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[期刊] 林业科学  [作者] 张建伟  王军辉  张守攻  李青粉  夏燕  
针对云杉体细胞胚萌发率极低和萌发质量不高的问题,以高同步化体细胞胚为材料,对干化方式、干化时间和干化普遍性等影响干化处理的因素进行探讨,并建立基于形态和颜色识别的云杉体细胞胚的干化标记。结果表明:采用"滤纸容器法"的干化方式更适用于云杉体细胞胚的干化处理;干化处理2周后能够获得最高的萌发率;本试验提供的干化处理方案对萌发促进作用具有普遍的适用性;以健壮的绿色子叶、胚轴及红色胚根为标记的体细胞胚能够普遍获得高的萌发率(平均83.63%)和较好的萌发质量。
[期刊] 林业科学  [作者] 依巴代提·木合旦尔  伊丽米努尔  张毓涛  刘康  
【目的】建立天山云杉体细胞胚成熟及萌发阶段的适宜培养条件,为该树种的体细胞胚大规模繁殖和工厂化生产提供基础。【方法】以天山云杉成熟合子胚为外植体所诱导形成的胚性愈伤组织为材料,通过14个株系、4种成熟培养基、接种量(100、150、200 mg的新鲜胚性愈伤组织)、ABA浓度(1.9、3.8、7.6、19、38μmol·L~(-1))等体细胞胚成熟培养条件,以及对不同起源(体细胞胚、合子胚和种子)的幼苗形态特征的比较,筛选出最优的天山云杉体细胞胚成熟与萌发条件。采用SPSS 18.0等统计软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】1)天山云杉14个株系诱导体细胞胚的结果表明,不同株系在同一成熟培养基上诱导体细胞胚的数量存在差异;其中4个株系及其接种量对体细胞胚形成数量影响的结果表明,不同株系及其接种量诱导体细胞胚的数量也存在差异,当接种量为100 mg时,T36株系的体细胞胚诱导数量最高,为3 470±546个,显著高于其他接种量和株系(P0.05),在ABA浓度为1.9~38μmol·L~(-1)时,其体细胞胚平均诱导数量为2 850~2 913个,其中以7.6μmol·L~(-1 )ABA的浓度处理效果较好,平均获得2 913个正常体细胞胚,高于其他处理。4)将不同起源(体细胞胚、合子胚和成熟种子)萌发的小植株进行对比,结果表明,体细胞胚和合子胚幼苗发育阶段基本一致,但合子胚的幼苗比体细胞胚的幼苗约大1倍,但二者间差异不显著(P>0.05);体细胞胚与合子胚子叶的平均数量一致,二者无显著差异(P>0.05),多数幼苗子叶数量为7~8个。【结论】天山云杉体细胞胚成熟阶段的适宜培养条件为胚性愈伤组织接种量100 mg,1/2BLG培养基添加7.6μmol·L~(-1)的ABA及75%PEG4000、30 g·L~(-1)麦芽糖,并添加750 mg·L~(-1)的L-谷氨酰胺或50 mg·L~(-1) L-天冬酰胺。不同株系在诱导体细胞胚的数量上存在差异。体细胞胚再生植株与合子胚植株在形态上相似。研究结果可为天山云杉体细胞胚的大规模繁殖和工厂化生产提供基础。
[期刊] 北京林业大学学报  [作者] 孙敬爽  贾桂霞  
研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+K...
[期刊] 林业科学研究  [作者] 李哲馨  李万峰  韩素英  齐力旺  
[目的]研究落叶松体细胞胚萌发能力,为落叶松在应用方面规模化繁殖提供理论依据。[方法]以落叶松体胚性细胞系S287的成熟体细胞胚为材料,区分了落叶松体细胞胚的不同子叶形态;进行树脂切片及显微观察后,对其萌发能力进行了统计;并利用外源施用激素的方法研究了影响落叶松体胚再生成苗的重要因子。[结果]成熟的落叶松体细胞胚主要以四种形态存在,分别是正常子叶胚(NC≥4),裂生子叶胚(2
[期刊] 林业科学  [作者] 张建伟  王军辉  李青粉  马建伟  
以云杉未成熟合子胚为外植体,研究球果采集日期、基因型、植物生长素和细胞分裂素对愈伤组织诱导的影响,同时对影响体细胞胚分化和成熟的关键因素进行探讨。结果表明:合适的胚性愈伤组织诱导和增殖培养基为1/2 LM+2,4-D 2.2 mg·L-1+6-BA 1.1 mg·L-1+蔗糖10 g·L-1+凝胶2 g·L-1+酶解酪蛋白1 g·L-1;合适的分化培养基为1/2 LM+ABA 24 mg·L-1+PEG4000 50 g·L-1+蔗糖30 g·L-1+活性炭1 g·L-1+凝胶4 g·L-1+水解酪蛋白1 g·L-1;合适的萌发培养基为1/4 LM+蔗糖20 g·L-1+活性炭1 g·L-1+...
[期刊] 林业科学  [作者] 陈芳  陈少瑜  吴涛  王寅冰  易善军  宁德鲁  
体细胞胚胎发生是细胞工程中植株再生的重要途径之一,可作为基因工程的受体系统,同时也是研究细胞全能性、细胞分化及其形态建成的理想试验体系。
[期刊] 林业科学研究  [作者] 凌娟娟   胡继文   王军辉   安三平   王丽芳   许娜   朱天擎  
[目的]探究干化对云杉体胚解剖结构的影响,挖掘导致解剖结构改变的关键基因,初步明确干化促进体胚萌发的原因。[方法]以高胚性粗枝云杉细胞系为研究材料诱导体胚发生,干化处理不同时间后进行体胚表型观察及萌发率的测定。利用超景深显微镜、扫描电镜和透射电镜从不同层次观察干化体胚与未干化体胚的组织和细胞结构差异,并结合转录组测序分析干化前后体胚的基因表达变化。[结果]干化显著改变了粗枝云杉体胚形态,干化后体胚胚根呈红色,子叶呈绿色。显微观察发现干化后体胚的细胞呈现皱缩且分布不规则的状态,高倍视野下细胞壁不再具有刚性,表现出松弛扭曲状。转录组分析发现参与细胞壁重塑和影响细胞壁机械性能的多个XTHs、EXPAs和PMEs转录本在干化和未干化体胚中差异表达,且多上调表达,与显微观察发现干化体胚细胞壁形态变化的结果相符,这几类基因可能协同调控该过程,影响体胚萌发。[结论]干化过程中细胞壁重塑基因差异表达导致体胚细胞壁松弛,刚性结构消失,解除细胞分化和生长的限制,是干化促进体胚萌发的潜在原因。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 张家明  刘金兰  孙济中  
陆地棉品种柯字201悬浮细胞团接种在成热培养基上,两周后形成大量1—3mm长的胚状体,20天就有胚状体萌发,51—55天为萌发高峰,以后迅速减少,但直到70天仍有少数胚状体萌发。46—55天之间萌发的胚状体数占总数的54.9%。胚状体萌发前7—10天逐渐失绿白化,萌发后2—3天又恢复绿色。萌发胚在成苗培养基上培养2个月长成具5—10片真叶的再生植株,通过水培技术已移栽成活50多株。再生植株在子叶期就表现出形态变异,以子叶变异最丰富,子叶数有1片、2片以至3—4片;子叶形状有正常的、杯状的及不规则的等多种类型。还观察到大量连体胚。在27株成熟植株中,发现6株不育株。不育株花粉粒体积小,壁无刺、形...
[期刊] 林业科学  [作者] 许建秀  吴小芹  叶建仁  朱丽华  吴静  
【目的】研究脱落酸、PEG、肌醇、碳源、凝固剂及培养方式等对抗松材线虫病赤松体细胞胚发育及成熟萌发的影响。【方法】通过对抗松材线虫病赤松种质资源库的调查与分析,选用诱导和增殖状态良好的抗松材线虫病赤松无性系22#-1和13#-1为供试材料,通过不同培养条件的对比试验,筛选出最优的抗病赤松体细胞胚发育及成熟萌发条件。采用SPSS17.0等软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】添加15 mg·L(-1)ABA和140 g·L(-1)PEG8000的LP培养基上,正常体细胞胚数达到171个·g(-1),高于其他处
[期刊] 林业科学  [作者] Dietrich Ewald  胡建军  
本文报道了挪威云杉 (Piceaabies)和杂种落叶松 (Larixdeciduas×L .kaempferi)人工授粉种子诱导胚性细胞系及植株的再生。挪威云杉在德国SaxonOre山区被选为对空气污染有抗性的树种并种植在位于Waldsieversdorf的林木遗传育种研究所的种植园中。对挪威云杉测试了几个不同亲本组合的种子形成胚性细胞系的能力。这些云杉种子于 1992 0 1采收 ,含有干燥的成熟合子胚。作为对照 ,相同的亲本组合云杉种子于1993 0 8和 1998 0 8采收 ,合子胚处于成熟中。杂种落叶松则只有一个人工授粉组合 ,大田试验证实幼苗生长良好。分别于 1995和 199...
[期刊] 林业科学研究  [作者] 马建伟  王军辉  张守攻  赵秋玲  韩云花  张增顺  
研究了云杉花粉在离体培养条件下,蔗糖浓度、pH值、贮藏条件对其萌发和花粉管生长的影响,同时还优化了培养基的组分配比。结果表明:培养基中蔗糖浓度和pH值对云杉花粉的萌发影响显著,并有明显的交互效应。蔗糖低浓度和高浓度都不利于云杉花粉的萌发。不同的云杉种对培养基中蔗糖浓度要求不同,粗枝云杉和欧洲云杉花粉萌发的适宜培养基的蔗糖浓度和pH值分别为7.5%、5.5,10%、5.5。在暗培养条件下,欧洲云杉花粉6 h开始萌发,粗枝云杉8 h开始萌发,欧洲云杉较粗枝云杉提早2 h,同时欧洲云杉花粉萌发率总体高于粗枝云杉;欧洲云杉花粉管的生长历程为20 22 h,而粗枝云杉为16 h左右;欧洲云杉的花粉管长度...
[期刊] 浙江农林大学学报  [作者] 赵鑫   陈虹   赵善超   陈兵权   郭来珍   周昊亮  
【目的】研究新疆天山云杉Picea schrenkiana var.tianschanica种子雨时空动态分布规律和种子萌发状况,为预测森林群落的演替趋势,并为保护天山森林生态系统的物种多样性提供科学依据。【方法】在林场设置3块面积为1hm~2天然林永久固定监测样地,采用机械布局的方法以10 m×10 m的样方为单位,在样方中心设置1个种子雨收集器,每个样地共100个收集器。采用方差/均值(C_x)、负二项指数(K)、聚集度指标(I)、Cassie R M指标(C_A)等4种空间分布类型评价方法判别种子雨空间分布状态。此外,进行种子萌发试验,分别测定种子千粒重、发芽势和发芽率。【结果】9月下旬至10月中旬散种量较高;2022年的种子雨总量极显著高于2021年的种子雨总量;C_x为2 047.01、K为1.02、I为2 046.01、C_A为0.99,4个指标均显示种子空间分布呈聚集分布;各样地高峰期的天山云杉种子千粒重显著高于初始期和末尾期的天山云杉种子千粒重;而种子雨初始期和高峰期的种子平均发芽势与平均发芽率差异不显著,但都显著高于末尾期的种子的平均发芽势和平均发芽率。【结论】天山云杉种子的散种量存在较大的年际变化,且种子空间分布呈聚集分布,落种高峰期为9月下旬至10月中旬,此时种子质量最大,平均发芽率和发芽势最高。图5表1参29
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 曾艳玲  张琳  谭运德  王聪  罗俊  王方艳  
以云实当年生嫩叶为试材,设计正交试验优化脱分化和再分化培养基配方,获得体细胞胚并诱导不定芽;筛选最佳生根培养基,获得完整无菌植株并移栽成活。试验结果表明,最佳诱导愈伤组织培养基为:1/2MS+TDZ 0.5 mg.L-1+IBA0.3 mg.L-1,且该培养基也适合云实叶片愈伤组织再分化出芽;添加0.1%活性碳能抑制褐化,同时促进体细胞胚发生和不定芽产生;1/2MS+NAA 0.1 mg.L-1最适宜云实无菌苗生根,其根系数量质量均优于其他生根培养基组合;移栽采用蛭石∶珍珠岩∶草炭灰(1∶1∶1)基质,成活率达85%。
[期刊] 林业科学  [作者] 杨玲  沈海龙  
利用花楸树人工控制授粉后的未成熟合子胚进行体细胞胚的诱导培养,通过石蜡切片、扫描电镜和透射电镜对合子胚和体细胞胚的发生发育过程进行组织、细胞观察。结果表明:1)体细胞胚发生进程与合子胚相似,均经历了球形期、心形期、鱼雷形期,最终发育成成熟胚;2)直接发生和间接发生在愈伤组织表面的体细胞胚均为单细胞起源,间接发生在愈伤组织内部的体细胞胚存在单细胞起源,同时还存在可能的多细胞起源;3)子叶和愈伤组织表面发生的体细胞胚在发育早期均具明显的胚柄,鱼雷形胚期胚柄退化;4)愈伤组织内部发生的体细胞胚没有胚柄;5)与合子不同,胚性细胞的第1次分裂为均等分裂;6)多细胞原胚周围降解的细胞具有细胞程序性死亡的形...
[期刊] 林业科学  [作者] 孔冬梅  沈海龙  冯丹丹  张莉杰  
Maturing seeds were collected from fifty-year-old trees of Fraxinus mandshurica. The cotyledon and hypocotyl zygotic embryos were excised and cultured on 1/2MS media to induce somatic embryos. In cytological study of embryo development, by the way of paraffin, somatic and zygotic embryogenesis was o...
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