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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
彭瑶顺 李方瑾 徐佳汇 戰婷 王全溪 周伦江
采用Illumina第二代高通量测序技术对感染伪狂犬病毒PRV FJ 2012株的湖羊肾脏组织进行转录组测序，对两组羊的差异表达基因进行筛选，差异显著性表达的基因进行GO和KEGG显著性富集分析，最后选择qPCR验证分析部分差异表达基因的mRNA表达情况.结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊，与对照组相比肾脏中共发现2 679个差异表达基因，其中有1 269个基因下调，1 410个基因上调.GO显著性富集分析结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏涉及生物过程的差异表达基因最显著的GO生物学功能是蛋白质折叠，涉及细胞组分最显著的生物学功能是细胞核成分，涉及分子功能最显著的生物学功能是未折叠蛋白功能.KEGG分析表明，差异表达基因参与的代谢通路有316条，其中FoxO信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路差异最显著.本研究重点对FoxO通路的基因网络进行了分析，结果表明，该通路共有33个差异表达基因，其中22个下调，12个上调. qPCR验证结果表明，PRV FJ 2012株感染湖羊肾脏，基因STAT3、IL-6、FOXO3、BCL6、ATG8表达上调；基因IRS、SGK2、ATROGIN、PEPCK表达下调，其结果与FoxO信号通路转录组数据结果一致.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
汪招雄 何启盖 黄红亮 刘正飞 陈焕春
将伪狂犬病毒Ea株纯化后免疫雌性Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/O的骨髓瘤细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)进行筛选,获得了2株抗PRV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为3G7E3和4A6F5,其细胞培养上清及小鼠腹水效价(ELISA)分别为1:212、1:212及1:100×212、1:100×212。特异性试验和免疫荧光结果显示,3G7E3和4A6F5仅与PRV反应,而与PPV、PRRSV、JEV和HCV等病毒不发生交叉反应;用单抗建立的夹心ELISA试验能检出伪狂犬病毒。表明本研究所获得的2株单抗是PRV特异性的。这2株分泌抗PRV单抗的杂交瘤细胞株的获得为进一步建立...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
许长萌 王志建 王咪 刘倩玉 王先炜
[目的]研究猪伪狂犬病毒(PRV)感染猪肾传代细胞系(PK-15)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬在PRV感染复制过程中的作用。[方法]采用Western blot、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦、siRNA转染等方法研究了PK-15细胞感染PRV后的细胞自噬。利用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分析自噬对病毒复制的影响,再通过沉默自噬相关基因Beclin-1,进一步观察自噬对PRV复制的影响。[结果]PRV感染PK-15细胞后,LC3-Ⅰ显著转化为LC3-Ⅱ,PK-15细胞内自噬小体的数量明显增加。PRV感染增加了LC3阳性斑点的细胞数。同时,变异毒株PRV ZJ01与传统毒株PRV LA诱导的自噬存在差异。自噬的药理学变化试验和siRNA转染结果还显示自噬能够促进PRV的复制。[结论]PRV感染PK-15细胞可以诱导自噬并有利于病毒的复制。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李学伍 陈焕春 吴斌 金梅林 方六荣
对两株伪狂犬病毒在４、２８、３７℃下进行血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）。试验结果表明，伪狂犬病毒能够凝集小白鼠红血球，ＨＡ可被抗伪狂犬病毒的高免血清特异性抑制（１：６４）。并不受温度的影响。因此，该方法是诊断伪犬病的一种快速、简便、易于推广的方法。
关键词：
血凝试验,血凝抑制试验,伪狂犬病毒
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵俊龙 陈焕春 吕建强 周复春
在已经建立的PPV和PRV的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件的筛选,成功地建立了 PPV和PRV的复合PCR诊断方法,并应用于临床。利用一次PCR反应,即可同时扩增PPV的445 bp和PRV 217 bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。
关键词：
复合PCR 猪伪狂犬病毒 猪细小病毒
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
曾显成 吴异健 陈家祥 姚金水 吴宝成
采集福州郊区病仔猪的鼻腔黏液、脑、脾脏、肾脏、淋巴结等组织病料,研磨上清接种到非洲绿猴肾(Vero)细胞和狗肾(MDCK)细胞进行病毒分离,通过对分离病毒株进行形态学、血清学、荧光抗体试验、动物接种试验、PCR试验等鉴定,确定所分离的病毒为猪伪狂犬病病毒(PRV),命名为PRV-FZ株.根据GenBank收录的PRV gD基因的序列设计一对引物,通过PCR方法扩增出约1579 bp的目的片段,并将其克隆到PCAGGS载体进行酶切鉴定、核苷酸序列测定和分析.结果表明,目的片段包含一个1203 bp的开放阅读框,编码400个氨基酸组成的多肽,与GenBank中有代表性的5株参考毒株相应基因序列比较...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
方六荣 陈焕春 肖少波 徐引娣 何启盖
根据伪狂犬病病毒国外Ka株UL5 4基因核苷酸序列 ,设计一对包含UL5 4基因完整编码区的引物 ,以伪狂犬病病毒国内地方分离株Ea株细胞感染物为模板 ,PCR扩增出大小约 1.1kb特异性带。将纯化的扩增产物克隆到pBluescriptⅡsk +中 ,酶切分析证实后经双脱氧末端终止法进行全序列测定 ,序列分析结果表明Ea株UL5 4基因全长 10 86bp ,可编码 36 1个氨基酸。由二级结构预测数据推断C 末端具有典型的锌指结构域。运用Blast软件与Ka株UL5 4基因进行同源比较 ,发现Ea株UL5 4基因在核苷酸和氨基酸水平上均存在多处点突变 ,但无插入或缺失突变 ;将Ea株UL5...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄伟坚 姜焱 陈德胜 芦银华 张雪莲 陈溥言
应用PCR方法从PRVSH (上海株 )病毒培养物扩增了gG基因 ,克隆入 pcDNA3质粒 ,并进行了序列测定。结果表明 ,扩增的 gG基因片段长 1719bp ,包含一个 14 91bp的开放阅读框 (ORF) ,在起始密码子上游有TATAAAA盒 ,在终止密码子下游有AATAAA的 poly (A)尾 ,编码由 4 96个氨基酸组成的蛋白质。与Rice株相应的gG片段相比 ,核苷酸序列同源性达 97 1%。但推导的氨基酸序列同源性仅有 87 6 % ,主要是在编码区内插入和缺失核苷酸 ,出现了突变和移码 ,导致氨基酸序列同源性降低。gG具有膜蛋白的结构特点。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
汪铭书 郭万柱 娄高明 费恩阁 宣华
以质粒pBR322 作载体, 用鸟枪法克隆出了PRV 闽A 株除Bam HI-1,BamHI-2外的所有酶切片段,构建了PRV闽4株基因文库,并以克隆出的Bam HⅠ片段用光生物素标记作探针, 应用分子杂交法确定PRV闽A株绝大部分限制内切酶位点的位置。
关键词：
伪狂犬病毒 基因文库 物理图谱
[期刊] 华北农学报
[作者]
吕蔚 李潭清 韩新影 康亚男 杨润德
用纯化的猪伪狂犬病病毒闽A株(PRV-FA)免疫Balb/c鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA筛选,获得2株能稳定分泌伪狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4G9E9和4H9C9。这2株杂交瘤细胞株细胞培养上清和小鼠腹水效价(ELISA)分别为1∶6400、1∶12800及1∶12800、1∶25600。特异性鉴定结果表明,各株单抗均不与猪瘟病毒、乙脑病毒、猪呼吸繁殖障碍综合症病毒、猪细小病毒等发生交叉反应,这2株抗PRV杂交瘤细胞株的获得为进一步建立准确快速的抗原检测方法奠定了基础。
关键词：
伪狂犬病病毒 单克隆抗体 制备
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨涛涛 刘崇灵 刘晓波 赵墩 余兴龙
为探索生猪伪狂犬病毒gB–ELISA抗体水平的高低与中和抗体效价的相关性,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对177份生猪血清进行了伪狂犬病毒gB抗体的检测,同时,用中和试验对上述血清样品进行了伪狂犬病毒中和抗体的测定。试验结果通过生物统计学分析,gE抗体阴性血清的g B抗体平均S/P值和中和抗体效价(SN效价)倒数平均值的相关系数为0.926,说明g B免疫抗体S/P值与其中和抗体效价有很好的相关性。中和抗体水平的高低一般与免疫保护力呈正相关,研究结果表明gB–ELISA抗体水平可以用来评估生猪对当前流行PRV毒株的相对免疫保护力。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
娄忠子 王天户 杨宪勇 刘思当
选取3周龄左右早期断奶仔猪单独感染猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV ATCC VR-2332株)并与猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)人工共同接种,在不同时期取外周血,进行外周血常规生理指标和血液生化指标的检测,比较不同接种组中各指标的差异性。外周血淋巴细胞采用碘化丙啶(PI)单染色法染色,借助流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果表明,两病毒感染对外周血各种指标都有一定的影响,WBC、GPT、GOT、LDH、GLO及TB IL感染组高于对照组;RBC、HGB、PLT及ALB感染组低于对照组;PRRSV单独感染以及与PCV2在混合感染的变化规律基本相同,但混合感染多项指标的变化幅度更大;MCV及TP无...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
谢燕婷 郑敏 石磊 王隆柏 张志刚
利用Primer Premier 5.0及DNAstar软件对猪伪狂犬病毒gB基因、猪圆环病毒2型ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的保守区进行引物设计,选出扩增序列为猪伪狂犬病毒(373 bp)、猪圆环病毒2型(430 bp)和猪细小病毒(495 bp)的3对引物.敏感性和特异性试验结果表明,mPCR对3种病毒的核酸检测限量从猪伪狂犬病毒至猪细小病毒分别为1.62×10-6、1.47×10-6和1.28×10-4ng,对灭菌双蒸水、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒cDNA和猪瘟病毒cDNA的mPCR扩增结果均为阴性.mPCR可作为临床上猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染和猪细小病毒病的病原学快速诊断方...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
金梅林 陈焕春 刘超 罗满林 吴美洲 郭定宗 叶长发
武汉市郊区某奶牛场病死犊牛和我校兽医院住院部一头病死成年水牛,临床症状怀疑为牛伪狂犬病。采取死亡动物的脑组织分离病毒。将病料处理后接种到猪肾传代细胞IBRS—2,出现典型细胞病变,电镜观察到典型的伪狂犬病毒粒子,经抗伪狂犬病毒单克隆抗体免疫荧光染色确定其分离物为伪狂犬病毒。
关键词：
伪狂犬病 病毒分离 电镜观察 免疫荧光
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