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[期刊] 中国农业科学  [作者] 赵永祥  刘吉英  潘增祥  张久峰  姚勇  周吉隆  谢庄  徐银学  刘红林  李齐发  
【目的】了解二花脸猪Smad4(common-mediator Sma4)基因的序列特征和组织表达特征,分析二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA表达水平的差异。【方法】采用克隆测序技术获得二花脸猪Smad4基因cDNA序列,利用生物信息学方法分析二花脸猪Smad4基因的序列特征和蛋白的理化性质、高级结构,RT-PCR检测其组织表达特征,并采用real-time PCR技术检测二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA的表达水平。【结果】二花脸猪Smad4基因编码区序列全长1 659 bp,编码一个含有552个氨基酸残基的蛋白质,氨基酸序列与其它哺乳动物的同源性均在98%以上;...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 姚勇  潘增祥  张久峰  赵永祥  谢庄  刘红林  徐银学  李齐发  
NR5A2是孤儿核受体家族中的重要成员,在胚胎发育、类固醇激素生成、卵泡发育和排卵中发挥重要作用。经克隆和测序获得二花脸猪NR5A2基因编码区序列,采用RT-PCR技术分析其组织表达特征,并采用荧光定量PCR技术检测二花脸猪与杜长大三元杂交猪卵巢组织中NR5A2基因转录水平。结果表明:二花脸猪NR5A2基因编码区序列长1 506 bp,编码蛋白含有DNA结合域、Ftz-F1盒和配体结合域等保守结构域。二花脸猪NR5A2基因在各种组织中广泛表达,特别是在卵巢组织中高表达,且卵巢组织中转录水平显著高于杜长大三元杂交猪(P<0.05)。推测二花脸猪NR5A2基因在卵泡发育和排卵中发挥重要作用,并可能...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 徐跑  俞菊华  唐永凯  吴婷婷  
P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本研究采用RT-PCR和RACE(Rapid Ampli-fication of cDNA Ends)法,分离和克隆了黄颡鱼(Pelteobasrus fulvidraco)卵巢P450芳香化酶基因HP450arom A,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了分析。结果表明,HP450arom A cDNA全长1 914 bp[不包括poly(A)],5′端非翻译区有13 bp,3′端362 bp[不包含poly(A)],阅读框(Open Reading Frame,ORF)1 539 bp,翻译成513个氨基...
[期刊] 华北农学报  [作者] 王峰  刘永斌  荣威恒  田春英  达赖  
为阐明BMPRIB基因在牛的卵泡发育和分化中的作用及其分子机理,首先根据其他物种BMPRIB基因的保守序列设计特异性引物,从蒙古牛卵巢中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出蒙古牛BMPRIBcDNA序列;将此片段克隆到pGM-T载体中,提取重组质粒,经PCR鉴定和DNA序列测定分析验证;符合BMP家族基因结构特征,然后根据此序列构建cRNA探针,利用原位杂交技术检测牛卵巢BMPRIB基因mRNA的表达情况。原位杂交结果显示,牛BMPRIB基因,在初级卵泡和次级卵泡早期表达,在颗粒细胞中表达,在次级卵泡晚期也有表达。
[期刊] 中国水产科学  [作者] 卜宗元  傅洪拓  孙盛明  乔慧  金舒博  张文宜  龚永生  蒋速飞  熊贻伟  吴滟  
本研究应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis)Ran(Ras related nuclear protein,Ras相关核蛋白)基因全长cDNA序列,该基因cDNA全长1191 bp,包括218 bp的5'UTR,648 bp的开放阅读框(ORF),405 bp的3'UTR,编码215个氨基酸。青虾Ran基因属于P-loop-NTPase超级家族,拥有PTZ00132跨结构域,多肽分子量约为24.57 kDa,理论等电点7.13。系统进化树分析表明,在动物界进化中非
[期刊] 华北农学报  [作者] 何小龙  刘永斌  王峰  田春英  达赖  荣威恒  
在单、双羔蒙古羊卵巢组织抑制性消减杂交的基础上,以其差异表达片段ADAMTS1基因序列为种子序列,采用GenBank的BLAST检索系统首先对蒙古羊的ADAMTS1基因序列片段进行了电子延伸,其次在获得蒙古羊AD-AMTS1基因的cDNA全序列后设计引物,采用RT-PCR方法进一步克隆了蒙古羊ADAMTS1基因。结果显示,试验所得序列与电子延伸序列的同源性为99.4%,序列长为2 420 bp包括836 bp 3'UTR区域和1 578 bp的完整开放读码框,共编码525个氨基酸。Blastn比对发现蒙古羊ADAMTS1基因序列与牛、猪和人的同源性分别为94%,87%,82%;对氨基酸序列进行...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 李发弟  夏东  陈杰  赵茹茜  
随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 张好放  郁二蒙  王广军  余德光  李志斐  谢骏  
为研究TGF-β1/Smad4信号通路在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉发育过程中的作用机制,首先克隆了草鱼TGF-β1、Smad4基因开放阅读框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644bp。其次,在TGF-β1、Smad4序列两端分别加上相应的酶切位点,同时对pcDNA3.1(+)真核表达载体进行双酶切,将带酶切位点的片段正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建TGF-β1、Smad4基因的真核过表达载体pcDNA3.1(+)-
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 石宝通  钱照君  王辉  陆伟  牛东红  李家乐  
利用RACE技术获得了UB-E2基因c DNA全长,通过RT-PCR技术研究UB-E2基因在不同组织、发育时期的表达量和17α-羟孕酮激素刺激后UB-E2表达量及性腺发育情况。结果表明:该基因序列全长3 943bp,开放阅读框675 bp,编码224个氨基酸,相对分子量23. 93 ku,等电点8. 61,82~219位氨基酸序列为泛素结合酶家族特有的结构域。氨基酸序列比对发现,克氏原螯虾UB-E2基因与节肢动物UB-E2基因有较高的同源性;系统进化分析表明,UB-E2基因与凡纳滨对虾和斑节对虾聚为一支。荧光定量结果显示,UB-E2基因在克氏原螯虾卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P
[期刊] 水产学报  [作者] 梁俊平  王芸  段亚飞  葛倩倩  李吉涛  李健  刘萍  聂国兴  
为了解蜕皮激素受体(EcR)在脊尾白虾卵巢和胚胎发育中的作用,采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾EcR基因全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KC506600),用实时荧光定量PCR方法分析了EcR基因在雌虾不同组织、卵巢以及胚胎发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾EcR基因全长2 638 bp,开放阅读框1 713 bp,编码570个氨基酸,脊尾白虾EcR在系统进化上与行抱卵繁殖的真虾类和蟹类亲缘关系较近,而与对虾类较远。脊尾白虾EcR基因在各组织中均有表达,但主要在肝胰腺内表达。在脊尾白虾繁殖期内,肝胰腺内EcR的表达量始终高于卵巢,表达量峰值出现在卵巢成熟时期,而卵...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 唐永凯  李建林  陈文华  俞菊华  
采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(Rapid amplification of cDNAends,RACE)法分离出奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus)卵巢芳香化酶(P450aromA)的全序列,得到1784bp的全长cDNA,包括38bp5′非翻译区,1566bp阅读框以及含Poly(A)信号(AATAAA)的167bp3′非翻译区[不包括Poly(A)]。阅读框共编码521个氨基酸,推算的蛋白质分子量为59kD。同源性分析显示,奥利亚罗非鱼P450aromA的氨基酸序列与其他鱼类性腺芳香化酶(P450arom)具有70%以上的同源性,与其他鱼类脑P450arom有60...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 梁俊平  李健  李吉涛  刘萍  刘德月  
为了解卵黄蛋白原受体(vitellogenin receptor,vg r)在脊尾白虾卵巢发育中的作用,采用同源克隆和rAce技术,克隆了脊尾白虾vg r基因全长c DnA序列,用实时荧光定量pcr方法分析了vg r基因在雌虾不同组织、卵巢发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾vg r基因全长5892 bp,开放阅读框5661 bp,编码1886个氨基酸。脊尾白虾vg r具有低密度脂蛋白受体(lDlr)家族典型结构特征,属于lDlr家族,进化上与日本沼虾等甲壳动物vg r亲缘关系最近,然后与昆虫vg r分支聚为一支,而与lDlr家族中其他成员亲缘关系较远。脊尾白虾vg r在各组织中均有表达...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 石仙  熊显荣  兰道亮  陈伟明  胡嘉嘉  蔡雯祎  李键  
【目的】研究牦牛细胞周期蛋白D2(Cyclin D2,CCND2)基因序列特征及其在牦牛不同发情时期卵巢中的表达。【方法】以牦牛为研究对象,提取卵巢的总RNA进行反转录为第一链c DNA,根据Gen Bank中黄牛CCND2的m RNA序列(Gen Bank登录号:NM_001076372.1),使用Primer 5.0软件设计引物。应用PCR方法对CCND2基因扩增克隆,并测序获得CCND2基因完整的CDS区序列及部分5′端和3′端UTR区。使用Protparam、SOPMA、SWISS-MODEL及S
[期刊] 中国水产科学  [作者] 贾复龙  孟宪亮  刘萍  李健  高保全  
本实验应用RACE技术克隆获得了三疣梭子蟹(PoRtunus tRitubERCulAtus)周期蛋白依赖性激酶7(Cdk7)基因C dnA序列全长。基因5′和3′非编码区域(utR)以及开放阅读框的长度分别是23 bP、178 bP和1056 bP,预测编码一个含有351个氨基酸,分子量为39.91 k d的蛋白质,包含一个丝氨酸/苏氨酸催化保守结构域和t-looP结构。同源性分析表明,三疣梭子蟹Cdk7氨基酸序列与其他物种Cdk7相似度较高,说明Cdk7基因具有很好的保守性。实时荧光定量PCR结果显示,三疣梭子蟹Cdk7基因在卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。Cdk7基因...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 柳学周  臧坤  徐永江  李春广  史宝  王妍妍  
利用cDNA末端快速克隆(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)方法获得了漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)促黄体素(Luteinizing Hormone,LH)β亚基的cDNA全长序列,检测了LHβ亚基mRNA的组织表达水平,揭示了垂体、肝脏和卵巢中LHβ亚基mRNA在卵巢发育周期中的表达水平变化,利用酶联免疫技术(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)测定了血浆LH和雌二醇(Estrodiol,E2)表达水平的变化。结果表明,漠斑牙鲆为卵巢非同步发育分批产卵性鱼类,LHβ亚基cDN...
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