速检测水产品中甲基睾酮含量的方法。将待测样品中的甲基睾酮和试纸条检测线上包被的人工抗原（ＭＴ－ＢＳＡ）竞争性结合金标结合垫上包被的胶体金－甲基睾酮单抗聚合物，根据检测线呈现的红色线条深浅来判定样品的阴阳性。结果显示：试纸条上ＭＴ－ＢＳＡ抗原工作浓度为１．０Ｍｇ／Ｍ Ｌ，羊抗鼠二抗工作浓度为１．５ Ｍｇ／Ｍ Ｌ，试纸条的最低检测限达到１０μｇ／ｋｇ，与甲基睾酮类似物的交叉反应率低；使用甲醇提取，４倍ＰＢＳＴ稀释，整个检测所需时间仅１０～１５ Ｍｉｎ，适用于大规模样品筛选。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵丹丹 杨国平 刁有祥 陈浩 提金凤 张璐 张英 李川川
【目的】鸭瘟（ＤＰ）是由鸭瘟病毒（ＤＰＶ）引起的一种急性、败血性传染病，以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡，头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生，发病急、死亡快、死亡率高，对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一，可以及时确定病原，以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（ＤＰＶ）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Ｐｒｏｔｅａｎ分析，选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物，ＰＣｒ扩增目的基因。连接到载体ＰＭＤ－１８ｔ上，测序正确后再连接到原核表达载体Ｐｅｔ－２８ａ上。将获得的重组质粒转化至ｒｏｓｅｔｔａ感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蒋韬 梁仲 陈涓 何继军 吕律 马维民 刘在新 刘湘涛
【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、AsiaI型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法(GICA)。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O、A、AsiaI型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/AF72and AsiaⅠ/China05抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。经试验条件优化,组装形成胶体金定型诊断试剂盒。【结果】本试验研制的口蹄疫定型试剂盒具有良好的灵敏度,可检测到7.8×104LD50(1﹕128倍稀释乳鼠毒)的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同,说明其有较好的重复性;特异性...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
黄巧莲 金庆日 章先 周一媚 陈彦永 徐露凝 杨永春 程昌勇 田广燕 桂海娈 方维焕 宋厚辉
针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素Ａ单抗偶联物和赭曲霉毒素Ａ－ＢＳＡ偶联物（ＯＴＡ－ＢＳＡ），开发了一种快速检测赭曲霉毒素Ａ的方法。研究结果表明：１当ＯＴＡ－ＢＳＡ配制终质量浓度为４．８ ｇ·Ｌ～（－１），质控线用羊抗鼠Ｉｇｇ配制终质量浓度为１．５ ｇ·Ｌ～（－１），硝酸纤维素（ＮＣ）膜的包被量为１．０μＬ·Ｃｍ～（－１）时呈现最清晰、最均匀的条带。２赭曲霉毒素Ａ胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到１．０μｇ·Ｌ～（－１），检测时间仅为５ ｍＩＮ，非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短，灵敏度高，与．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙秀兰 张银志 汤坚 朱瑜
为了扩大金标免疫层析试条(GICA)检测食品和饲料中黄曲霉毒素B1的应用范围,研究了样品基质对试剂条信号强度的影响,探讨了GICA测定饲料和各种发酵类食品样品时,提取液中NaCl、金属离子(Fe3+,Cu2+,Pb2+,As3+)和脂肪含量对检测结果的影响,并研究了消除影响的方法。结果表明,3种阴性样品(大米、玉米和小麦粉)均存在不同程度的非特异性干扰,大米的影响最小,其次为玉米和小麦粉,大米的最佳稀释倍数为10倍,玉米和小麦粉为30倍;随NaCl质量浓度增加,检测结果有偏向假阳性的趋势;4种金属离子对检测结果的影响程度依次为Fe3+>Cu2+>Pb2+>As3+;随着样品中油脂含量的增高,用...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
贾先春 周嘉明 智军海 郝秋艳 杨晓芳 王玮
[目的] 本文旨在建立一种胶体金免疫层析技术高通量测定猪肉、鸡肉组织中8种磺胺类、3种四环素类、2种喹诺酮类和甲氧苄啶药物残留的方法。[方法] 动物肌肉组织中磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶经磷酸缓冲液提取，并经含Tween 20的磷酸缓冲液稀释后，与胶体金标记的单克隆抗体结合，抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线（T线）上的抗原结合，从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线（C线）颜色深浅，对试样中多兽药残留进行定性判定。[结果] 本试验了优化pH值、抗体添加量、抗原包被量、Tween 20添加量和冻干保护剂种类等关键因素，磺胺类、四环素类、喹诺酮类和甲氧苄啶等药物的检出限分别为50、100、50、35 μg·kg~(-1)，灵敏度≥97%，假阳性率≤2%，假阴性率≤3%，且与现有标准方法检测结果一致。[结论] 该方法操作简便，灵敏度和准确度高，检测时间短且稳定性好，可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王蔚芳 李青梅 郭军庆 雷霁霖
建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸,被认为是当前最快捷、高敏感的一种免疫学检测技术。该项技术真正实现了快速简易检测靶目标,并已在畜牧业中得到普及应用,成为当前畜禽病害早期防控的最有效方法之一。本文就该项技术在畜牧兽医领域的研究进展、应用现状、发展前景进行了介绍、分析和讨论,旨在为水产养殖动物病害的早期诊断提供借鉴,以期获得一种适用于水产动物病害的、专用的快速检测新技术和新产品。
关键词：
胶体金 免疫层析 病害检测 水产养殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王莹 郑浩 何成华 张爱华 冯璐璐 皇超英 张海彬
【目的】真菌毒素可导致严重的食品安全问题。本试验旨在制备可用于检测伏马菌素B1的特异性单克隆抗体。【方法】制备伏马菌素B1人工抗原,杂交瘤细胞法筛选杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,并对其特性进行鉴定。【结果】筛选得到杂交瘤细胞株F3,分泌的单克隆抗体亚类为IgG1,轻链类型为κ链;10%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗蛋白重链分子质量约为50 kD,轻链分子质量约为25 kD;间接酶联免疫吸附法测定杂交瘤细胞F3细胞培养上清和腹水效价分别为1:3 200和1:51 200;亲和力常数为1.60×10-8 mol.L-1;IC50值可达3.589ng.mL-1;对其它真菌毒素不存在交叉反应;免疫...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晓敏 柴同杰 邹明强 黄蓉 张明亮
【目的】研制魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,为魏氏梭菌病的快速诊断提供新方法。【方法】采用分子生物学方法制备魏氏梭菌α毒素,将其免疫家兔制备多克隆抗体。用制备的抗魏氏梭菌α毒素多克隆抗体作为胶体金标记抗体和检测线上的捕获抗体,制备魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测,比较其检测结果与PCR检测结果的符合率。【结果】成功制备了魏氏梭菌α毒素多克隆抗体。成功研制了α毒素快速诊断金标试纸条,其检测线上抗体的最适包被质量浓度为0.06μg/mL。研制的试纸条仅与魏氏梭菌α毒素发生反应,且不同批次的试纸...
关键词：
魏氏梭菌 胶体金 免疫层析 α毒素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李向梅 王战辉 肖希龙 王照鹏 温凯 吴小平 夏曦 武晋孝 江海洋
【目的】喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物,对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果,是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可能导致对人类健康的危害,因此,为了保护消费者的健康,研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。【方法】建立了同时检测牛奶中13种喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体按比例进行混合标记。同时,采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的pH值和抗体用量对灵敏度的影响,并对这两类药物抗...
关键词：
喹诺酮类 庆大霉素 残留 胶体金免疫层析
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘莹莹 卢瑛 赵勇 潘迎捷
为能够快速检测水产品中副溶血性弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ），本研究首先制备了副溶血性弧菌多克隆抗体，然后将其标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针，再分别以副溶血性弧菌多克隆抗体和山羊抗兔ｉｇ ｇ作为检测线ｔ线和质控线ｃ线，建立了双抗夹心模式的磁性免疫层析试纸条。利用正交试验设计的方法，从ｔｗｅｅｎ－２０、ｂｓａ、蔗糖３种因素对层析体进行优化分析，结果表明这３个因素对层析检测的影响效果为ｔｗｅｅｎ－２０＞ｂｓａ＞蔗糖；当ｔｗｅｅｎ－２０含量为５％（Ｖ／Ｖ），ｂｓａ浓度为０．２ ｍｇ／ｍ ｌ，蔗糖浓度为０ ｍｇ／ｍ ｌ时，阳性信号最强，检测的准确性和灵敏度达到最优，通过单纯的．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
高红艳 赵金龙 王雅晴 蒋秋燕 黄玉浩 林洪 李振兴
为实现甲壳类水产品主要过敏原的快速检测，实验使用凡纳滨对虾原肌球蛋白（TM）作为检测靶标，构建了胶体金免疫层析检测方法。使用天然TM分别免疫SD大鼠和新西兰大白兔制备多克隆抗体，以40 nm胶体金标记的鼠多抗作为检测抗体，以兔多抗为捕获抗体，基于双抗体夹心原理组装免疫层析试纸条，并应用于市售食物样品的检测。结果表明，组建的免疫层析试纸条可在5 min之内显示结果，视觉检出限为10 ng/mL，对虾、蟹、克氏原螯虾及美洲螯龙虾等甲壳类水产品的特异性高，但与蛤蜊、扇贝存在微弱的交叉反应；在不含甲壳类水产品的市售食品中的加标回收率为81%～126%，准确性良好；试纸条的批内、批间变异系数低于15%，市售实际食物样品的检测结果与食物过敏原标签一致。研究表明，该方法具有高灵敏度与检测特异性，可在多种基质与商业化食物样品中实现甲壳类过敏原的有效检测，具有较强的实际应用价值。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王莹 郑浩 何成华 张爱华 张海彬
采用戊二醛(GA)一步法将半抗原伏马菌素B1(FB1)分别与鸡卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备2种具有免疫原性的FB1人工抗原FB1-OVA和FB1-BSA。分别采用凝胶电泳法、紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、基质辅助激光分析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)4种方法鉴定人工抗原偶联效果并测定偶联比。将FB1-BSA作为免疫抗原免疫BALB/c小鼠,FB1-OVA作为固相包被抗原,采用间接酶联免疫吸附法(i-ELISA)测定小鼠抗血清滴度。结果表明:4种方法均鉴定FB1人工抗原合成成功。凝胶电泳法测定FB1-OVA和FB1-BSA相对分子质量分别约为50...
关键词：
伏马菌素B1 人工抗原 偶联比 抗体
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