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[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 谭珊娜  孙明  喻子牛  
根据能形成伴胞晶体的特征,芽胞杆菌CTC菌株被鉴定为苏云金芽胞杆菌幕虫亚种。但该菌株明显不同于典型的苏云金芽胞杆菌,因为其伴胞晶体蛋白并不是由杀虫晶体蛋白基因编码,而是编码细胞表面S 层蛋白基因的产物,且伴胞晶体蛋白没有检测到对昆虫的毒性。本研究基于对CTC菌株及参照菌的16S-23SrRNA间隔区、编码S 层蛋白的基因进行扩增并测序,从系统发育水平检测到CTC菌株明显与苏云金芽胞杆菌幕虫亚种典型菌株T02存在差异,表明芽胞杆菌CTC菌株更接近蜡状芽胞杆菌。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 鲁松清  喻子牛  
在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株CT-43的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出3个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成、芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成7个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第2阶段开始,由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株CT-43中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。
[期刊] 华北农学报  [作者] 杜立新  董明  王容燕  马铭泽  王金耀  曹伟平  宋健  冯书亮  
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130~150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 邹寰  喻子牛  孙明  
蜡状芽胞杆菌群主要包括炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)、蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus)、苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)。GenBank已有这个群的8个菌株完成了全基因组序列测定。对这8株蜡状芽胞杆菌群菌株中98条16S rDNA的序列进行相互BLAST比较,发现在同一基因组内各个16S rDNA拷贝全局相似度最低为96.47%,在不同基因组间16S rDNA局部片段比对最小相似度达到99.72%,对应片段长度也有1 417 bp。这点充分说明,该群的细菌完全共用同一种16S rDNA,根据16S rDNA给细菌分类的特点,它们...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 沙莉  章淘  黄张敏  黄志鹏  关雄  
分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1Ia、cry2Ab、cry2Ac、cry2Ae等6种cry基因.从选取的8个蛋白条带肽段指纹图谱可以看出:标记3、6、7、8的4个蛋白点都是杀虫晶体蛋白,蛋白点6、7、8分别鉴定为Cry2Aa、Cry1Aa、Cry1Ba,蛋白点3可能是Cry1Ba的部分片段.表明该菌株有丰富的ICP资源,可作为杀虫应用的候选菌株.
[期刊] 华北农学报  [作者] 吴会贤  宋萍  王勤英  苏旭东  
通过醋酸钠-抗生素筛选法从河北省土壤中筛选得到了苏云金芽孢杆菌新菌株CY1。镜检可观察到伴孢晶体呈小菱形。SDS-PAGE分析结果表明菌株CY1表达的晶体蛋白分子量为130 kDa。利用25对通用引物检测cry1,cry1I,cry7,cry2,cry3,cry4/cry10,cry5,cry6,cry7,cry8,cry9,cry11,cry13/14,cry16/17,cry18,cry19,cry21,cry22,cry24/25,cry26/28,cry27/29,cry30,cry32,cry34/35,cry40基因,仅从CY1菌株中检测出cry7基因,该cry7基因N末端的1 2...
[期刊] 华北农学报  [作者] 宋萍  郭丽伟  苏俊平  王勤英  王晖  
对我室所保存的18株含cry7类基因的菌株进行晶体形状、生物活性和蛋白型基因型等进行分析。结果表明:这些菌株能产生菱形、小菱形和不规则形伴胞晶体,SDS-PAGE检测主要蛋白的分子量是130kDa,PCR扩增得到1300bp条带。对马铃薯瓢虫二龄幼虫的生物活性测定结果表明,菌株WZ-9具有很高的杀虫率,72h校正死亡率达到了93.1%;菌株WCG-10活性次之,72h校正死亡率达到44.8%,而其他菌株杀虫活性低或没有活性。对杀虫活性最高的WZ-9菌株扩增全长基因,得到cry7Ab3基因(GenBank Number:BI1015188)。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 王祥  姚宝安  
苏云金芽胞杆菌的伴胞晶体毒素对捻转血矛线虫第2期幼虫的毒力王祥,姚宝安(华中农业大学畜牧兽医学院,武汉430070)关键词苏云金芽胞杆菌,伴胞晶体毒素,捻转血矛线虫,第二期幼虫THETOXICITYOFBacillusthuringiensisCRY...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 李建洪  万秋英  王沫  姜锡权  喻子牛  
为筛选对昆虫有高毒力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株 ,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株 K980 5和 K990 3,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种 ,形成典型的双金字塔型伴胞晶体 .两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生物活性 ,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒 .K980 5含有 cry Aa,cry Ab,cry C,cry D和 cry 基因 ,K990 3含有 cry Aa,cry Ab,cry Ac,cry E和 cry 基因
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 王清锋  喻子牛  
利用PCR片段延伸连接技术将cry1E的原启动子准确地更换为cry3A启动子,重组cry1E经载体pHT315克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株1S8和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株4Q7,获得重组菌3A1EBs和3A1EBt。聚丙稀酰胺凝胶电泳和生物测定表明,克隆改造后的cry1E可表达,表达的Cry1E对海灰翅夜蛾有毒(幼虫死亡率60%~70%)。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 姚宝安  王祥  夏雪山  赵俊龙  马丽华  孙明  喻子牛  
捻转血矛线虫是世界各国危害牛、羊等反刍动物的主要寄生虫之一.目前虽然有特效的化学药物驱虫,但因其具一定的副作用,寄生虫易产生耐药性,药物易在内品残留,危害人类健康.苏云金芽胞杆菌是一种革兰氏阳性细菌,它在形成芽胞的同时,在菌体一端形成一种蛋白性质伴胞晶体,它对昆虫有较高毒力,对人畜安全无毒,不污染环境,成本低,已广泛用于防治农、林、仓贮害虫和医学
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 巫益鸣  阮丽芳  彭东海  刘国强  孙明  
通过携带Mini-Tn10转座子的温度敏感性质粒载体pIC333构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株的插入突变体库。从突变体库中筛选得到1株芽胞不能在萌发剂L-丙氨酸诱导下萌发的突变株(命名为MA1),进一步的试验表明该突变株菌株的芽胞在其他氨基酸L-苯丙氨酸、L-缬氨酸和L-亮氨酸以及糖类萌发剂葡萄糖、果糖和蔗糖的诱导下也都不能萌发,表明MA1很可能属于新型的芽胞萌发缺陷突变株。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 冯纪年  李陇梅  张兴  
根据GenBank中cry2Ad基因序列设计1对特异性引物,以苏云金芽孢杆菌新菌株S249质粒 DNA为模板,应用PCR扩增技术得到了1条大小约为2.0 kb的DNA片段(cry2Ad2)。通过引物步行法测定该片段长1919 bp,其中开放阅读框(ORF)长1902 bp,编码633个氨基酸;经DNASTAR软件分析,预测其蛋白分子量为70.72 ku,等电点pI=8.26。序列比较结果表明,该基因与cry2Ad类基因高度同源(同源性达99%)。该基因已在GenBank中登录,登录号为DQ219823,并被Bt δ-内毒素基因国际命名委员会正式命名为cry2Ad2。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 周艳琴  姚宝安  夏雪山  赵俊龙  孙明  喻子牛  
将人工感染日本血吸虫尾蚴 45d的家兔主动脉灌注冲虫获得成虫 ,经Earle’s液洗涤 ,加入细胞培养板内 ,用含 10 %牛血清的RPMI 16 40培养液于 37℃、5 %CO2 培养箱中培养 ,苏云金杆菌B 0 0 1、E 0 0 2提取的伴胞晶体毒素 ,以不同浓度加入到各孔中。 2 4h后成虫运动缓慢 ,并有部分死亡 ,随着伴胞晶体毒素作用时间的延长 ,成虫的死亡率也增加。当毒素总蛋白含量为 117.2 9μg/ml时 ,经菌株B 0 0 1晶体毒素作用的成虫死亡率在2 4h时为 87.74% ,48h时为 10 0 % ,LD50 分别为 2 1.42 μg/ml、9.77μg/ml...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 黄昌华  李建洪  张玉群  王沫  刘晟  
芽胞杆菌HCH菌株发酵、灭菌、浓缩液,用含毒介质法测定其EC_(50)为177.8mg·kg~(-1)。将该菌发酵液进行不同处理,即发酵原液、原液灭菌、原液体积浓缩一半、原液浓缩又灭菌及对照药剂多菌灵,用于田间小区防治小麦赤霉病试验,防治效果分别为59.36%、51.36%、61.24%、48.19%和57.77%。上述4种处理与多菌灵在用量各减半后,混合使用,其防效均高于各单剂,发酵灭菌原液+多菌灵,防效为75.64%。
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