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[期刊] 中国农业科学
[作者]
王莹 郑浩 何成华 张爱华 冯璐璐 皇超英 张海彬
【目的】真菌毒素可导致严重的食品安全问题。本试验旨在制备可用于检测伏马菌素B1的特异性单克隆抗体。【方法】制备伏马菌素B1人工抗原,杂交瘤细胞法筛选杂交瘤细胞株制备腹水型单克隆抗体,并对其特性进行鉴定。【结果】筛选得到杂交瘤细胞株F3,分泌的单克隆抗体亚类为IgG1,轻链类型为κ链;10%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单抗蛋白重链分子质量约为50 kD,轻链分子质量约为25 kD;间接酶联免疫吸附法测定杂交瘤细胞F3细胞培养上清和腹水效价分别为1:3 200和1:51 200;亲和力常数为1.60×10-8 mol.L-1;IC50值可达3.589ng.mL-1;对其它真菌毒素不存在交叉反应;免疫...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王莹 郑浩 何成华 张爱华 张海彬
采用戊二醛(GA)一步法将半抗原伏马菌素B1(FB1)分别与鸡卵清蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备2种具有免疫原性的FB1人工抗原FB1-OVA和FB1-BSA。分别采用凝胶电泳法、紫外光谱法(UV)、红外光谱法(IR)、基质辅助激光分析电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)4种方法鉴定人工抗原偶联效果并测定偶联比。将FB1-BSA作为免疫抗原免疫BALB/c小鼠,FB1-OVA作为固相包被抗原,采用间接酶联免疫吸附法(i-ELISA)测定小鼠抗血清滴度。结果表明:4种方法均鉴定FB1人工抗原合成成功。凝胶电泳法测定FB1-OVA和FB1-BSA相对分子质量分别约为50...
关键词：
伏马菌素B1 人工抗原 偶联比 抗体
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡骁飞 魏凤仙 李青梅 职爱民 王方雨 孙亚宁 柴书军 付晓鹤
通过细胞融合建立分泌抗植酸酶单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,筛选出2株杂交瘤细胞,其中,5C3细胞株产生单抗亚型为IgG1型,效价为1∶(1.02×106),IC50=100.07 ng/mL,亲和常数为6.70×109L/mol,与市售常规植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶的IC50分别达到130.43,126.16,125.33 ng/mL,交叉反应率分别为76.72%,79.32%和79.84%。与高温失活(100℃水煮5 min)的麸皮植酸酶、普通植酸酶、包被植酸酶及浓缩植酸酶IC50分别为4 205.45,4 01...
关键词：
植酸酶 杂交瘤 单克隆抗体 ELISA
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蔡勤仁 曾振灵 杨桂香 陈杖榴 方炳虎
碳二亚胺法合成了2种恩诺沙星(enrofloxacin,ENFX)人工抗原ENFX-BSA和ENFX-OVA,用紫外扫描和分析载体蛋白的氨基酸组成等方法对人工抗原进行鉴定,ENFX与BSA的结合比约为48∶1。用ENFX-BSA免疫BALB/C小鼠,采用显微克隆技术最终筛选出2株特异性分泌细胞2C5和5D5并获取腹水,纯化后腹水效价分别为1∶3200和1∶6400。2C5和5D5均属IgG2a型抗体。单抗5D5间接竞争ELISA(Ci-ELISA)的工作浓度为1∶1000,ENFX的抑制曲线在0.13～10 000 ng·ml-1之间线性关系良好(r =-0.9782),检测限(LOD)为0....
关键词：
恩诺沙星 单克隆抗体 交叉反应
[期刊] 水产学报
[作者]
宋晓玲 黄倢 史成银
小鼠骨髓瘤细胞系SP2 / 0与经溶藻弧菌 (1.15 87)免疫的BALB/C雌鼠脾细胞在PEG条件下融合 ,有4 5 .8%的培养孔有杂交瘤细胞生长 ,其培养上清液抗体阳性率为 77.4 %。经反复有限稀释法克隆杂交瘤细胞 ,获得 7株抗溶藻弧菌的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别为 :AC1-C9,AC1-C11,BB4-D4,AD1-A3 ,AD1-F3 ,AD2 -E7,AD2 -F7。取AD1-F3 扩大培养 ,注射小鼠 ,制备了抗溶藻弧菌的单克隆抗体腹水 ,滴度为 1∶10 0 0。该腹水与其他 3株溶藻弧菌菌株有强交叉反应 ,与其他 13株标准菌株无交叉反应。利用制备的单抗腹水 ,...
关键词：
单克隆抗体 溶藻弧菌 酶联免疫吸附试验
[期刊] 水产学报
[作者]
朱晓真 王俊亚 贾钊 王梓璇 王邦杰 邹钧
Ⅱ型干扰素，也称干扰素-γ（IFN-γ），是参与辅助性T淋巴细胞1（Th1）免疫应答的关键细胞因子之一。研究表明，鱼类与哺乳类Ⅱ型干扰素同源，不同的是真骨鱼类（Teleost）有两种Ⅱ型干扰素，即IFN-γ和干扰素-γ相关因子（IFN-γrel）。迄今，对鱼类IFN-γ基因的表达规律和功能已有大量报道，而对IFN-γrel的研究尚不深入，产生IFN-γ和IFN-γrel的细胞来源不清楚，它们是否有功能差异也存在争议。为此，本研究构建原核表达质粒，在大肠杆菌DE3中表达草鱼（Ci）IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白。实验结果显示，重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白，而CiIFN-γrel蛋白则不可溶。通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白，免疫小鼠制备了单克隆抗体。通过Western Blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体，结果表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γrel没有交叉反应，反之亦然，其中FITC标记的两株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析。此外，Western Blotting分析显示草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白。本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体，为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴贤福 陈溥言 蔡宝祥
马立克氏病病毒(MDV)的分子生物学研究已有20多年的历史,新技术的应用为病毒的分类、疾病的诊断和防治提供了有效的手段。MDV 通过琼脂扩散试验可被分为 A、B、C 三种主要抗原。目前已证明 B 抗原既可引起宿主的体液免疫,又可引起宿主的细胞免疫,是一种重要的中和性抗原。本试验利用提纯的 MDV B 抗原基因的大肠杆菌表达产物制备单克隆抗体,试图为 MDV 亚型的区别和真核生物系统中 B 抗原表达的鉴定提供帮助。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李晓 兰向莉 徐晓彬 杨延周 赵宝玉 靳亚平 王爱华 LU Ray
【目的】制备抗Luman募集因子N端(Luman-recruiting factor N terminal,LRF-N)蛋白的单克隆抗体。【方法】PCR扩增LRF-N端的194bp序列,构建LRF-N重组质粒pGEX-LRF-N,转染BL21(DE3)菌,诱导表达并纯化GST-LRF-N融合蛋白,以其作为抗原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,免疫4次,每次间隔10d,第4次加强免疫3d后采取小鼠脾脏,分离脾细胞,与SP2/0细胞融合,用ELISA和Western blot进行阳性细胞株的筛选和鉴定,对获得的杂交瘤细胞的细胞核型、分泌稳定性以及所分泌的单克隆抗体进行鉴定。【结果】pGEX-LR...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
郝贵杰 沈锦玉 潘晓义 曹铮 尹文林
以哈维氏弧菌GYC1108-1细菌颗粒性抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,5次免疫后取其脾细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)对杂交瘤进行筛选,阳性克隆经3次亚克隆后,获得一株针对GYC1108-1脂多糖(LPS)的特异性单克隆抗体,命名为2 F 9。该株单抗细胞培养上清ELISA效价为1∶1 600,腹水效价为6.4×104,交叉反应结果表明2 F 9除了与测试的多株哈维氏弧菌发生免疫识别外,还与溶藻弧菌、麦氏弧菌和副溶血弧菌代表株发生免疫交叉反应,但不与拟态弧菌、鳗弧菌、嗜水气单胞菌代表株等发生交叉反应。用温和高碘酸氧化法对LPS处理后,GYC...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘儒彪 胡骁飞 张改平 王慧 王方雨 刘璐 刘玺 邓瑞广 宋照军
为制备敏感性好、亲和力高、特异性强的抗沙拉沙星（Ｓａｒａｆｌｏｘａｃｉｎ，Ｓａｒａ）单克隆抗体，采用碳二亚胺法合成Ｓａｒａ人工抗原，通过免疫ＢａｌＢ／ｃ小鼠，选择血清效价高且敏感性好的小鼠，采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合，筛选分泌抗Ｓａｒａ单克隆抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉＢｏｄｙ，ＭａＢ）的杂交瘤细胞株；采用体内诱生腹水法制备Ｓａｒａ ＭａＢ，通过间接ＥｌｉＳａ和间接竞争ＥｌｉＳａ对Ｓａｒａ ＭａＢ的免疫学特性进行鉴定。结果表明：小鼠经免疫原免疫后，小鼠多抗血清效价均达到１∶１２８ ０００。选择敏感性较好的２号小鼠进行细胞融合，经多次亚克隆后，筛选出１Ｇ３、３Ｈ３两株杂交瘤细胞株，其．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张鸯 陶明亮 路保通 靳亚平
【目的】制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性。【方法】用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株;采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体;采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性。【结果】免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96%,阳性克隆率为30.18%,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵燕英 王建和 付康 陈正望 陆婕
由猪小肠中纯化鉴定Daintain/AIF-1,并以其为免疫原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术制备得到4株稳定分泌抗体的单克隆细胞株。对单抗效价、亚类、亲和常数进行分析,4株单抗都属于IgG1(κ)。又经West-ern blot证实,所制备的抗体能特异性与Daintain/AIF-1结合。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王莹 顾舒舒 何成华 王玉伟 任喆 施志玉 赵士侠 张海彬
从伏马菌素B1(FB1)杂交瘤细胞株F3中扩增出V H和V L基因片段,再经重叠延伸PCR(SOE-PCR)拼接扩增得到单链抗体(ScFv)基因,然后克隆到pCANTAB 5E噬菌粒载体上,转化感受态大肠杆菌TG1,并经辅助噬菌体M13K07超感染,构建FB1毒素噬菌体单链抗体库,ScFv基因插入率为100%,库容约为1.5×107,噬菌体的滴度为2.1×1015PFU·mL-1。免疫亲和筛选和富集后,经ELISA法最终筛选得到5株可分泌阳性噬菌体抗体的细菌。结论:伏马菌素B1噬菌体单链抗体库构建成功。
关键词：
伏马菌素B1 单链抗体 噬菌体抗体库
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈红燕 林天龙 陈日升 杨金先 陈强
利用杂交瘤单克隆抗体技术制备了AHYT 1和AH105012株嗜水气单胞菌的菌体单抗,筛选出11个能稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的细胞株,并对这些单抗进行了特性分析。经单抗类型测定,这些单抗分属IgM、IgG2α2个亚类,且均具有ELISA反应特性,腹水抗体效价在1∶104～1∶106,其中单抗4G4、2H4、GH9具有免疫荧光特性。ELISA特异性分析结果表明,4G4、2H4、FA4、GH9、CF2为嗜水气单胞菌血清型特异性单抗,4G4、2H4识别同一种血清型的嗜水气单胞菌分离株,而FA4、GH9、CF2却识别另外一种血清型的嗜水气单胞菌,并且与其他血清型的嗜水气单胞菌、温和气单胞菌以及...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
职爱民 李青梅 刘庆堂 刘宣兵 杨继飞 杨苏珍 柴书军 杨艳艳 邓瑞广 张改平
【目的】制备抗庆大霉素(gentamicin,GM)的高亲和力特异性单克隆抗体,并鉴定其免疫学特性,为进一步研究GM快速检测试剂盒和试纸条打下基础。【方法】用EDC法将BSA和OVA分别和GM偶联作为免疫原或包被原,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。用合成的BSA-GM免疫Balb/c小鼠,经过4次免疫后,用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、敏感的小鼠进行抗原超强免疫;取其脾细胞应用杂交瘤技术与骨髓瘤细胞建立分泌GM单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株;用体内诱生腹水法制备GM mAb,对GM mAb的效价、敏感性...
关键词：
庆大霉素 单克隆抗体 杂交瘤 初步应用
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