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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姚勇 潘增祥 张久峰 赵永祥 谢庄 刘红林 徐银学 李齐发
NR5A2是孤儿核受体家族中的重要成员,在胚胎发育、类固醇激素生成、卵泡发育和排卵中发挥重要作用。经克隆和测序获得二花脸猪NR5A2基因编码区序列,采用RT-PCR技术分析其组织表达特征,并采用荧光定量PCR技术检测二花脸猪与杜长大三元杂交猪卵巢组织中NR5A2基因转录水平。结果表明:二花脸猪NR5A2基因编码区序列长1 506 bp,编码蛋白含有DNA结合域、Ftz-F1盒和配体结合域等保守结构域。二花脸猪NR5A2基因在各种组织中广泛表达,特别是在卵巢组织中高表达,且卵巢组织中转录水平显著高于杜长大三元杂交猪(P<0.05)。推测二花脸猪NR5A2基因在卵泡发育和排卵中发挥重要作用,并可能...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵永祥 刘吉英 潘增祥 张久峰 姚勇 周吉隆 谢庄 徐银学 刘红林 李齐发
【目的】了解二花脸猪Smad4(common-mediator Sma4)基因的序列特征和组织表达特征,分析二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA表达水平的差异。【方法】采用克隆测序技术获得二花脸猪Smad4基因cDNA序列,利用生物信息学方法分析二花脸猪Smad4基因的序列特征和蛋白的理化性质、高级结构,RT-PCR检测其组织表达特征,并采用real-time PCR技术检测二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA的表达水平。【结果】二花脸猪Smad4基因编码区序列全长1 659 bp,编码一个含有552个氨基酸残基的蛋白质,氨基酸序列与其它哺乳动物的同源性均在98%以上;...
关键词：
二花脸猪 Smad4 卵巢组织 表达水平
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张超 马晓 刘倩 吴利敏 刘慧芬 李学军 王璐明
为了解NR5a2在中华鳖(Pelodiscus sinensis)性腺分化过程中的作用,通过RACE技术克隆获得中华鳖NR5a2 cDNA。结果显示:该基因序列全长为2 674 bp,开放阅读框为1 608 bp,编码535个氨基酸,5′非编码区长度为40 bp,3′非编码区长度为1 026 bp。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白质分子质量为60.5 ku,等电点为8.57,具有保守的ZnF-C4结构域和HOLI结构域。氨基酸多重序列比对分析表明中华鳖NR5a2基因与西部锦龟(Chrysemys picta bellii)的相似性最高,其次是原鸡(Gallus gallus)。系统进化分析表明中华鳖NR5a2与西部锦龟的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR结果表明NR5a2在中华鳖不同组织中均有表达,且卵巢组织中的表达量显著高于精巢组织。31.5℃孵化条件下,不同发育时期的中华鳖胚胎组织中发现NR5a2基因在17期时表达量达到最高,随后显著下降。结果表明NR5a2可能参与中华鳖的性别分化。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨彤彤 张婷婷 赵族 徐银学
采用PCR-RFLP方法分析大约克猪和二花脸猪SLA-DRB外显子2的多态性。结果显示:RsaⅠ酶切后得到3种等位基因条带,分别为A(141/93/11 bp)、B(111/69/54/11 bp)、D(93/48/39/54/11 bp)。χ2检测表明:二花脸猪SLA-DRB基因外显子2处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而大约克猪处于非平衡状态(P<0.01)。两品种A等位基因均为优势等位基因,AA型为主要基因型,其频率在品种间无显著差异。首次发现等位基因B、D分别出现在二花脸猪和大约克猪中,有望用于区分两品种。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杜星 曾强 刘禄 李琦琦 杨柳 潘增祥 李齐发
【目的】前期研究证实linc-NORFA作为母猪繁殖性状候选基因参与调控卵泡闭锁与卵泡颗粒细胞凋亡过程,进一步鉴定二花脸猪linc-NORFA核心启动子并分析其转录调控机制,为解析linc-NORFA介导猪卵泡闭锁的分子机制奠定理论基础并提供新的研究思路。【方法】采集二花脸猪耳组织样品并提取基因组DNA,利用PCR扩增和测序技术获得二花脸猪linc-NORFA5′调控区序列;通过构建缺失表达荧光报告载体并利用荧光素酶活性试验鉴定二花脸猪linc-NORFA核心启动子;利用生物信息学分析二花脸猪linc-NORFA核心启动子区序列特征与潜在的转录因子结合位点;构建猪FOXO1真核生物表达载体并进一步采用Western blot、qRT-PCR以及荧光素酶活性试验分析转录因子FOXO1过表达对二花脸猪linc-NORFA转录的影响;利用染色质免疫沉淀(ChIP)技术鉴定转录因子FOXO1与二花脸猪linc-NORFA核心启动子区的结合能力。【结果】通过克隆测序与序列拼接共获得二花脸猪linc-NORFA 5′调控区序列1 734 bp,其中包含两个潜在的CpG岛;利用荧光素酶活性试验证实linc-NORFA核心启动子位于-988—-684 bp(转录起始位点作为+1),生物信息学分析表明二花脸猪linc-NORFA核心启动子上包含多个转录因子的结合元件,例如ESR2、FOXO1、E2F1、BRCA1以及NFIC等;另外,ChIP试验还证实在猪卵巢颗粒细胞中FOXO1作为转录因子直接靶向结合在linc-NORFA的核心启动子区;进一步通过试验证实FOXO1过表达可显著下调linc-NORFA核心启动子区活性(P<0.01),同时显著抑制体外培养的猪卵巢颗粒细胞中linc-NORFA的表达(P<0.01)。【结论】鉴定了二花脸猪linc-NORFA核心启动子区,同时证实FOXO1作为转录因子能够与linc-NORFA核心启动子区特异性结合,进而抑制后者的转录活性与表达。研究结果对探究linc-NORFA在猪卵泡闭锁过程中显著下调的分子机制具有重要意义。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宿英 阮国荣 龙毅 杨斌 张志燕 邓玮芸 吴丽花 吕显山 艾华水 肖石军 任军 黄路生 丁能水
【目的】通过基于单倍型的病例-对照全基因组关联分析(GWAS)鉴别白色杜洛克×二花脸F2资源家系中影响猪阴囊疝的易感位点及位置功能候选基因,并在远缘纯种猪阴囊疝三联体核心家系(Trio)群体中进行重复验证。【方法】利用Illumina porcine 60K SNP芯片对1 020头白色杜洛克×二花脸F2资源家系阴囊疝群体(包含19个阴囊疝患病个体)进行扫描获取基因型。通过Plink v1.07软件对基因型数据进行质量控制;剔除个体基因型检出率<90%的个体,剔除SNP位点检出率<90%、哈迪温伯格平衡卡方检验P≤10-3和最小等位基因频率<0.05及性染色体上和无法定位的SNP位点。质控合格...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
石宝通 钱照君 王辉 陆伟 牛东红 李家乐
利用RACE技术获得了UB-E2基因c DNA全长,通过RT-PCR技术研究UB-E2基因在不同组织、发育时期的表达量和17α-羟孕酮激素刺激后UB-E2表达量及性腺发育情况。结果表明:该基因序列全长3 943bp,开放阅读框675 bp,编码224个氨基酸,相对分子量23. 93 ku,等电点8. 61,82～219位氨基酸序列为泛素结合酶家族特有的结构域。氨基酸序列比对发现,克氏原螯虾UB-E2基因与节肢动物UB-E2基因有较高的同源性;系统进化分析表明,UB-E2基因与凡纳滨对虾和斑节对虾聚为一支。荧光定量结果显示,UB-E2基因在克氏原螯虾卵巢组织中的表达量显著高于其他组织(P
关键词：
克氏原螯虾 性腺 UB-E2 表达
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王滨 柳学周 刘权 赵明 徐永江 史宝
为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长c DNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untransl
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜志华 牛树理 冯紫云 甘信德 刘焕芝
利用二花脸、大约克及其Ｆ１、Ｆ２和回交世代的最小二乘均数，采用多元回归分析程序，对猪的产仔数主要组分性状的基因效应进行了研究。组分性状包括卵巢体积、总卵泡数、未成熟卵泡数、排卵数、卵泡成熟率和妊娠胚胎数。结果表明：加性效应是世代间遗传变异的主导因素。在卵巢体积、总卵泡数和未成熟卵泡数方面，大约克对二花脸加性效应值依次为５．３４８０ｃｍ３，５．３４０２枚和８．０５３９枚；在排卵数、卵泡成熟率和妊娠胚胎数方面，二花脸对大约克加性效应值依次为１．９７４６枚，６．８４１１％和２．６１１４个。大约克在４个性状上呈显性，即卵巢体积、总卵泡数、未成熟卵泡数和妊娠胚胎数，而二花脸仅在排卵数和卵泡成熟率方面呈显...
关键词：
猪 产仔数 组分 基因 效应
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张倩 方宇瑜 李平华 马翔 蒋能静 黄媛 陆志强 季铮渝 黄瑞华
[目的]本文旨在通过研究猪ESR、FSHβ和AHR基因多态性对二花脸群体产仔数的影响,鉴别出影响二花脸猪产仔数变异的关键基因。[方法]对303头二花脸猪进行ESR基因g.14418786、FSHβ基因g.30398474_30398475ins292(292 bp大片段插入)、AHR基因g.86550830位点分型(Sscrofa11.1),用Excel 2003软件进行基因多态性分布的分析和卡方检验,并利用SAS 9.2软件混合模型对ESR、FSHβ、AHR基因及其合并基因型与产仔数进行关联性分析。[结果]ESR基因g.14418786、FSHβ基因g.30398474_30398475ins292以及AHR基因g.86550830位点在二花脸群体中均具有多态性,且3个基因的不同等位基因频率差异很大,ESR基因g.14418786位点A、B等位基因频率分别为0.173和0.827,FSHβ基因g.30398474_30398475ins292位点A、B等位基因频率分别为0.889和0.111,而AHR基因g.86550830位点G、T等位基因频率分别为0.889和0.111。ESR基因g.14418786位点的AA、AB和BB基因型频率分别为0.050、0.248和0.703,FSHβ基因g.30398474_30398475ins292的AA、AB和BB基因型频率分别为0.808、0.162和0.030,AHR基因g.86550830位点的GG、GT和TT基因型频率则为0.792、0.194和0.013。ESR基因g.14418786与FSHβ基因g.30398474_30398475ins292位点显著偏离哈代-温伯格平衡(P0.05)。关联性分析未发现ESR、FSHβ、AHR基因以及3个基因的合并基因型显著影响二花脸猪的产仔数(P>0.05)。[结论]本试验未能证明ESR、FSHβ和AHR基因是影响二花脸猪产仔数的主效基因,二花脸猪产仔数变异可能受其他基因影响。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐跑 俞菊华 唐永凯 吴婷婷
P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本研究采用RT-PCR和RACE(Rapid Ampli-fication of cDNA Ends)法,分离和克隆了黄颡鱼(Pelteobasrus fulvidraco)卵巢P450芳香化酶基因HP450arom A,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了分析。结果表明,HP450arom A cDNA全长1 914 bp[不包括poly(A)],5′端非翻译区有13 bp,3′端362 bp[不包含poly(A)],阅读框(Open Reading Frame,ORF)1 539 bp,翻译成513个氨基...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘林清 李凤娥 熊远著 邓昌彦
【目的】克隆猪核受体4A1 (Nuclear receptor subfamily 4,group A,member 1,NR4A1) DNA序列全长，并对CDS序列及其表达模式进行分析。【方法】以未成年长大母猪的卵巢为材料，采用电子克隆技术，对猪NR4A1 DNA序列进行分离和测序，并对猪NR4A1基因序列进行生物信息学分析；利用性腺激素（人绒毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）和孕马血清促性腺激素（Pregnant mare serum gonadotropin，PMSG））处理卵巢颗粒细胞,采用RTPCR方法分析猪NR4A1基因的表达模式。【...
关键词：
猪 NR4A1 序列分析 表达模式
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王海燕 贺佳玮 向安静 章程 朱猛进 赵书红 刘向东
为研究聚肌胞苷酸（ｐｏｌｙｉｎｏｓｉｎｉｃ：ｐｏｌｙｃｙｔｉｄｙｌｉｃ ａｃｉｄ，简称ｐｏｌｙ ｉ：ｃ）刺激对杜洛克×二花脸Ｆ２猪群血液参数的影响，选用杜洛克×二花脸Ｆ２猪３９３头，在３３ｄ时前腔静脉采血（对照组），在３５ｄ时用ｐｏｌｙ（ｉ：ｃ）刺激，４ｈ后采血（处理组），对刺激前后血液参数进行相关性和主成分等分析。研究结果表明，处理组与对照组相比，白细胞中的嗜中性粒细胞百分比（ｎＥ％）、淋巴细胞数（ｌｙ）和淋巴细胞百分比（ｌｙ％）这３项血液参数差异显著相关，红细胞中的红细胞压积（ｈｃｔ％）和红细胞数（ＲＢｃ）差异相关性显著，而血小板第一主成分中决定性指标血小板数（ｐｌｔ）和血小板压积（ｐｃｔ．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜志华 刘红林 李齐贤 胡秀义
利用二花脸、大约克及其Ｆ１、Ｆ２和回交世代共８个猪群的最小二乘均数，采用多元回归分析程序，对猪的初生重、２０日龄重和６０日龄重的母体效应和基因效应进行了研究。结果表明，大约克猪初生重、２０日龄重及６０日龄重平均比二花脸猪依次高０４６１３，１３６４３和２０８９０ｋｇ。初生重受母体效应影响最大，而到６０日龄时加性基因效应则占主导地位。在总变异中，母体效应由初生时的８８８９％降至６０日龄时的４４９％；而加性效应则由初生时的５６１％升至６０日龄时的６５４７％。６０日龄时的个体重，大约克对二花脸猪的加性效应为２３１８４ｋｇ，显性效应为０１１２８ｋｇ。
关键词：
猪 早期生长性状 母体效应 基因效应
[期刊] 水产学报
[作者]
梁俊平 王芸 段亚飞 葛倩倩 李吉涛 李健 刘萍 聂国兴
为了解蜕皮激素受体(EcR)在脊尾白虾卵巢和胚胎发育中的作用,采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾EcR基因全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KC506600),用实时荧光定量PCR方法分析了EcR基因在雌虾不同组织、卵巢以及胚胎发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾EcR基因全长2 638 bp,开放阅读框1 713 bp,编码570个氨基酸,脊尾白虾EcR在系统进化上与行抱卵繁殖的真虾类和蟹类亲缘关系较近,而与对虾类较远。脊尾白虾EcR基因在各组织中均有表达,但主要在肝胰腺内表达。在脊尾白虾繁殖期内,肝胰腺内EcR的表达量始终高于卵巢,表达量峰值出现在卵巢成熟时期,而卵...
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