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[期刊] 林业科学
[作者]
邱并生 李横虹 史春霖 金开璇
本研究收集了２０种感染植原体的植物材料，从患病材料和相应健康植物组织中提取总ＤＮＡ用作ＰＣＲ模板，选择两对通用引物进行巢式ＰＣＲ，扩增植原体的１６ＳｒＤＮＡ片段，回收扩增产物，通过限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析进行分类。２０种患病植物材料中的植原体有１３种属于翠菊黄化种，２种属于白腊树黄化种，３种属于花生丛枝种，２种属于三叶草丛生种。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李横虹 邱并生 史春霖 金开璇 周琦 黄习军
樱桃带化病是从以色列引种樱桃园中发现的新病害。本文报道了按照检测植物菌原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ）的方法提取ＤＮＡ，扩增患病植株中植物菌原体的１６ＳｒＤＮＡ片段，证明樱桃带化病中有植物菌原体存在，并对此扩增片段进行限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。根据ＲＦＬＰ分析结果，参照Ｌｅｅ，Ｉ．Ｍ．等的文献资料，对本次樱桃带化病病原进行鉴定与分类，初步定为Ⅶ类。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡红 李小林 孔宝华 陈海如
应用植原体 16SrRNA基因通用引物,分别对表现矮化和扁茎症状的矮牵牛植株进行巢式PCR检测,均得到约 1. 2kb的特异片段。将此特异片段与pGEM -TEasy载体连接并转化到大肠杆菌JM109感受态细胞中,通过PCR鉴定,序列测定及同源性比较分析,结果表明:这 2个植原体株系 16SrDNA片段G+C含量分别为47. 1%和 47. 0%,具有其他柔膜菌纲原核生物 16SrRNA基因碱基组成特征;与 16Sr组中的代表株系 (西方翠菊黄化,SAY)同源率达到最高,分别为 99. 1和 98. 6%,故认为这 2个株系为该组成员之一。
[期刊] 林业科学
[作者]
王圣洁 王胜坤 林彩丽 于少帅 汪来发 朴春根 郭民伟 田国忠
【目的】建立一种能够特异性检测和鉴定16SrⅠ组植原体的环介导恒温扩增技术,实现16SrⅠ组植原体的快速检测。【方法】以植原体tuf基因作为靶标,通过序列比对,设计多组具有特异性的LAMP引物组,筛选出一套适用于16SrⅠ组植原体的特异性检测体系。以16SrⅡ组、16SrⅤ组、16SrⅩⅨ组植原体样品按照此检测体系进行反应,来验证其特异性;同时将稀释后的感病组织样品同步进行PCR和LAMP检测,以确定其检测灵敏度。对来自不同省市的6份田间样品以及9份组培样品进行检测,以验证其检测的稳定性。【结果】16Sr
[期刊] 中国水产科学
[作者]
费来华 李赟 陈家鑫
运用PCR扩增10种海参的16SrDNA部分序列,并测序。获得大小为566bp的序列,利用DNAsp4.0软件分析比较10种海参的碱基组成、各碱基变异位点数、插入或缺失位点数,并采用MEGA4.0软件分析彼此间的遗传距离。结果发现,10种海参富含AT碱基,A+T的含量平均为57.0%,不同种海参间发生碱基转换、颠换及发生插入或缺失变异的位点数差异很大,10种海参彼此间的遗传距离在0.007~0.316之间。所得结果与GenBank中10种海参的相应序列进行比对分析,同时用MEGA4.0和PAUP*4.0软件构建进化树,分析其亲缘关系。结果表明,利用16SrDNA序列的差异可以将分属于海参科(H...
关键词：
海参 16SrDNA 系统发生
[期刊] 水产学报
[作者]
储卫华 陆承平
根据已发表的气单胞菌16SrDNA基因序列及气单胞菌气溶素(aerolysin)基因序列,设计了2对引物,建立了检测致病性嗜水气单胞菌的PCR方法。通过对12株气单胞菌的检测,发现16SrDNA引物具有高度的特异性,仅对嗜水气单胞菌扩增阳性。而Aero基因引物检测结果与采用生物学方法(鲜血平板法)检测的结果符合率为97.2%,且具有高度的敏感性,可检测最低1fg的模板。将16SrDNA与Aero基因结合PCR方法检测致病性嗜水气单胞菌与用致病性嗜水气单胞菌检测试剂盒的符合率为94.4%。该方法的建立为致病性嗜水气单胞菌的检测提供了一种简便、快速的途径,是一种比较实用的致病性嗜水气单胞菌的检测方...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马艳芝 张玉星
中国梨属植物资源丰富,RAPD技术已广泛用于梨资源遗传多样性研究。通过对不同部位提取的DNA纯度进行测定,并进行RAPD扩增分析,为RAPD技术在梨属种质资源中的应用提供参考。以鸭梨和杜梨为试验材料,利用CTAB法对其幼叶、老叶及韧皮部等不同组织或同一组织的不同时期进行了基因组DNA的提取,并对其进行了RAPD反应的比较。所提取的鸭梨的幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部DNAOD260/OD280的比值分别为2.0、1.8、1.7;杜梨幼嫩叶片、成熟叶片、韧皮部DNAOD260/OD280的比值分别为1.9、1.8、1.6。二者都能成功进行RAPD扩增,且扩增结果基本一致。利用CTAB法从鸭梨和杜梨的...
关键词：
梨属 不同部位 基因组DNA RAPD
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张荣 崔晓艳 孙广宇 康振生
采用nested-PCR技术对小麦蓝矮病植原体核糖体蛋白基因片段进行扩增,并对扩增片段进行了序列测定及分析。结果表明,nested-PCR扩增得到约1.2kb的特异片段,经核苷酸序列测定获得小麦蓝矮病植原体核糖体蛋白基因序列(1136bp);小麦蓝矮病植原体(WBD)与16Sr组中的各亚组代表植原体亲缘关系均达到96%以上,其中与三叶草变叶病植原体(CPh株系)亲缘关系最近,核苷酸同源性为99.7%,归为翠菊植原体(CandidatusPhytoplasmaasteris)16Sr-C亚组,该结果与以前报道的利用16SrDNA的分组结果一致,从亚组水平上进一步确定了小麦蓝矮病植原体的分类地位。
[期刊] 林业科学
[作者]
李江山 金开璇 汪跃 熊耀国 邱并生
An oligonucleotide primer set (PaF/PaR) was designed for polymerase chain reaction (PCR) amplification of an approximately 1. 2kb fragment DNA from Paulownia Witches' broom(PaWB) MLO on the basis of 16S rRNA sequence from O-MLO. Amplification of a 1. 2kb DNA fragment from PaWB-MLO-infected plants D...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王海妮 吴云锋 安凤秋 顾沛雯 张昭亮
【目的】枣疯病是枣树上由植原体引起的一种毁灭性病害,遍布于中国华北、西北、华东、华南等25个省(市)的枣区,造成了巨大的经济损失。【方法】经PCR扩增,分别对中国陕西的彬县、阎良、武功、佳县、杨凌,河北沧州和山东德州7个枣区的枣疯病样品和杨凌4个酸枣丛枝病样品植原体16SrDNA基因保守序列和延伸因子tuf基因进行克隆和测序。【结果】获得枣疯病和酸枣丛枝病植原体的16SrDNA基因片段均为1239bp,tuf基因均为851bp。通过序列同源性比较,结果表明中国陕西、河北、山东的枣疯病的病原一致,归属于植原体16SrⅤ-B组。由于枣疯病和酸枣丛枝病的植原体16SrDNA有5个碱基的差异,tuf基...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董秉义 陈永萱 许少玉 祁方巧 郭永红
从各地的蜜蜂和植物花上得到70多个螺原体(spiroplasma)分离物.用微量注射法接种健康蜜蜂,证明在蜜蜂和植物花上分离到的螺原体均对蜜蜂致病,并引起死亡.每头蜜蜂接种量:蜜蜂代表分离物Hs-1为1.4×10~7,荆条花的分离物 Fs-14为3.4×10~8,接种后3～6d,供试蜜蜂100%死亡,而对照蜜蜂全部存活.血清学的变形试验和 ELISA 方法测定各螺原体分离物血清学关系的结果,证明蜜蜂螺原体的抗血清,对蜜蜂上和植物花上分离到的螺原体大多数分离物都呈阳性反应,但反应强弱有明显差异,说明其间血清学关系比较复杂.根据以前的研究和本实验的结果,目前我国在蜜蜂上和植物花上分离到的螺原体,主...
关键词：
蜜蜂螺原体 花螺原体 致病性 血清学
[期刊] 水产学报
[作者]
周新倩 杨锐 吴小凯 黄艳花
为研究浙江近海浒苔Ｕｌｖａ ｓｐｐ．（ＥｎｔＥｒｏｍｏｒｐｈａ ｓｐｐ．）外生细菌多样性，采用传统的形态学和１６ｓ ｒＤｎａ测序分析的方法，从舟山朱家尖、宁海国华电厂和奉化南沙３个地区分离到可培养的浒苔外生细菌及其周围海水细菌６５株。根据细菌菌落特征和革兰氏染色结果等将分离到的细菌分为２６种表型。１６ｓ ｒＤｎａ序列测序比对发现：菌株与不动杆菌属（ａｃｉｎＥｔｏｂａｃｔＥｒ）、交替单胞菌属（ａｌｔＥｒｏｍｏｎａｓ）、弧菌属（ｖｉｂｒｉｏ）、假交替单胞菌属（ｐｓＥＵＤｏａｌｔＥｒｏｍｏｎａｓ）、微小杆菌属（ＥｘｉｇＵｏｂａｃｔＥｒｉＵｍ）、芽孢杆菌属（ｂａｃｉｌｌＵｓ）、赤细菌属（Ｅｒｙｔｈｒｏ．．．
关键词：
浒苔 16S rDNA 外生细菌 多样性
[期刊] 华北农学报
[作者]
司源 郭亦琦 孔航辉
非编码区ITS(The Internal Transcribed Spacer)片段是目前分子系统学研究中应用最广的分子标记之一。运用生物信息学ORF finder技术,以单子叶网状叶脉植物的ITS片断为例进行分析,探讨了ITS内编码区5.8S和非编码区ITS1和ITS2的基本位置。并通过分析单子叶网状叶脉植物和菝葜科部分种类的ITS序列特点,研究了该片段在科、属、种间存在的关系和变异特点。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王洁 田国忠 徐启聪 刘永光 高瑞 李向东 竺晓平
【目的】初步明确自然条件下可能感染泡桐丛枝病植原体的寄主植物。【方法】用植原体16S rRNA基因的通用引物,对从泡桐丛枝病病树周围采集的表现黄化、小叶、皱叶、丛枝等症状或无症状的16种植物样品的DNA进行巢式PCR扩增,对所扩增的片段进行序列测定和分析。并利用泡桐从枝病植原体延伸因子的抗血清对部分样品进行间接免疫荧光观察。【结果】巢式PCR结果显示从牛筋草(Eleusine indica)、辣椒(Capsicum annuum)、狗尾草(Setaria viridis)、山药(Dioscorea opposita)、灯笼泡(Physalis angulata)、花生(Arachis hypo...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘晓云 陈文新
采用 16SrDNAPCR -RFLP分析和表型数值分类 ,对分离自三叶草 (Trifolium)、猪屎豆 (Crotalaria)和含羞草(Mimosa) 3属植物的根瘤菌进行了分类研究。 16SrDNAPCR -RFLP分析表明 ,在 80 %的相似性水平上 ,6 7株待测菌株和 18株参比菌株归属到慢生根瘤菌属 (Bradyrhizobium)、中慢生根瘤菌属 (Mesorhizobium)、土壤杆菌属 (Agrobac terium)和根瘤菌属 (Rhizobium)与中华根瘤菌属 (Sinorhizobium) 4个系统发育分支。进一步对其中 5 6株待测菌株和14株参比菌株进行表型...
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