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[期刊] 水产学报
[作者]
陈菲 沈铭辉 柯才焕 蔡明夷 游伟伟
应用组织切片方法,比较观察了杂色鲍普通二倍体、人工诱导三倍体、人工诱导雌核发育单倍体和雌核发育二倍体在成熟分裂和第一次卵裂期间的细胞学变化,以探讨人工诱导杂色鲍雌核发育的细胞学机制。结果表明,精子经紫外线辐射进行遗传失活处理后,仍然能够进入卵子,并激动卵子发育,卵子能够正常完成两次减数分裂,与普通受精卵没有明显差别。精子入卵后形成精核,大多能够逐渐解凝、液化并膨大,最终形成形态正常的雄性原核,但在第一次卵裂早期退化成浓缩的染色质小体(DCB),并在胞质分裂时随机地分配到其中一个子细胞里的分裂沟附近。在人工诱导三倍体和雌核发育二倍体受精卵中,受精卵经细胞松弛素B处理后,染色单体在第二次成熟分裂期...
[期刊] 水产学报
[作者]
潘英 李琪 于瑞海 王如才
运用荧光显微镜观察了栉孔扇贝正常卵子与雌核发育卵子在受精和成熟分裂过程中的核相变化。结果表明,尽管紫外线照射没有影响受精卵的成熟分裂以及雌性、雄性原核的形成,但使雌核卵的发育速度出现明显的滞缓。在第1次卵裂中期,雌核发育卵子中的雄性原核没有像雌性原核那样形成染色体,而是浓缩为一染色质小体(DCB),游离在细胞质中,不参与核分裂。胞质分裂结束时,DCB位于2个卵裂球之一的细胞质内或在赤道板处被分割成两部分。实验结果首次提供了栉孔扇贝雌核发育的细胞学证据。
[期刊] 水产学报
[作者]
董迎辉 杨爱国 刘志鸿 任建峰 周丽青 李赟
采用Bouin氏液固定、石蜡切片和苏木精-伊红染色方法,在光镜下对栉孔扇贝正常发育和6DMAP第二极体抑制型雌核发育二倍体卵在受精和第一、二次卵裂过程中的核相变化进行了详细观察。结果表明,正常发育卵内的雌、雄原核能融合为合子核,而雌核发育卵内的精核、雌核变化相当复杂。精核至少存在两种状态:(1)精核只在刚入卵时发生轻微膨胀,以后保持固缩状态,不膨大形成雄原核;(2)在第二次成熟分裂之后,精核再次去浓缩膨胀,但其体积并未达到正常雄原核的大小。在第一、第二次卵裂过程中,此精核不参与核分裂,以致密的染色质体(DCB)存在于两组分开的母本染色体之间,卵裂结束时滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨青 李琪 于瑞海 李吉清
利用紫外线诱导进行栉江珧(Atrina pectinata)雌核发育单倍体的研究,用强度为2 561μW/(cm2.s)的紫外线(254nm)照射不同时间的精子与正常卵子受精展开实验。结果发现随照射时间的增加,卵裂率、早期胚胎存活率和D型幼虫发生率总体呈下降趋势,遗传失活的精子与正常卵子受精后其胚胎发育至D型幼虫前期停止。经紫外线照射的精子受精后所产生的单倍体胚胎发育速度慢于正常受精所产生的二倍体胚胎,各照射组均出现非整倍体。40 s照射组中卵裂率达到51.2%,D型幼虫发生率为0,单倍体率最高,达到36.8%,出现“Hertwig效应”。由于雌核发育单倍体的有效诱导既需要精子遗传物质失活、又...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨睿姣 张轩杰
通过对彭泽鲫(♀)×彭泽鲫(♂)的受精细胞学观察,彭泽鲫卵子受精后,具有与两性生殖鱼类相同的精子入卵过程和排出极体,但精子入卵后精核始终不解凝,也不与雌性原核融合。对精母细胞成熟分裂中期染色体观察表明,彭泽鲫精母细胞在进行成熟分裂时未发生同源染色体配对,全部为单价体形式,其精子形成过程中第一次成熟分裂异常;对精子与体细胞DNA含量进行比较,体细胞DNA含量与精子DNA含量比为2.218:1,精子DNA含量发生了减半。以上实验结果说明彭泽鲫为雌核发育鱼类。同时,作者对卵核染色体倍性保持稳定的方式及精卵不同的形成机制进行了初步的分析。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
迟长凤 杨爱国 王清印 刘志鸿 周丽青
用1500μW/cm2的紫外线照射长牡蛎(Crassostrea gigas)精子60 s以进行灭活处理,并使之与栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵子受精,在卵子受精后排出第一极体前用6-DMAP(50 mg/L)处理受精卵,持续处理35 min,抑制第一极体和第二极体的排放,诱导异精雌核发育四倍体。采用二脒基苯基吲哚(DAPI)荧光染色显微观察法,对灭活的长牡蛎精子诱导的栉孔扇贝雌核发育四倍体早期胚胎发育过程进行细胞学观察。结果表明:经紫外线灭活过的长牡蛎精子进入栉孔扇贝卵子后发生轻微膨胀;在第一次卵裂中期,精核形成一致密的染色质小体(DCB),位于两组分开的母本染色体之间,不参与...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
赵峰 杨爱国 刘志鸿 周丽青 王清印
取栉孔扇贝 (Chlamysfarreri)精子在 80 0 μW/(cm2 ·s)的紫外线下辐射 ,然后与正常卵子受精 ,每隔 0 .5min取“受精卵”固定。在扫描电镜下连续观察精子的入卵过程 ,然后与正常精子的入卵过程进行比较。结果表明 ,紫外辐射后的精子可以划分为 3种类型 :I类精子 ,基本无明显变化 ,可以激发卵黄膜举起形成受精膜 ,同时诱发卵子发生皮层反应 ,在受精锥的作用下正常入卵 ,但入卵的时间较正常精子晚 ;II类精子 ,顶体膜破裂 ,顶体丝伸出 ;III类精子 ,顶体丝伸出 ,鞭毛脱落。由于II、III类精子在紫外辐射条件下诱发了顶体反应 ,融解卵膜的酶提前释放 ,因而不...
关键词：
栉孔扇贝 雌核发育 精子入卵 扫描电镜
[期刊] 水产学报
[作者]
孙远东 袁志栋 谭树华 范军豪 周工健
湘云金鳙的卵子经适宜UV剂量灭活处理的异源四倍体鲫鲤精子激活后,在4~6℃下冷休克11~13 min,抑制第二极体排出和第一次卵裂使染色体加倍,成功获得了极体雌核发育(mei G)和有丝分裂雌核发育(mit G)湘云金鳙二倍体个体。结果发现,用异源四倍体鲫鲤精子诱导获得mei G、mit G成活率可达到19.4%±2.3%和7.3%±1.9%。运用形态学测量、染色体计数和微卫星标记技术对雌核发育二倍体个体(mei G、mit G)进行了分析,其染色体数目为48;微卫星分析表明,雌核发育二倍体基因组完全来自于母本,没有受到父本染色体的污染,证实其为雌核发育二倍体。对雌核发育湘云金鳙性腺发育进行连...
关键词：
湘云金鳙 雌核发育 遗传育种 体色
[期刊] 水产学报
[作者]
杨育凯 谢仰杰 蔡明夷 简林江 陈庆凯 楼宝 王志勇
为建立黄姑鱼雌核发育诱导方法,实验利用紫外线照射使黄姑鱼精子遗传失活,与卵子授精后再通过冷休克抑制极体排放进行倍性恢复,成功诱导出黄姑鱼雌核发育二倍体。精子经强度为3 800μW/(cm2.s)的紫外线照射10～100 s,受精卵孵化率呈现明显的Hertwig效应;当照射时长达到60 s以上,各实验组全部孵出仔鱼均呈现单倍体综合症。精子的紫外线照射时间、受精卵冷休克起始和持续时间等三因素三水平正交实验结果表明,精子经紫外线照射60 s,受精2 min后卵子在3～4℃海水中持续冷休克10 min为最佳诱导条件组合,可以获得最高的孵化率(16%)。最佳组合仔鱼形态和细胞相对DNA含量与正常二倍体一...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄松钱 曹小娟 王卫民
对大鳞副泥鳅(PP)、二倍体泥鳅(DD)和四倍体泥鳅(TT)自交或杂交受精卵进行冷休克(冷休克条件为:受精后5min开始,利用2～3℃冰水冷休克处理30～35min),获得6种多倍体泥鳅后代(DD×PP-0,3n=74;DD×DD-0,3n=75;DD×TT-0,4n=100;TT×PP-0,5n=124;TT×DD-0,5n=125和TT×TT-0,6n=150。母本在前,父本在后)。利用流式细胞仪对不同诱导组合不同时期倍性进行检测发现:1月龄,DD×PP-0三倍体诱导成功率为87.50%,DD×DD-0三倍体诱导成功率为53.85%,DD×TT-0四倍体诱导成功率为90.91%,TT×PP-0五倍体诱导成功率为84.96%,TT×DD-0五倍体诱导成功率为76.92%,TT×TT-0六倍体诱导成功率为12.50%。12月龄,各组合多倍体诱导成功率分别为91.43%(DD×PP-0,3n=74),60%(DD×DD-0,3n=75),85.19%(DD×TT-0,4n=100),87.50%(TT×PP-0,5n=124),83.33%(TT×DD-0,5n=125)和6.06%(TT×TT-0,6n=150)。12月龄各诱导组合多倍体倍性组成与1月龄相似,诱导成功率随诱导多倍体后代的倍性增加而降低。对不同诱导组合后代进行生长统计分析发现:不同诱导组合后代在生长早期差异不显著,生长后期表现出不同程度的差异。其中,以四倍体泥鳅为母本、大鳞副泥鳅为父本的诱导五倍体后代(TT×PP-0)12月龄时期全长和体质量值最大。同时,荧光受精细胞学观察证实冷休克处理通过抑制受精卵第二极体的释放获得三倍体型后代。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
支宇 刘其根 吴嘉敏 刘东
为了开发浙江青田稻田田鱼优良种质资源，采用紫外线灭活精子、染色体加倍等雌核发育技术，成功获得青田田鱼雌核发育子一代(G_1)。对照普通子一代(F_1),测量和观察160日龄G_1的形态特征和性腺发育情况；在全基因组水平上，利用SNP技术，鉴定和分析G_1遗传物质。结果发现G_1有3种体色，个体间生长差异大，黑色生长最快，平均体质量达392.45 g。G_1平均生长速度慢于F_1。G_1形态参数与F_1存在差异，全长与体高之比差异极显著。G_1个体之间卵巢发育不一致，大个体的卵巢发育类似于F_1,主要为Ⅲ时相的初级卵母细胞。SNP检测发现，通过1次雌核发育技术的种质改良，田鱼遗传物质的纯合性由母本平均38.42%提高到G_1平均61.85%,并有父本遗传物质渗入G_1个体，致使个体在体色和生长速度方面均表现出显著的差异性。本研究成功得到了青田田鱼人工雌核发育群体，为今后青田田鱼育种和种质资源开发奠定了良好基础。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
董迎辉 杨爱国 刘志鸿 任建峰 周丽青 宫学红
2004年5~6月,用紫外线照射法使精子遗传物质失活,结合用6-二甲基氨基嘌呤(6-dime-thylaminopurine,6-DMAP)处理受精卵抑制第2极体释放,诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体。采用中心波长254nm、光照强度800μw/cm2·s的紫外线照射栉孔扇贝精子50s,然后立即与正常卵子授精,在20℃水温下,受精后35~40min光镜下观察到20%~30%卵子排出第1极体时,分别以40、50、60、70、80mg/L的6-DMAP持续处理受精卵10、15、20min,染色体计数法检测各处理组二倍体率,从而筛选诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体两因素的最佳组合。结果表明,6-DMAP的浓度和...
关键词：
栉孔扇贝 人工诱导 雌核发育二倍体
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李停 贾永义 刘士力 蒋文枰 李宁 杨润清 顾志敏
采用紫外线照射鲤鱼（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ Ｃａｒｐｉｏ）精子使其遗传物质失活，并用冷休克方法抑制翘嘴鲌（Ｃｕｌｔｅｒ ａｌｂｕｒｎｕｓ）卵第二极体的排出，诱导出翘嘴鲌雌核发育二倍体。运用３因素５水平二次正交旋转组合设计方法，分别建立冷休克起始时间（ｘ＿１）、处理时间（ｘ＿２）和处理温度（ｘ＿３）３个因素与翘嘴鲌雌核发育率（ｙ＿１）和孵化率（ｙ＿２）两个指标之间的二次回归模型，探究翘嘴鲌减数分裂雌核发育的最优诱导条件组合。并采用响应面分析法（ｒｓＭ），讨论各因素水平的单因素效应、互作效应对响应值的影响。结果表明，受精后６ Ｍｉｎ进行冷休克，处理时间为１８ Ｍｉｎ，休克温度为７℃时，雌核发育率达最大（．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
支宇 刘其根 吴嘉敏 刘东
为了开发浙江青田稻田田鱼优良种质资源，本研究采用紫外线灭活精子、染色体加倍等雌核发育技术，成功获得青田田鱼雌核发育子一代（G_(1)）。对照普通子一代（F_(1)），测量和观察了160日龄G_(1)的形态特征和性腺发育情况；在全基因组水平上，利用SNP技术，鉴定和分析了G_(1)遗传物质。结果发现G_(1)有3种体色，个体间生长差异大，黑色生长最快，平均体质量达392.45 g。G_(1)平均生长速度慢于F_(1)。G_(1)形态参数与F_(1)存在差异，全长与体高之比差异极显著。G_(1)个体之间卵巢发育不一致，大个体的卵巢发育类似于F_(1)，主要为Ⅲ时相的初级卵母细胞。SNP检测发现，通过1次雌核发育技术的种质改良，田鱼遗传物质的纯合性由母本平均38.42%提高到G_(1)平均61.85%，并有父本遗传物质渗入G_(1)个体，致使个体在体色和生长速度方面均表现出显著的差异性。本研究成功得到了青田田鱼人工雌核发育群体，为今后青田田鱼育种和种质资源开发奠定了良好基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳学周 宁鑫 徐永江 赵明 李春广 李军
采用紫外线(UV)灭活的冷冻真鲷(Pagrosomus major)精子激发漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)卵子发育。冷冻真鲷精子适宜的UV灭活剂量为72 mJ/cm2,随着处理时间延长,胚胎的孵化率呈现哈特维希效应,其中40 s灭活组胚胎孵化率达到最高[(29±1.9)%],单倍体率100%。利用冷休克法抑制卵子第二极体排出,成功获得雌核发育二倍体仔鱼。冷休克处理温度为0~2℃,处理起始时间3 min、持续时间45 min时,雌核发育二倍体胚胎的孵化率最高,达(9.4±0.71)%,获得批量雌核发育仔鱼。雌核发育仔鱼经流式细胞仪和染色体倍性鉴定,均为二倍体(2n=...
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