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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张婕 赵敏 卢磊 李慧玲
为了筛选高产β--甘露聚糖酶的细菌菌株,利用刚果红染色法从土壤中筛选分离到1株产β--甘露聚糖酶菌株MM5。通过形态观察、生理生化试验及16SrDNA序列分析进行鉴定,确定其为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。菌株MM5产甘露聚糖酶的活力达到1594U/mL,以MM5为出发菌株,通过紫外诱变得到诱变菌株LD24H4,酶活提高到3717U/mL。通过单因素试验和正交试验确定了菌株LD24H4产酶的最佳培养基组分(g/L):魔芋粉20.0,干酪素2.5,NaCl1.0,MgSO40.5,KH2PO40.5,pH7.5。最适产酶培养条件:47℃,装液量90mL(250mL三角瓶),接...
关键词：
β-甘露聚糖酶 筛选 枯草芽孢杆菌 诱变
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨新建 徐福洲 王金洛 周宏专
为确定环状芽孢杆菌WXY-100的最佳摇瓶培养工艺,采用了L9(34)正交试验对培养基成分以及培养条件进行了优化。结果表明,最佳培养基成分为:酵母抽提物20 g/L,魔芋粉20 g/L,(NH4)2SO42 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4.7H2O 1 g/L。最佳培养条件为:种龄8~12 h,接种量为6%,装液量为25 mL,pH 7.5,培养温度40℃,培养时间25 h。该酶在pH 4~8和60℃以下稳定,作用最适条件是pH 5.0和60℃,Cu2+和Co2+对酶有较显著的激活作用,而Hg2+对酶有强烈的抑制作用。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
柴萍萍 韦贇 江正强 李里特 日下部功
为获得最佳产酶配方,同时获得高活力的β-甘露聚糖酶,经碳源、氮源、碳氮质量比、初始pH和培养温度5个单因素发酵条件的优化,得到芽孢杆菌WY45发酵产β甘露聚糖酶的最适发酵培养条件:以4g/L魔芋精粉为碳源,1.33g/L大豆蛋白胨为氮源,碳氮质量比为4/1,初始pH5.5,50℃培养时间96h。此条件下,β甘露聚糖酶活性最高可达2800U/mL。
关键词：
芽孢杆菌 β-甘露聚糖酶 发酵 魔芋粉
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张清霞 周洪友 唐文华
为获得产酶量高、产酶快的菌株,采用碘液染色法从土样分离到1株产β-甘露聚糖酶量高的菌株Bacillussp.N-6,通过16 S rDNA序列相似性比较及生理生化性状鉴定为枯草芽孢杆菌;为得到最佳产酶配方进行了发酵条件优化。结果表明:100 mL培养基加入2 g魔芋粉、1 g酵母粉、1 g豆饼粉、起始pH 8.0、32℃150 r/min振荡培养18 h,产酶量最高,达316.53 U/mL。该酶在pH 5.0~9.0和40~55℃下稳定,作用最适条件pH 6.0和50℃。Co2+对酶有激活作用,Fe3+,Ag+和EDTA对酶有较强抑制作用。
关键词：
甘露聚糖酶 枯草芽孢杆菌 鉴定
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李长影 孔雯 王家昕 高剑锋 李晓华
从工厂废液中分离并筛选到了1株产β-甘露聚糖酶的菌株CYS4,其摇瓶培养液的酶活力为11.0U/mL。经形态观察、生理生化试验及16S rDNA序列分析鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。酶学性质研究结果表明:该酶的最适反应pH值为7.0,在pH值为5.0~11.0时能保持很好的稳定性,酶活力在80%以上;该酶的最适反应温度为60℃,在温度低于40℃时基本稳定,保温3 h酶活力仍然有70%以上;Na+、Fe2+、Mn2+、Zn2+、Mg2+等金属离子对该酶有激活作用,Hg2+对酶活有一定的抑制作用。
关键词：
β-甘露聚糖酶 分离 鉴定 酶学性质
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
董延娟 郝建华 郑鸿飞 孙谧
为获得较高的木聚糖酶产量，采用单因素实验和响应面实验方法，筛选氮源、碳源、无机盐、接种量、装液量、Ｎａ＿２ＣＯ＿３、发酵温度、发酵时间多个单因素，对产木聚糖酶的芽孢杆菌ＹＳ１０６９的发酵培养基和发酵条件进行了优化。结果显示，豆饼粉２５ ｇ／Ｌ、麸皮４０ ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ＿３ ０．９ ｇ／Ｌ、Ｋ＿２ＨＰＯ＿４３ ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ＿４·７Ｈ＿２Ｏ ０．６ ｇ／Ｌ、接种量４％、装液量３０ ＭＬ／２５０ ＭＬ（ｖ／ｖ）、Ｎａ＿２ＣＯ＿３添加量１８ ｇ／Ｌ、培养温度３０℃、培养时间９６ Ｈ时，酶活性达到最高。再通过ＰＬａＣＫｅｔｔ－ＢｕｒＭａＮ设计对影响木聚糖酶产量的８个主要因素进行评价，确定Ｎａ＿２Ｃ．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
唐治玉 王淮 熊善柏 王琳
为了制备β-1,3-葡聚糖酶,从土样中筛选出一株产β-1,3-葡聚糖酶活力较高的菌株LE02,经形态学观察,初步鉴定为木霉菌.木霉LE02在以2%的酵母粉为主的液体产酶培养基(起始pH 7.0)中,于32℃,150 r/min摇瓶培养60 h达到产酶高峰,酶活力可达71.09 U/mL.
关键词：
β-1,3-葡聚糖酶 筛选 产酶条件
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
魏福卫 蒋霞云 陈舜胜 陈道春 党培育
壳聚糖酶(EC3.2.1.132)能催化壳聚糖分子中β-1,4-糖苷键的水解,以获得具有特殊生理活性的壳聚寡糖(聚氨基葡萄糖,聚合度2-10)。该酶在细菌、真菌等多种微生物中存在。采用透明圈法,以壳聚糖为唯一碳源,从11份虾蟹壳堆积的土壤中分离出51株能降解壳聚糖的菌株。经平板初筛、摇瓶发酵复筛以及产酶动力学研究,确定H2为产壳聚酶活力高、发酵时间短的优良菌株。根据其形态及培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为浅玫瑰色链霉菌,并命名为(Streptomyces roseolus DH)。进一步的基本发酵条件研究显示:该菌株发酵最适温度为30℃,发酵液初始pH为7.2,最...
关键词：
壳聚糖 壳聚糖酶 链霉菌 发酵
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张献伟 张冠冠 吴珍芳 孟繁明 刘德武 张茂 许卫华 郑恩琴 贺晓燕 李真 李紫聪
【目的】构建木聚糖酶(XynB)与甘露聚糖酶(ManA)的融合酶基因,使其能在哺乳动物表达系统中表达并分泌兼有木聚糖酶和甘露聚糖酶活性的双功能融合酶。【方法】利用基因融合技术(SOE-PCR),把11条Linker融合到木聚糖酶(XynB)和甘露聚糖酶(ManA)基因间,构建真核表达载体,经转染猪肾细胞(pK15)收集细胞培养液,用DNS法测定其酶活并进行酶学分析。【结果】经表达分析12条不同Linker构建的融合酶与亲本酶酶活,发现用Linker a3、pS3和具有"自我剪切"能力T2A构建的融合酶在木聚糖酶和甘露聚糖酶活性都显著高于两亲本酶。融合酶XynB-a3-ManA的木聚糖酶和甘露聚...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡杨 周海燕 董蕾 吴永尧
兼具纤维素酶和半纤维素酶活性的Man23基因(Man23)来自于芽孢杆菌B23,将其连接到质粒pHY-P43上,由强启动子P43来启动Man23的表达,重组质粒pHY-p43-Man23转入蛋白酶缺陷型芽孢杆菌WB600中,表达产物与原体系相比,甘露聚糖酶活力提高了21%,电泳检测得到的蛋白图谱显示目的酶丰度有显著提高,杂蛋白未见大量表达,可见构建的WB600体系适用于Man23基因表达.
关键词：
甘露聚糖酶 基因表达 芽孢杆菌WB600
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张学文 田志坚 吴永尧 周双德 康冬丽
为了通过基因工程方法在大肠杆菌中发酵生产β-甘露聚糖酶,采用多重比较几种来源的β-甘露聚糖酶氨基酸序列,获得了该酶的保守结构域,并按此设计简并引物.以能水解魔芋葡甘聚糖的枯草杆菌属野生筛选菌种A33为材料,通过简并引物PCR法从A33基因组中扩增出β-甘露聚糖酶基因核心区段.经过克隆、测序及BLASTN比对分析,证实该DNA区段推导的编码蛋白具有β-甘露聚糖酶的保守结构域,属于该酶家族中的一员.将该片段构建到大肠杆菌表达载体pRSET-A并转入大肠杆菌表达系统BL21DE3(pLysS),经过诱导获得了此酶的高效表达.
关键词：
β-甘露聚糖酶 基因克隆 表达
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
翟倩 江正强 闫巧娟 邓伟
为进一步研究木聚糖酶的纯化和性质,对本研究室新筛选出的一株高产木聚糖酶的链霉菌Z18的液态发酵条件进行了研究。结果表明:最佳碳源为1.5%(质量分数)的玉米芯水不溶性木聚糖,培养第5天其酶活性浓度达435.03 U/mL。不同来源木聚糖诱导产木聚糖酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳及酶谱分析结果表明,链霉菌Z18能够产生3种木聚糖酶,以22 ku的木聚糖酶为主;初始pH5.5、培养温度30℃时所得木聚糖酶活性最高。在优化后的培养基和培养条件下,第7天链霉菌Z18产木聚糖酶活性达到峰值,其活性浓度为755 U/mL,为目前国内报道链霉菌属最高产酶水平。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱吉力 李剑芳 邬敏辰
在对黑曲霉WM20-11产酸性β-甘露聚糖酶的培养基组分和培养条件单因素研究的基础上,设计了Plackett-Burman试验选取主要影响因素,并进行响应面分析。结果表明,黑曲霉WM20-11产酸性β-甘露聚糖酶的最适培养基和发酵条件为:水11.7mL,麸皮9.0g,豆饼粉1.0g,魔芋粉0.98g,玉米浆0.375mL,(NH4)2SO412.5g/kg,CaCl21.0g/kg,MgSO41.0g/kg,KH2PO42.5g/kg(相对于固体料),自然pH;28℃固体静置培养96h,期间翻曲2~3次。在此条件下,菌株产酶活性可达1337IU/g干曲。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张茂 张冠冠 刘德武 蔡更元 吴珍芳 李紫聪
【目的】将前期构建的含有黑曲霉β－甘露聚糖酶基因ｍａｎａ的质粒ｐ ｐＳｐＢＧｐ－ｍａｎａ转染杜洛克猪胎儿成纤维细胞，利用Ｇ４１８筛选出转基因细胞系，通过体细胞核移植方法生产出转ｍａｎａ基因猪，利用分子生物学方法对转基因猪进行阳性鉴定、基因及蛋白表达水平的检测，同时测定转基因猪唾液β－甘露聚糖酶酶活、粪便营养物质含量，旨在为生产及进一步研究转ｍａｎａ基因猪提供一些科学依据。【方法】用限制性内切酶ｎｏｔ Ｉ将质粒ｐ ｐＳｐＢＧｐ－ｍａｎａ线性化并通过脂质体法将其转入杜洛克猪胎儿成纤维细胞，然后用不同浓度的Ｇ４１８进行筛选、维持培养，将筛选后的细胞进行体细胞核移植生产克隆猪；克隆猪出生后采取尾组织样．．．
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