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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
关怡 尹娣 杜茜 沙艺琛 赖姗姗 赵超
为寻找新纤维素酶和纤维素酶基因资源,以羧甲基纤维素钠作为唯一碳源,从湿润木屑中分离和筛选获得1株高产纤维素酶目的菌株LYW-1。对该菌保守序列ITS进行扩增和测序后,提交NCBI并与相近物种ITS序列进行比对和分析,基于亲缘关系构建系统发育树。将ITS rDNA保守序列比较分析结果与形态学观察结果相结合,初步鉴定该菌株属于栓菌属(Trametes)。以羧甲基纤维素钠溶液为底物,采用3’5’-二硝基水杨酸(DNS)法测定纤维素酶活力,分析pH、温度及培养基中同碳源、氮源对该菌产纤维素酶活力的影响。结果表明,菌株LYW-1在pH 7.0、37℃、淀粉为碳源和乙酸铵为氮源时为最适培养条件,总酶活力达到最大。
关键词：
栓菌属 纤维素酶 酶活力 产酶条件
[期刊] 西南农业学报
[作者]
柯野 杨家臣 屈奇奇 袁小枚 黄镜如
【目的】解析Streptomyces sp. DJ菌株编码的3种角蛋白酶的氨基酸序列、二级结构、三级结构及其功能的关系。【方法】基于DJ菌株全基因组测序结果,利用Bio-edit、DNAMAN、Discovery Studio2.5等软件、https://swissmodel.expasy.org/等网站对其3种角蛋白酶的序列和结构进行了分析和预测。【结果】DJ菌株胞外分泌3种角蛋白酶(K1、K2和K3)均属于S8家族的丝氨酸蛋白酶,信号肽、前导肽和成熟肽在氨基酸残基的组成、极性和长度等方面较一致。3种酶均能以5WSL.1.A为模板进行同源建模,每种酶的3-D结构中均含有6个α螺旋、2个3_(10 )α螺旋和15个β折叠的二级结构;其中K1酶含有2个二硫键,1Ca和2Ca位点,K2和K3各有1个二硫键,1Ca位点;3种酶的Pro270残基位于loop环,而仅有K2的Pro242残基位于loop环中。3种酶底物结合区域主要由疏水性残基构成,偏向于疏水性强的底物。3种酶的底物结合区域比较而言,S1和S2对底物特异性起关键作用;由于3种酶的S1和S2中重要位点残基的不保守性,使其底物特异性具有差异。【结论】DJ菌株中3种角蛋白酶在氨基酸、二硫键、脯氨酸和钙结合等的不同致使酶稳定性的不同;并且由于其表面电荷分布、底物结合区域的差异构成对羽毛水解位点的互补性,这可能是DJ菌株高效降解羽毛的重要原因。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
缪伏荣 董志岩 刘景
【目的】研究从腐烂紫菜中分离的Stenotrophomonas sp.Z705菌株产琼胶酶的最佳发酵条件和培养基组成。【方法】采用单因素试验,分析装液量、摇床转速、发酵时间、初始pH、发酵温度、盐度等因素对Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼胶酶活力的影响,从中筛选出该菌株的最佳发酵条件。在此基础上,采用单因素试验和L9(33)正交试验,分析不同氮源和碳源对Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼胶酶活力的影响,从中筛选出该菌株最佳培养基的组成。【结果】Stenotrophomonas sp.Z705菌株发酵产琼胶酶的最佳条件为:装液量25mL、摇床...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨雪 岳胜天 武志海 付丽 于人杰 杨美英
为明确溶磷菌wj1的无机磷酸盐(Pi)的转运机制,对溶磷菌wj1磷酸盐特异性转运系统(Pst)进行生物信息学分析并与土壤中常见细菌的Pst系统进行比较,通过亚克隆构建溶磷菌wj1pstS蛋白的原核表达系统,利用钼酸铵分光光度法测定诱导表达的pstS蛋白对磷酸盐的结合率。结果表明:溶磷菌wj1的Pst系统是由pstS、pstC、pstA、pstB和phoU 5个基因组成,且依次分布于染色体上,这种结构与土壤中常见细菌的大多数菌属相似。溶磷菌wj1的pstS蛋白位于细胞质外,是一种具有信号肽的可溶性蛋白,其空间结构是由2个球状结构域组成。与绿脓假单胞菌的pstS蛋白结构相比,溶磷菌wj1pstS蛋白的活性中心位于两个球状结构域的裂缝中,其中有9个氨基酸参与Pi特异性结合,1个氨基酸通过疏水作用维持蛋白与Pi的结合。溶磷菌wj1pstS蛋白在大肠杆菌中过量表达后,使得重组大肠杆菌的无机磷酸盐吸收率显著提高,表明溶磷菌wj1pstS蛋白具有结合Pi的能力,但菌浓度不变时Pi浓度的增加会抑制溶磷菌wj1pstS蛋白对Pi的结合。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭坚华 刘庆都 任欣正
小麦细菌性苗枯病菌Ta菌株细胞壁的特征性双碱基氨基酸为二氨基丁酸,菌体脂类中不含枝菌酸,磷酸类脂主要为双磷脂酰甘油,符合Claribacter属的特征;菌体细胞水溶性蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱不同于Clacribucter属的已知各种及亚种,甲基萘醌分析结果与对照菌Cl.tritici 2626菌株亦不尽相同;菌株的DNA G+C mol%含量为66.12%～68.78%,与Cl.michiganense subsp.michiganense菌株2550的 DNA DNA同源值为40.2%,与Cl.tritici菌株2626的同源值为46.0%。确认Ta菌是Claibter属中的一个新...
关键词：
小麦 细菌性病害 棒形杆菌 鉴定 分类
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李月欣 刘楠 周德庆
针对丰富的浒苔资源还未得到有效利用的现状，以浒苔为原料，采用复合酶提取法制备浒苔膳食纤维。浒苔在５５℃、ｐ Ｈ＝７．７的条件下，由不同比例的蛋白酶和纤维素酶（５：１、１０：１、１５：１、２０：１和２５：１）配制的复合酶进行酶解，提取膳食纤维，测定不同提取条件得到的浒苔膳食纤维在模拟体内的环境下（ｐ Ｈ＝２．０和ｐ Ｈ＝７．０）吸附葡萄糖、胆固醇和亚硝酸盐的能力。结果显示，随着复合酶中蛋白酶比例的升高，膳食纤维对葡萄糖和胆固醇的吸附能力先增强后减弱。在蛋白酶∶纤维素酶的比例为１０：１时，膳食纤维对葡萄糖的最大吸附值为２０．０３ ｍｇ／ｇ；在蛋白酶∶纤维素酶比例为１５：１时，膳食纤维对胆固醇的最大．．．
关键词：
复合酶 浒苔 膳食纤维 吸附能力
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李月欣 刘楠 周德庆
针对丰富的浒苔资源还未得到有效利用的现状,以浒苔为原料,采用复合酶提取法制备浒苔膳食纤维。浒苔在55℃、p H=7.7的条件下,由不同比例的蛋白酶和纤维素酶(5:1、10:1、15:1、20:1和25:1)配制的复合酶进行酶解,提取膳食纤维,测定不同提取条件得到的浒苔膳食纤维在模拟体内的环境下(p H=2.0和p H=7.0)吸附葡萄糖、胆固醇和亚硝酸盐的能力。结果显示,随着复合酶中蛋白酶比例的升高,膳食纤维对葡萄糖和胆固醇的吸附能力先增强后减弱。在蛋白酶∶纤维素酶的比例为10:1时,膳食纤维对葡萄糖的最大吸附值为20.03 mg/g;在蛋白酶∶纤维素酶比例为15:1时,膳食纤维对胆固醇的最大...
关键词：
复合酶 浒苔 膳食纤维 吸附能力
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郭娟娟 卢旭 曾绍校 张龙涛 李庆旺 郭玉丹 郑宝东
为提高海旋菌Ｔｈａｌａｓｓｏｓｐｉｒａ ｓｐ．ＦｊＦｓＴ－３３２产κ－卡拉胶酶的能力，采用单因素试验法和响应面分析法对其发酵条件进行优化．在基础产酶培养基的条件下，考察发酵培养基的初始ｐ ｈ、装液量、接种量、温度和转速对κ－卡拉胶酶合成的影响，再选取温度、ｐ ｈ和接种量３个因素进行响应面优化．结果表明，κ－卡拉胶酶在培养基初始ｐ ｈ ７、接种量３ ｍ ｌ、装液量３０ ｍ ｌ、转速１５０ ｒ·ｍｉｎ－１、温度２５℃的条件下，其酶活力最佳，为１０６ Ｕ·ｍ ｌ～（－１）．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚倩倩 顾向阳
[目的]从含盐环境中富集分离中度嗜盐菌,并进行菌种鉴定,分析确定与耐盐特性相关的主要相容性溶质,探索利用分离菌株合成四氢嘧啶的可行性。[方法]从盐池土中富集分离耐盐或嗜盐的乙酸降解菌,通过生理生化特性测定和16S rDNA序列的分析,将所得菌株鉴定至相应的属或种。通过摇瓶试验研究分离菌株耐盐生长的特征,从所得的菌株中提取、分析相容性溶质并测量其含量,初步分析分离菌株耐盐生长的机制。在高盐培养基中诱导嗜盐菌胞内相容性溶质的合成,然后在低渗盐溶液中测定相容性溶质的释放率,之后再将菌体转移至高渗培养基中研究相容
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马婷婷 黄粤 皮婷 姚家成 冯喆 李晓华
从神农架烟草种植地土壤中分离出1株对7株农作物病原真菌具有抗性活性菌株,命名为ⅡR21菌株。采用琼脂块法测定,该菌株对稻瘟病菌、立枯丝核病菌、腐霉病菌、禾谷镰刀病菌和黄色镰刀病菌具有较强的抑菌活性。对该菌株的生理生化特性和16SrRNA基因序列同源性比对,初步鉴定ⅡR21菌株属于链霉菌属。经过有机溶剂萃取、硅胶柱层析、薄层层析和制备型高效液相色谱对ⅡR21菌株发酵液进行分离纯化,获得了1个纯度为90.34%的具有抗稻瘟病菌168菌株活性的化合物单体。采用高通量测序技术对ⅡR21菌株进行全基因组测序,通过全
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
宋立超 钮旭光 李培军 刘宛
Ｐａｎｔｏｅａ ｓＰ．ｔＪＢ５是一株具有菲降解能力的耐盐碱菌株。为将其更好地应用到环境中去，研究了其粗酶液对菲的降解特性及降解途径关键酶基因的性质。结果表明：处理１２ｈ胞内酶对５０ｍｇ·Ｌ－１菲的降解率达到７０．１％。菲胞内酶降解的酶促反应最适温度是３０℃，最适Ｐ ｈ值为６．０～８．０，最适盐浓度为０～３．０％。进一步克隆降解功能酶邻苯二酚－２，３－双加氧酶（Ｃ２３０）基因，获得序列９２４ＢＰ，建树分析其与ｓＰｈｉｎｇｏＢｉｕｍ ｓＰ．４０７－１ Ｃ２３０的基因同源性为９７％，初步判定该菌株对菲降解过程中产生的邻苯二酚是通过Ｃ２３０进行降解催化的。
关键词：
成团泛菌 胞内酶 菲 邻苯二酚双加氧酶
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李志琳 解宇峰 吴杰 徐佳迎 王珏 蒋静艳
[目的]本文旨在筛选出不同种类和特性的高效降解柴油菌株,研究降解菌株对不同环境下柴油污染的降解机制。[方法]从南京扬子石化厂区的油泥沉积物中分离出1株高效柴油降解菌J-3,通过细菌形态学、生理生化及16S rRNA基因序列分析比对初步鉴定菌株J-3为沙雷氏菌属(Serratia sp.)。通过水培及土壤培养并结合气质联用(GC-MS)和全基因组比对技术研究其降解率和降解机制。[结果]该菌能利用柴油为唯一碳源生长,产生表面活性物质,具有稳定的乳化性能。在温度20～40℃、初始pH5～9条件下生长良好,能耐受15 g·L~(-1) NaCl和5 g·L~(-1)柴油。在最适生长条件(pH7,25℃,1 g·L~(-1) NaCl,0.5 g·L~(-1)柴油)下对柴油降解率为62.0%,GC-MS图谱分析确定菌株J-3对柴油中各组分均有降解能力,对部分中长直链烷烃降解率超过99%。通过菌株J-3的全基因组比对分析,发现2个烷烃氧化相关的基因,烷烃羟化酶基因alkB和长链烷烃羟化酶基因almA,推断菌株J-3能降解柴油可能是这2个氧化酶基因产生作用。将菌株J-3应用于柴油污染土壤修复试验,对土壤中各柴油组分均有降解能力。不同处理下菌株J-3降解率可达33.8%～49.0%,可有效降解土壤中的柴油。[结论]Serratia sp. J-3是一株高效降解柴油的菌株,在水体和土壤中均能很好利用柴油进行生长代谢,可应用于柴油污染实际生物修复工程。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
代影 卢静容 周美宏 杨帆 林厚文
南极极端生境中蕴含着发掘特殊生物活性天然产物的巨大潜力。本研究对采自南极海域水深6000 m海区钩虾(Gammarus sp.)的肠道共附生微生物进行分离，并对一株有价值菌株的代谢产物进行研究。采用稀释涂布法进行菌株分离，利用形态学观察及16S rRNA测序进行菌株种属鉴定；综合运用薄层色谱，正相硅胶柱色谱，凝胶柱色谱，反相ODS柱色谱和半制备高效液相(HPLC)等色谱手段分离纯化得到单体化合物，采用波谱学和质谱技术鉴定其化学结构。从钩虾中分离得到17株菌，并将其分类学地位归属于9个属，其中细菌11株，放线菌6株。从放线菌Streptomyces xiamenensis YF008的发酵产物中分离得到8个单体化合物，分别鉴定为：1(10)E，5E-germacradiene-2，11-diol (1)，N-[2-(4-hydroxyphenyl)] ethylacetamide (2)，环(L-苯丙氨酸-甘氨酸) (3)，环(L-苯丙氨酸-L-丙氨酸) (4)，环(D-苯丙氨酸-L-异亮氨酸) (5)，环(L-羟脯氨酸-L-苯丙氨酸) (6)，环(D-亮氨酸-L-脯氨酸) (7)，环(L-苯丙氨酸-L-脯氨酸) (8)。化合物1，3-6系首次从该菌中分离得到，且化合物1为特殊的十元环germacrane型倍半萜类化合物。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
杨志平 徐 哲 周 倩 张粹粹 孙建明
将海洋红酵母(Rhodotorula sp.) C11以104、105和106 CFU/g饵料添加到基础饵料中，每一剂量组设3个平行，每一平行50头幼参，用100 L塑料桶进行30 d静水充气养殖试验。试验期间每日投饵1次，投喂量为幼参体重的5%。投喂试验结束后，评估其对幼参消化酶及免疫反应的影响。结果显示，与对照组比较，投喂海洋红酵母C11 104、105 CFU/g，显著提高了幼参肠道胰蛋白酶活力(P<0.05)；投喂海洋红酵母C11 104 CFU/g，显著增加淀粉酶活力(P<0.05)。投喂海洋红酵母C11 105 CFU/g，幼参体腔细胞的吞噬活力显著高于对照组(P<...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
杨志平 徐哲 周倩 张粹粹 孙建明
将海洋红酵母（ＲｈｏｄｏｔｏＲｕｌａ ｓｐ．）Ｃ１１以１０～４、１０～５和１０～６ＣＦｕ／ｇ饵料添加到基础饵料中，每一剂量组设３个平行，每一平行５０头幼参，用１００ ｌ望料桶进行３０ ｄ静水充气养殖试验。试验期间每日投饵１次，投喂量为幼参体重的５％。投喂试验结束后，评估其对幼参消化酶及免疫反应的影响。结果显示，与对照组比较，投喂海洋红酵母Ｃ１１ １０～４、１０～５ＣＦｕ／ｇ，显著提高了幼参肠道胰蛋白酶活力（ｐ＜０．０５）。．．．
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