为探究人参灰霉病菌Botrytis cinerea的种群表型和基因型多样性,对从我国人参主产区的8个地区所分离到的对人参有致病性的154株灰葡萄孢菌株进行研究,在PDA上培养3周观察其表型,通过PCR扩增的方法鉴定其转座因子类型和MAT基因型,并对不同转座因子类型的菌株进行致病力的测定。通过试验得到8种表型和3种转座因子型(Boty、Flipper和Transposa),不存在Vacuma类型,其中Transposa类型所占比例最高为93.51%,且致病力最强;同时也发现了含MAT1-1和MAT1-2的菌株个数分别为73株和75株,2种基因型在该种群中均匀分布。以上研究结果表明,我国人参灰霉病菌B.cinerea具有相对均匀的种群多样性,同时也具有丰富的表型和遗传分化。

为探究连续变温对番茄灰霉病致病性影响,以中抗性品种Money Maker为供试植株,在离体叶片上接种,在RH55%,RH75%,RH85%和RH95%条件下分别设置12个变温处理,研究接种叶片在5d内病斑生长状况。接种后24h开始观察,每隔12h观测1次,以病斑面积和平均生长速度作为衡量依据。结果表明:培养5d后RH55%、RH75%和RH85%条件下10h和12h处理病斑面积明显大于同湿度其他处理;1,2,4,18,20和22h处理生长量出现不同程度的抑制,最大抑制作用可达到70%以上。在RH95%条件下1,2,4h处理生长情况明显低于同湿度其他变温处理,但18,20,22h没有抑制作用。这...

目的杀菌剂对病菌菌丝形态和超微结构的影响,是进行杀菌剂作用机理研究的基础。方法采用扫描电镜和透射电镜,研究了丙烷脒对灰霉病菌菌丝形态和超微结构的影响。结果药剂处理1 d后,菌丝局部不规则膨胀,菌丝隔膜间距变短;药剂处理3 d,菌丝局部严重膨大,且膨胀部位失水畸形。透射电镜观察表明,药剂处理1 d后,菌丝细胞线粒体体积增大、数目增多,细胞核的结构已不明显,细胞内出现囊泡;3 d后,各细胞器结构紊乱,并含有大量的无膜透明内含物,有较大的空腔形成,细胞壁外围沉积大量的外渗物,菌丝组织坏死。结论丙烷脒对灰霉病菌菌丝形态和超微结构的影响不同于常用杀菌剂品种,预示丙烷脒的作用机理独特。对丙烷脒作用机理进行...

【目的】探索和优化检测条件,建立同时检测草莓灰霉病菌Botrytiscinerea,炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides和黄萎病菌Verticillium dahliae的三重PCR检测体系,为3种病害的早期快速诊断和鉴定提供技术和方法。【方法】选择可以组合的3种病原菌特异引物,研究多重PCR的影响因素,优化PCR退火温度,采用正交试验方法,以3个引物组、TaqDNA聚合酶、dNTP和Mg2+六因素三水平优化多重PCR体系。【结果】建立并验证适合上述草莓主要病原菌的三重PCR最佳检测体系,可分别扩增出729、539和450bp的特异条带,最适退火温度为50℃,2...

从天津市茄子保护地中分离出１２２个茄子灰霉病菌株中，多菌灵的抗性菌占４１０％，且多为高抗菌株；多菌灵与乙霉威间表现负交互抗性关系；速克灵和扑海因的抗性菌比率为２７９％，均为低抗水平，ＥＣ５０为２３０１１２０３８１０μｇ／ｍＬ，两种药剂存在交互抗性；对多菌灵、速克灵、扑海因均有抗性的菌株占供试菌株的２７９％，均敏感的菌株占５９０％，对多菌灵有抗性而对速克灵和扑海因敏感的菌株只占１３１％。

采用菌丝生长速率抑制法测定了北京、山东、江西等７个地区３１株灰霉菌株和１株实验室标准菌株（ＢＯ５．１０）对腐霉利的毒力。结果表明，３２个供试灰霉菌株中，８个菌株对腐霉利属中等抗性，２０个菌株属于低等抗性，４个菌株为敏感菌株。进一步测定了个别抗性菌株与敏感菌株的高盐渗透压、甘油含量以及电导率之间的差异。供试抗性及敏感菌株在１．２５～１０ ｇ／Ｌ Ｎａ ＣＬ浓度范围内可刺激菌落生长，超过此浓度界线抑制菌落生长，且对抗性菌株抑制率大于敏感菌株。抗腐霉利菌株甘油含量和电导率均高于敏感菌株。以上结果为灰霉病的抗性治理提供了理论依据。

为了探究人参灰霉病新流行成因，对来源不同寄主和地区的１６株灰葡萄孢（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ）菌株的生物学特性及致病力进行比较。结果表明：供试菌株在ＰＤａ和Ｐｓａ培养基上生长较好，ＰＪａｒ１、ＰＪａＬ３、ＰｙｃＬ１和ＰＪＬＬ１最适培养基为Ｐｓａ，ＦｓｙＬ１、ＰＪａＬ１、ＰＪａＬ２、ＰｙＬＬ１、ＰＢＬＬ１、ＰＱａＬ１、ＰＨＬＬ１和ＬｓｙＦ１最适培养基为ＰＤａ，其余菌株最适培养基为查氏培养基；菌丝生长温度范围均为５～２５℃，ＦｓｙＬ１、ＰＪＬＬ２、ＰｒＨＬ１、ＰＨＬＬ１和ＬｓｙＦ２最适生长温度为２５℃，其余菌株在２０℃时生长最快；供试菌株在Ｐ Ｈ值３～１１的范围内均能生长，ＰｙｃＬ１和Ｌｓ．．．

为探明肉桂精油对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌的抑制作用并初步探究其对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌的抑制机理，使用菌丝生长速率法和熏蒸法观察不同质量浓度肉桂精油处理下苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌的菌落直径，测定肉桂精油对苹果腐烂病和番茄灰霉病的活体组织抑制效果，探究肉桂精油对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌菌体的形态变化、细胞膜通透性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）、可溶性蛋白和还原糖含量的变化规律。结果表明：1）菌丝生长速率法测得肉桂精油质量浓度为250 mg/L时，对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌抑菌率分别为98.31%和99.06%；熏蒸法测得肉桂精油质量浓度为8 000 mg/L时，对苹果腐烂病菌和番茄灰霉病菌抑菌率分别为50.57%和58.79%。2）当肉桂精油质量浓度为5 000 mg/L时，对苹果腐烂病和番茄灰霉病活体抑制效果分别为54.30%和64.10%。3）经肉桂精油处理后的苹果腐烂病菌菌丝和番茄灰霉病菌菌丝干瘪、坍塌，表面有分叉，菌液电导率上升，菌体SOD酶活性下降，MDA含量上升，可溶性蛋白和还原糖含量下降，最终扰乱菌体各项生理生化反应，进而达到抑菌效果。本研究可为开发防治苹果腐烂病和番茄灰霉病的植物源农药提供依据。

【目的】优化番茄灰霉病菌拮抗菌的发酵条件,初步探究其抑菌效果,为番茄灰霉病菌的生物防治提供潜在的资源菌。【方法】以前期从大蒜鳞茎中筛选出的拮抗菌D6和D10为研究试材,以接种量、温度、摇床转速和装液量为考察因素,设计四因素三水平正交试验,对D6和D10的发酵条件进行优化,并研究优化条件下D6和D10的无菌滤液对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用。【结果】D6和D10的最佳摇床培养条件分别为,D6:接种量4%,温度22℃,转速180r/min,装液量50mL;D10:接种量4%,温度26℃,转速150r/min,装液量75mL。当D6的无菌滤液质量分数达到15%时,其抑制率最高达到85.33%;当D...

从江苏常州草莓上分离到的 Botrytis cineren 菌株 B205对多菌灵、速克灵均表现高度抗性。多重抗性菌株在含多菌灵或速克灵的 PSA 培养基上菌丝生长很少受抑制,在无药的 PSA 培养基上菌丝连续培养8代后,抗性程度并不下降,只表现生长速率有所降低;对扑海因呈交互抗药性,但对福美双、克菌丹、百菌清、退菌特、粉锈宁等杀菌剂的反应与敏感菌相似;该多重抗性菌的产孢能力明显低于敏感菌。

【目的】甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)BH21是一株对葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)有较好拮抗作用的海洋源细菌,鉴定该菌株脂肽类抗菌物质合成基因,检测脂肽粗提物对葡萄灰霉病菌的拮抗作用,为应用该菌株防治葡萄灰霉病提供科学依据。【方法】通过特异引物的基因组PCR法检测甲基营养型芽孢杆菌BH21菌株合成脂肽的能力;盐酸沉淀和甲醇抽提法从无菌发酵液中提取脂肽粗提物;排油圈法检测脂肽粗提物的表面活性;采用菌丝生长速率法检测脂肽粗提物对灰霉病菌菌丝生长的抑

以辽细辛精油为材料,以黄瓜灰霉病菌为靶标,采用干菌丝和鲜菌丝两种处理方法,测定了辽细辛精油对黄瓜灰霉病菌菌丝体电导率的影响,结果表明,无论是干菌丝还是鲜菌丝,精油处理后灰霉病菌菌丝体的电导率均随着精油处理浓度的加大而提高、随处理时间的延长而提高。说明辽细辛精油对黄瓜灰霉病菌菌丝体细胞膜的通透性具有一定影响,可引起细胞膜的伤害,造成膜功能的紊乱。结果还表明,采用鲜菌丝处理法、处理时间为12～24 h时,测定结果比较理想。该结果为进一步研究辽细辛精油的抑菌机理奠定了基础。

【目的】灰霉病是草莓生产过程中的一种重要病害,严重影响了其产量和品质。论文旨在明确四川省草莓灰霉病菌对咯菌腈的抗性频率以及抗性机制,为草莓灰霉病的药剂防治提供理论依据。【方法】2016—2017年从四川成都、德阳、眉山、乐山及雅安等地采集草莓灰霉病样本,并分离纯化得到188株草莓灰霉病菌菌株。采用区分计量法测定188株灰霉病菌对咯菌腈的敏感性水平,采用菌丝生长速率抑制法测定咯菌腈对代表性菌株的毒力和渗透压敏感性,采用甘油铜比色法测定经咯菌腈处理的抗性菌株和敏感菌株甘油含量,采用分段测序对抗性菌株和敏感菌株Ⅲ型组氨酸激酶基因BOS1(BC1G_00374)扩增测序,采用Swissmodle和I-TASSER预测和评价突变对BOS1的结构影响。【结果】188株灰霉病菌菌株中有8株表现为高抗,9株为中抗,43株为低抗,其余表现为敏感;咯菌腈对代表性菌株的EC50介于0.03—0.62μg·mL~(-1),代表性菌株的抗性倍数范围为2.2—45.9。NaCl浓度在1.25—10 g·L~(-1)可刺激敏感菌株生长,浓度在1.25—20 g·L~(-1)范围可刺激抗性菌株生长,但>40 g·L~(-1)时则抑制菌丝生长,尤其对抗性菌株,抗性越高抑制作用越强;在正常条件下各代表性菌株甘油含量介于0.0025—0.0148μg·mL~(-1),且菌株的甘油含量与咯菌腈抗性没有明显的关联性,但在使用咯菌腈处理(0.1μg·mL~(-1))抗性菌株和敏感菌株后,甘油含量均上升,且抗性菌株甘油含量上升幅度明显低于敏感菌株。低抗菌株YAHY-13、CDCZ-2以及中抗菌株CDCZ-42在TAR和HAMP区域均发生突变,中抗菌株CDCZ-20和高抗菌株MYFC-10、CDCZ-43在TAR和REC区域均有突变,但CDCZ-20菌株在TAR区域位点是I365N,而两株高抗菌株在TAR区域位点是I365S。不同突变位置对BOS1区域结构有不同程度的影响,其中F127S、I365N、I365S、V1136I、A1259T均处于BOS1区域结构的无规则卷曲,但TAR区域I365N和I365S使区域结构无规则卷曲发生整体偏移。【结论】四川省已有部分地区草莓灰霉病菌对咯菌腈产生了抗性;相比敏感菌株,田间抗性菌株对渗透压的耐受能力增加,但当浓度超过耐受范围后对渗透胁迫高度敏感,药剂胁迫下田间抗性菌株甘油含量增加量显著小于敏感菌株;组氨酸激酶BOS1突变的位置和方式与灰霉病菌菌株对咯菌腈的抗性水平存在必然联系。

通过对模板DNA、Primer、dNTPs、10×Taq 10 Buffer、Taq酶的不同浓度进行单因素筛选,并对退火温度和循环次数进行摸索,建立和优化了灰葡萄孢菌Flipper转座子PCR扩增体系。采用该体系及Flipper转座子引物扩增得到了1 159 bp的片段,通过比对发现,该片段与Botryotinia fuckeliana的Flipper转座因子转座酶基因相似性达99%,表明扩增得到的是预期目的片段。Flipper转座子扩增体系的建立,为深入研究我国葡萄灰霉病菌菌株的转座子类型及其与致病力、抗药性等因素之间的关系奠定了重要的基础。

采用菌丝生长速率法及孢子萌发法分别测定了细辛精油和4种化学药剂(30%嘧霉胺EC、50%双福生WP、75%百菌清WP、70%正品甲津托WP)对引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用。结果表明,供试药剂对灰葡萄孢菌的菌丝生长和孢子萌发均有抑制作用,且对孢子萌发的抑制效果明显好于对菌丝生长的抑制效果;百菌清对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑菌效果最好,EC50为1.6231mg/L;双福生对灰葡萄孢菌孢子萌发的抑制效果最好,EC50为0.0042mg/L;细辛精油对黄瓜灰葡萄孢菌的抑菌效果与其他4种化学药剂相比效果较差,对菌丝生长的EC50为159.580mg/L,对孢子萌发的EC50为71...