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[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈越 王玲仙 付坚 陈玲 肖素勤 柯学 钟巧芳 赵才美 余腾琼 王波 张敦宇 殷富有 程在全
【目的】为云南疣粒野生稻原生质体的培养、细胞融合、细胞再分化成植株奠定基础。【方法】测定不同酶解组合及浓度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度下云南疣粒野生稻原生质体的产量和活力,同时筛选云南疣粒野生稻原生质体分离和培养的较优条件。【结果】优化后建立云南疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的周期可缩短至45～60 d;在纤维素酶1.5%+果胶酶0.3%+甘露醇0.6 M+MES 5 mM+CaCl_(2 ) 5 mM条件下酶解2 h,云南疣粒野生稻原生质的产量为1.45×10~(6 )个/g·FW,活力达到90.17%,制备出的原生质体在固液培养下得到云南疣粒野生稻原生质体再生植株。【结论】建立了一套快速高效分离培养云南疣粒野生稻原生质体的体系,对研究重要植物资源、种质创新和发掘其优良基因具有重要意义。
[期刊] 水产学报
[作者]
谢恩义 马家海
为了开发礁膜人工育苗的新技术,以4％果胶酶和2％纤维素酶的甘露醇溶液,分离酶解经无菌处理的礁膜叶状体,在40mmol·L~(-1)CaCl_2,0.7mol·L~(-1)甘露醇,pH5.5,温度28℃,摇床速度50r·min~(-1)旋转振荡3h的条件下,1.0g湿重礁膜可获原生质体约2×10~6个。原生质体分离后依次用比重为1.030、1.026、1.022的消毒海水(添加N、P、Fe~(2+)、IAA、KB、Vit C)培养,2d后已形成明显的再生细胞壁,3～4d后细胞开始分裂,8d后形成由4～8个细胞组成的细胞团,以后原生质有不同的发育形态,较常见的是形成由一共同胶质膜包被的类似亲本的叶...
关键词：
礁膜 原生质体 酶解 分离 培养
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周宇波 柳俊 谢从华 蔡兴奎
试验以马铃薯试管苗叶片为原生质体来源 ,通过研究材料预处理方法对原生质体产量和质量的影响 ,培养方式及培养基中糖醇与细胞分裂和愈伤组织形成的关系 ,优化并建立了高效稳定的原生质体培养体系 ,获得了 2个双单倍体系的叶肉原生质体再生植株
关键词：
马铃薯 原生质体 培养体系
[期刊] 林业科学研究
[作者]
阙国宁 诸葛强
以牡竹属黄竹（ＤｅｎｄｒｏｃａｌａｍｕｓｍｅｍｂｒａｎｃｅｕｓＭｕｎｒｏ）的竹节及无菌苗根颈为外植体，培养于含有５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ、０．２ｍｇ／ＬＫＴ和２００ｍｇ／ＬＬＨ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，然后移至相同成份或不同浓度２，４－Ｄ的液体培养基中，进行悬浮培养，以建立分散性良好的悬浮细胞系。利用悬浮细胞和无菌苗叶片经酶解获大量原生质体，其产量分别约为每克鲜重２．５×１０５个和５×１０５个，活力均可达８０％。
关键词：
黄竹,细胞悬浮培养,原生质体分离
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李正红 孙振元 刘秀贤 彭镇华
用纤维素酶、果胶酶、甘露醇的混合酶液提取地锦和五叶地锦无菌苗幼叶、五叶地锦胚乳愈伤组织及地锦幼胚愈伤组织的原生质体,对影响原生质体提取得率及活力因素进行分析,对不同材料原生质体得率进行比较,对提取的原生质体进行液体浅层、固液结合及固体等方式培养,对原生质体形成的愈伤组织以MS和改良B5培养基附加不同浓度NAA、6 BA、2,4 D、PEG、KT、ZT等进行分化培养。试验结果表明:纤维素酶对原生质体提取得率有极显著影响,适宜地锦幼叶原生质体提取的酶液组合为:纤维素酶0.5%、果胶酶0.3%、甘露醇0.6mol·L-1、酶解8h;不同材料原生质体提取得率有显著差异;仅五叶地锦胚乳愈伤组织来源的原生...
关键词：
地锦 五叶地锦 原生质体 培养
[期刊] 华北农学报
[作者]
周延清 苑保军 张根发 卢龙斗
用决明（ＣａｓｉａｏｂｔｕｓｉｆｏｌｉａＬ．）子叶和下胚轴为材料，游离和培养原生质体。结果表明，１５日龄无菌苗的子叶和下胚轴比较适于游离原生质体，每１ｇ材料的原生质体产量高达１．６×１０４个；ＰｅｃｔｏｌｙａｓｅＹ－２３是分离原生质体所必需的；用含２，４－Ｄ０．４ｍｇ／Ｌ（以下单位同），ＮＡＡ１．０与ＫＴ０．１的ＫＭ８Ｐ漂浮培养利于原生质体的分裂。培养４ｄ后，原生质体开始分裂，１５ｄ后其植板率约为１９．２％，３０ｄ形成了细胞团或小愈伤组织。增殖愈伤组织在分化培养基上培养，可分化出芽。芽在生根培养基上培养１４ｄ生根，从而再生决明小植株。
关键词：
决明,原生质体,再生植株
[期刊] 水产学报
[作者]
王素娟 孙云龙 马凌波 何培民
本研究多次获得原生质体，明确了酶解原生质体的内在因素与外在条件，诸如酶溶剂的种类及浓度，酶及组成，酶解温度及ｐＨ，采种藻时间及取用部位。分离的原生质体经初步培养，发现少数２分裂，最好的有成６分裂的细胞团，但尚未成株。研究结果为扩大培养打下了良好的基础。此外，还报道了用海洋细菌酶解的试验及意义
关键词：
羊栖菜,原生质体,分离,培养
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
葛台明 章荣德 秦发兰 余毓君 谢岳峰
以多花黑麦草 (LoliummultiflorumLam .)幼穗为外植体诱导愈伤组织 ,经高有机态氮培养基改造得到易碎型胚性愈伤组织 ,在 1 / 2AA培养基 +1 / 2MSDL培养基中得到了生长迅速、分散的胚性悬浮系。分离原生质体经培养后得到了再生白化苗
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈秀华 张尧忠 徐宁生
原生质体培养在作物改良工作中，国内外目前有如下几方面的应用：（１）原生质体融合：利用该技术转移细胞质基因控制的农艺性状，如细胞质雄性不育，这在水稻（Ｙａｎｇ１９８８，Ａｋａｇｉ１９８９，Ｋｙｏｚｕｋａ１９８９，ＴｏｓｈｉｒｏＫ．１９９５）、油菜（Ｐｅ...
关键词：
水稻,原生质体,培养,植株再生
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉强
根据增加棉花基因库多样性的迫切需要,棉花改良计划正在转向于多种分子育种技术的应用和资源的利用。丰富的棉花野生种(Gossypiumspp.)是栽培棉遗传改良重要的种质资源和更新资源,并成为宝贵的遗传资源库,野生棉研究利用对栽培棉的遗传改良有着重大的现实和理论意义及潜在的应用
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贺涵 阳习鹏 赵婉欣 邵雪花 杨凤玺 刘传和
【目的】研究菠萝叶基原生质体的高效分离方法,并对制备的原生质体进行瞬时转化,为利用菠萝原生质体进行菠萝基因功能研究提供技术支持。【方法】以‘巴厘’菠萝(Ananas comosus,‘Comtede Paris’)幼嫩叶片的叶基为材料,采用3因素3水平正交试验L9(33)分析纤维素酶质量浓度(6,12,20 g/L)、离析酶质量浓度(3,6,9g/L)和甘露醇浓度(0.4,0.5,0.6 mol/L)对分离原生质体产量与活力的影响;同时,利用单因素试验(设置酶解时间2,4,6 h)筛选制备原生质体的最适酶解时间,确定分离菠萝叶基原生质体的最适条件;在最适条件下制备原生质体,采用聚乙二醇(PEG)介导法转化质粒,建立菠萝原生质体瞬时转化体系。【结果】L_9(3~3)正交试验结果显示,不同处理分离的原生质体产量为1.01×10~6～1.93×10~6 g~(-1),纤维素酶质量浓度是决定原生质体产量的关键因素;原生质体活力为65.55%～87.00%,甘露醇浓度对原生质体活力的贡献最大。最适酶解条件为:菠萝叶基在含12 g/L纤维素酶、6 g/L离析酶、0.6 mol/L甘露醇的酶液中避光酶解4 h,产量可达1.96×10~6 g~(-1),活力为85.54%。菠萝叶基原生质体通过PEG介导法转化p AN580-WRKY75质粒后,可在激光共聚焦显微镜下观察到核内的绿色荧光信号。【结论】确定了菠萝叶基原生质体的最适分离条件与瞬时转化方法,建立了适用于菠萝基因功能分析的原生质体瞬时表达体系。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
诸葛强 阙国宁
山杉木(Cunninghamia lanccolata Hook.)成熟种子胚在含有2.0mg/l 2,4-D、0.2mg/l KT的MS培养基上诱导愈伤组织,通过筛选继代培养,得到了生长旺盛、质地松散的愈伤组织细胞系。继代初期适当降低蔗糖浓度有助于减少愈伤组织的褐化。将5个月龄的愈伤组织转移至含1.5～2.0 mg/l 2,4-D、0.1～0.2mg/l KT、200 mg/l CH的MS液体培养基振荡培养,建立了增殖快、分散性良好的杉木悬浮细胞系。从4个月龄的悬浮细胞酶解(2％纤维素酶、0.25％果胶酶和13％甘露醇),游离得到大量的杉木原生质体,产量为9.3×10~5个/g FWW,活力...
关键词：
杉木 悬浮细胞系 原生质体的分离
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张守英 阙国宁
Callus was induced by embryos from mature seeds of Pinus serotina with MS medium contained 0.2 mg?L -1 of KT and 2.5 mg?L -1 of 2,4 D.After successive subculture and selection,six month old callus were transferred to a liquid medium with 0.2 mg?L -1 of KT and 0 5.0 mg?L -...
关键词：
晚松 悬浮细胞系 原生质体分离
[期刊] 华北农学报
[作者]
吕复兵 张献龙 刘金兰
以陆地棉品种“珂字２０１”为材料，比较了ＩＡＡ＋ＫＴ和２，４－Ｄ＋ＫＴ在愈伤诱导和悬浮培养中的效应，结果表明，愈伤组织诱导中，ＩＡＡ和２，４－Ｄ表现为正效应，且２，４－Ｄ的效应强于ＩＡＡ；ＫＴ表现为负效应；胚性愈伤悬浮培养中，３种激素都表现出负效应。以胚性细胞悬浮系为材料进行了原生质体的分离和培养试验，分离原生质体的最佳酶组合为纤维素酶（ＯｎｏｚｕｋａＲ１０）３％＋果胶酶（Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ）１．５％，原生质体培养的最佳激素组合为ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ，适当提高原生质体密度有利于原生质体培养。光照，温度等物理因素对原生质体培养也有明显影响。原生质体再生的愈伤组织直接在无激素的...
关键词：
陆地棉,原生质体培养,植株再生
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴琴生 刘宝 刘大钧
“中国春”胚性细胞悬浮系经混合酶液处理,可游离出大量原生质体(产量可达3×10~7～4×10~7/ml细胞)。这些原生质体在较简单的 MS 修饰培养基上(液体浅层或低溶点琼脂糖包埋)能够持续分裂,并以较高植板率(45%～47%)形成细胞团。将来自细胞团的微愈伤组织转至分化培养基上能够产生大量绿点;只有少数愈伤组织能够转变为结构紧密的胚性愈伤组织;并由此分化出大量根系和叶片,但未获得完整植株。文中对造成这一现象的可能原因进行了讨论。
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