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[期刊] 华中农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘同同 刘诗琦 袁丽丽 王创
为筛选标记基因用于植物遗传转化，采用组织培养、营养液筛选和叶面喷施等手段，综合评价了具有高催化活性的亚磷酸脱氢酶基因ptxDQ作为筛选标记基因用于水稻遗传转化的潜力。结果显示，ptxDQ基因作为筛选标记基因时，抗性愈伤的筛选效率为44.37%～47.28%，显著高于潮霉素和草胺磷等抗性基因的筛选效率。获得的转基因阳性幼苗，可利用以亚磷酸盐为唯一磷源的培养液，通过简单培养即可筛选出阳性转基因幼苗。此外，还建立了通过叶面喷施亚磷酸盐筛选转基因幼苗的方法。相比目前的抗生素和除草剂类筛选系统，亚磷酸盐更廉价且不会造成环境污染。同时，作为一种正向筛选系统具有较高的筛选效率，在农作物转基因研究和农业可持续发展中具有潜在价值。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
殷冬梅 杨海棠 台国琴 杨秋云 崔党群
【目的】培育高油酸的花生新种质。【方法】以根癌农杆菌为介导将含有油酸脱氢酶基因的植物双元表达载体pFGC/2nd转入花生外植体丛生芽,通过卡那霉素筛选,器官发生再生转化植株;荧光定量PCR检测转基因植株。【结果】丛生芽外植体于OD600为0.6的农杆菌菌液中浸泡8～10min后,在MS培养基上暗培养3d效果较好。诱导筛选培养3个月左右,共得到16株转化植株,其中11个转基因植株经PCR检测呈阳性,说明外源基因已整合进入受体植物。进一步的荧光定量PCR检测显示,有4个植株基本上不表达或表达量很低。【结论】建立花生丛生芽遗传转化体系;RNA干扰对内源的油酸脱氢酶基因产生了抑制作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王涛 唐永严 刘良玉 张美冬 郑用琏 张方东
利用PCR反应克隆来自酿酒酵母的磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因pmi,通过农杆菌介导的花序侵染法将PMI的基因导入受体拟南芥中,将转化后的拟南芥种子放在质量浓度为1g/L的甘露糖MS培养基上进行筛选培养,共得到抗性拟南芥植株4株。PCR反应证明酵母PMI的基因pmi已经整合到拟南芥基因组中,RT-PCR检测证明该基因的内含子能够在拟南芥中被正确剪切,同时通过GUS化学组织染色方法证明了伴随转化的GUS基因gus在拟南芥中得以表达,以上研究结果说明酵母PMI/甘露糖系统可以作为拟南芥遗传转化的筛选标记。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨国婵 谢银鹏 马锋旺 梁东 邹养军
【目的】研究６－磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子（Ｓ６ＰＤＨＰ）的组织表达特点。【方法】利用Ｇａｔｅｗａｙ技术构建了Ｓ６ＰＤＨＰ与ＧＵＳ基因的融合表达载体，然后通过农杆菌介导法转化番茄＂中蔬５号＂，对转基因植株进行ＰＣＲ检测，对鉴定为阳性的植株进行ＧＵＳ组织化学染色，验证Ｓ６ＰＤＨＰ的组织表达特性。【结果】将Ｓ６ＰＤＨＰ－ＧＵＳ融合表达载体转化番茄，经ＰＣＲ检测显示，成功获得了转Ｓ６ＰＤＨＰ基因的阳性番茄植株。对阳性植株各组织器官的ＧＵＳ化学染色和活性检测结果显示，除叶片外许多器官都有很强的ＧＵＳ活性，且在转基因番茄成熟期植株的茎部活性最高，根部活性最低；叶片从新叶到老叶的各个时期，ＧＵＳ活性持续降．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张琦 李明春 蔡易 苗翠苹 李绍兰 陈有为 邢来君
【目的】验证少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因在转基因油菜中的表达情况,为进一步基因工程化生产γ-亚麻酸打下基础。【方法】将少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因和植物表达载体pCPN2301连接,构建重组表达质粒pCPNRAD6,采用农杆菌介导的油菜子叶节转化法,将该基因导入甘蓝型油菜H165,获得转基因植株,最后通过气相色谱检测基因的表达情况。【结果】PCR、GUS组织化学染色和Southern杂交分析结果表明,目的基因已经整合到油菜基因组中,Northern杂交分析进一步表明目的基因在RNA水平获得表达,气相色谱分析检测到转基因油菜叶片中γ-亚麻酸和十八碳四烯酸生成,证明目的基因获得功能表达。同样,...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙耀中 东方阳 陈受宜 杨晓玲 刘永军 郭学民
在NaCl浓度0,3.0,5.0,7.0 g／L下,对转甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因水稻的两个品系51-22,52-7及其受体亲本中花8号进行幼苗耐盐性试验。结果表明:转.BADH基因水稻比其受体亲本耐盐性强,在高NaCl浓度(5.0,7.0 g／L)胁迫下,甜菜碱醛脱氢酶基因可以提高盐胁迫下水稻幼苗过氧化氢酶(CAT)活性,提高根系活力和叶绿素含量,稳定细胞膜的透性,降低植株体内Na+的积累,从而减轻幼苗受盐害的程度。盐胁迫下水稻幼苗的CAT活性、SNa+／K+、叶Na+／K+、叶绿素含量是影响幼苗生长的主要生理指标。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨佳 怡荣 张立全 牛一丁 王秀珍 哈斯阿古拉
以油菜子叶节为外植体优化了农杆菌介导的甘蓝型油菜的遗传转化体系,为在油料作物中用基因工程手段生产γ-亚麻酸打下基础。采用CaCl2法制备农杆菌AGL1感受态细胞,将已经构建好的植物表达载体pPZP221(35S-D6D-NOS)通过液氮冻融法转化农杆菌,PCR筛选阳性转化子。结果表明:优化的甘蓝型油菜子叶节外植体预培养条件是:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基预培养2 d;用于侵染的农杆菌菌液的最适浓度为OD600=0.4,时间为5 min,并得到转基因植株。经侵染的外植体在含有庆大霉素的分化选择培养基上培养,抗性芽移至生根培养基,PCR检测阳性小植株移栽花盆,共...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张娟娟 林拥军 周 菲
将人工合成的来自Escherichia coli的dsdA基因与来自Schizosaccharomyces pombe的dao1 基因，通过农杆菌侵染方式转化到水稻中花11中。对转化植株进行分子生物学检测表明，目的基因整合到了水稻核基因组中，其中获得转化dsdA的单拷贝植株7个，转化dao1的单拷贝植株6个。通过对单拷贝转基因家系表达量检测及T0代种子萌发测验发现，dao1基因在2个（编号6,7）转基因家系中表达量显著，T0代种子在含D-Ala的培养基上，具有明显抗性。dsdA基因在所有的转基因家系中表达量相对偏低，在含D-Ser的培养基上，T0代种子有一定抗性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
蒋晓华 昝瑞光 谷
采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳技术，对云南滇池高背鲫鱼的成熟卵和胚胎不同发育时期的乳酸脱氢酶（Ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＥＣ．１．１．１．２７，ＬＤＨ）同工酶的表达情况进行了分析，结果如下：１．在所研究的整个发育过程中，ＬＤＨ持续表达了４条酶带。这些持续表达的酶带，在发育过程中可能执行最基本的代谢功能。２．随着胚胎发育的进展，从心搏期起，尤其到肝形成期，ＬＤＨ新酶带逐渐增加，这可能是胚胎细胞核中相应基因开始表达的结果，有些也可能是转录后或翻译后有关调节机制开始作用的结果。３．云南滇池高背鲫鱼胚胎发育过程中ＬＤＨ同工酶的表达有一明显的特点，即与近缘的四倍体鲫鱼和鲤鱼相比，ＬＤＨ的酶带...
关键词：
LDH,发育遗传学,电泳,滇池高背鲫
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑玉才 赵兴波 周静 朴影 金素钰 贺庆华 洪键 李宁 吴常信
【目的】从乳酸脱氢酶(LDH)水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1(由4个H亚基组成)的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型(LDH1-F和LDH1-S)。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4U·mg-1蛋白和17.8U·mg-1蛋白,在SDS-P...
[期刊] 水产学报
[作者]
付春茹 叶海辉 陈学雷 黄辉洋 李少菁
3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphatede hydrogenase,GAPDH)是维持生命最基本活动的关键酶之一。采用RT-PCR、RACE等技术,获得了拟穴青蟹gapdh基因全长cDNA序列。该序列全长1 440 bp,开放阅读框(ORF)为1 008 bp,编码335个氨基酸残基。同源分析显示,该基因编码的蛋白与其他一些物种具有很高相似性,推测gapdh基因具有很高的保守性。经荧光定量PCR检测,gapdh基因在拟穴青蟹多个组织中均有表达,且在胸神经团、眼柄神经节、卵巢、表皮中表达量较高。在拟穴青蟹卵巢发育过程中,gapdh基因在卵巢发育早期(Ⅱ期)表达...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
卢秉国 何炜毅 申艳红 蒋际谋 陈晓静 陈伟 吕柳新
从龙眼子叶胚中分离得到一个大量表达的表达序列标签(EST),该EST编码序列与金鱼草3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的同源性为84%,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了龙眼GAPDH基因全长序列.序列分析表明,龙眼GAPDH基因的cDNA全长为1395 bp,包括一个长1008 bp、编码336个氨基酸的开放阅读框(ORF),5′端非编码区(UTR)长71 bp,3′-UTR长316 bp.龙眼GAPDH基因编码的氨基酸序列与水稻、葡萄、小果野蕉、拟南芥、银杏等GAPDH基因的氨基酸序列同源性均高达85%以上,该基因在GenBank中的登录号为FJ694011.
[期刊] 华北农学报
[作者]
崔润丽 王永芳 智慧 李伟 李海权 黄占景 刁现民
3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)在谷子盐旱胁迫早期高频率表达,为研究该基因在胁迫反应及其他代谢中的详细功能,本研究利用RACE技术克隆了谷子的GAPDH基因。该基因cDNA全长1 328 bp,包括1 008 bp的开放阅读框,共编码338个氨基酸,肽段的分子量为35 911.03 Da,极性氨基酸占29.12%。序列比较分析发现,谷子的GAPDH同玉米的同源序列表现了最高的相似性,同水稻和小麦同源序列的相似性次之,同双子叶植物的同源序列则相差较远。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨玉婷 李国印 苏亚春 郭晋隆 许莉萍
从甘蔗中克隆获得1个6PGDH基因的cDNA序列,记为Sc6PGDH(登录号:KF921299).该基因序列含有1个1467 bp的完整开放阅读框,推导编码488个氨基酸残基.生物信息学分析可知,Sc6PGDH基因编码的蛋白分子质量为53.6561 ku,为酸性稳定的亲水蛋白,含有信号肽,可能定位于内质网膜上,具有该类蛋白典型的保守结构域6PGD,且与分离自谷子、玉米和水稻的6-磷酸葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列同源性分别高达96.11%、95.70%和93.24%,表明该基因在进化过程中比较保守.原核生物生长试验结果显示,甘蔗Sc6PGDH基因的表达蛋白可以显著增强大肠杆菌Rosetta菌株的耐盐...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蔡马 姜建国 余土元
考察NaCl浓度变化对杜氏盐藻细胞形态和单细胞甘油含量变化的影响,并应用实时定量PCR技术检测NaCl浓度变化对杜氏盐藻3-磷酸甘油脱氢酶同工酶中1种NAD+依赖的3-磷酸甘油脱氢酶基因表达的影响。结果表明:不同浓度NaCl长期培养时杜氏盐藻细胞形态和体积的变化较小,但当NaCl浓度快速变化时细胞形态和体积变化显著。杜氏盐藻在不同浓度NaCl条件下长期培养,随着NaCl浓度增长,单细胞甘油含量不断积累,且杜氏盐藻能通过快速降低或提高单细胞甘油含量来应对低渗或高渗震动。不同浓度NaCl长期培养时,杜氏盐藻中3-磷酸甘油脱氢酶基因的表达水平与NaCl浓度呈显著负相关,但低渗或高渗震动处理2 h后,...
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