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[期刊] 中国农业科学
[作者]
蔡克亚 陈克平 刘晓勇 姚勤 李军
【目的】BmNPV包埋型病毒ODV(occlusion-derived virus)粒子在BmNPV感染家蚕初期起了非常重要的作用,主要包含了病毒感染初期所必须的蛋白质,解析其蛋白组成有利于进一步理解病毒和宿主关系,同时也为了进一步了解BmNPV的生活史提供依据。【方法】利用二维电泳对ODV病毒蛋白进行分离,采用考马斯亮兰G-250染色,经质谱鉴定。【结果】共获得70个蛋白点,大部分集中在等电点5～9之间,约占蛋白点总数的61%。其中59个蛋白点适合质谱分析,数据库检索出20种蛋白,其中13种与AcMNPV中鉴定一致,而另7种蛋白是BmNPV中新鉴定出来的。此外,在二维电泳图谱上显示GP41蛋...
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
章纳 王衡瑞 毛彦娜 张成林 秦斌 王志民
寨卡病毒(Zika Virus)属于黄病毒科中的黄病毒属,虽然很早就已经被人类所发现,但是一直到2015年在南美巴西的大规模爆发,才引起了广泛的关注.寨卡病毒对人类的感染往往引起包括小头畸形和格林-巴利综合征在内的多种症状.寨卡病毒的基因组为单链正链RNA,其基因组可以编码翻译并剪切加工出3个结构蛋白,分别为膜蛋白,囊膜蛋白和核衣壳蛋白,以及7个非结构蛋白(NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5).相关研究已经证明,NS1蛋白与同属黄病毒属的登革病毒的发病有紧密的联系,而且根据其蛋白结构推测其可能与寨卡病毒穿越血脑屏障有关.因此鉴别NS1与细胞内的相互作用蛋白对于发现寨卡病毒在细胞内的转运,转录,以及装配都有重大的意义.在此,该课题构建并在HEK293细胞中表达包含Flag和Strep两种标签的NS1融合蛋白,通过免疫沉淀的方法将与NS1结合的蛋白利用标签蛋白进行分离,利用高分辨生物质谱技术,对蛋白进行分析鉴定.通过分别带有Flag与Strep标签的相互作用蛋白分析,发现了16个两种标签共同的结合蛋白,其进一步的通路分析证明这些蛋白于与病毒转录、病毒复制和免疫反应多个通路有关,相关的研究结果为今后进一步研究寨卡病毒的复制机制以及开发抗病毒药物提供了重要的参考价值.
[期刊] 水产学报
[作者]
张克俭 万全 李公行 徐广友
滁州鲫的形态学和血清蛋白电泳谱型张克俭，万全（上海水产大学，２０００９０）（安徽农业大学，合肥２３００３６）李公行，徐广友（安徽省滁州市水产局，２３９０００）关键词滁州鲫，形态学，血清蛋白，电泳分析ＭＯＲＰＨＯＬＯＧＹＡＮＤＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＴ...
关键词：
滁州鲫,形态学,血清蛋白,电泳分析
[期刊] 水产学报
[作者]
吕爱军 胡秀彩 孙敬锋 YEONG Yiksung 石洪玥 李莉 孔祥会
为建立鱼源嗜水气单胞菌全菌蛋白图谱并进行质谱分析，利用双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术对嗜水气单胞菌的蛋白质组学进行鉴定研究。结果显示，嗜水气单胞菌２８°Ｃ培养１２ ｈ、三氯醋酸（ＴＣＡ）／丙酮沉淀法提取全菌蛋白、等电聚焦２０ ０００ Ｖｈ的２－ＤＥ图谱匹配率达８１％；采用１８ ＣＭ、ｐ ｈ ３－１０ ＩｐＧ胶条进行２－ＤＥ分析获得１４６个蛋白点，随机选取部分蛋白点进行肽质量指纹图谱（ｐＭＦ）分析，共鉴定２３个蛋白点包括膜脂蛋白、分子伴侣、３０Ｓ核糖体蛋白Ｓ１、延伸因子、细胞色素Ｃ等，其中发现烯醇化酶、甘油醛－３－磷酸脱氢酶、二氢．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
代龙军 项秋兰 黎瑜 聂智毅 康桂娟 段翠芳 曾日中
【目的】分析巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Müll.Arg.)橡胶粒子的蛋白质构成,探索未知的橡胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE双向电泳分离橡胶粒子蛋白质,采用MALDI/TOF-TOF质谱技术进行蛋白质鉴定;此外,利用磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序,获得未知蛋白质肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST数据库,获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序列,或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳图谱,鉴定了17个橡胶粒子蛋白质;...
[期刊] 水产学报
[作者]
胡秀彩 沈晓静 吕爱军 孙敬锋 YEONG Yiksung 宋亚娇 李莉 孔祥会
为了建立鱼类皮肤蛋白质组双向电泳图谱及质谱鉴定，以鲫为实验动物，采用蛋白双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术，进行鲫皮肤的蛋白质组学研究。结果表明，当上样量为８００μｇ，采用１８ ｃＭ、ｐ Ｈ３～１０ Ｉｐｇ胶条，等电聚焦８０ ０００ ＶＨ，２－ＤＥ图谱检测为２１４个皮肤蛋白点，匹配率达８８％；对其中３１个蛋白点进行ＭＳ／ＭＳ鉴定为２２种蛋白，包括肌球蛋白、肌动蛋白、角蛋白、锌指蛋白５８５Ｂ、效应蛋白ＲＡＢ１５、卷曲螺旋结构域蛋白１６８、ＮｃＫ１相关蛋白，肌酸激酶、烯醇化酶、丙酮酸脱氢酶、腺苷酸激酶同工酶等；进行蛋白功能聚类（ｇＯ）分．．．
关键词：
鲫 皮肤 蛋白质组 双向电泳 质谱
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高梅 张国权 魏益民 张继澍 党娇 王秋娟
为了进一步对小麦醇溶蛋白A-PAGE电泳的鉴定方法进行标准化,比较了凝胶浓度、缓冲体系及其pH值对电泳分辨率的影响,并初步筛选出了适合作为醇溶蛋白电泳标准样品的国内小麦品种。结果表明,丙烯酰胺和N,N-甲叉双丙烯酰胺2个单体的交联百分浓度(C)为4.0%,总百分浓度(T)为6%,缓冲体系为甲酸-甘氨酸(pH3.0)混合体系的A-PAGE电泳效果较好;通过国内40个小麦品种与加拿大硬红春麦Marquis的R24、R50、R79标准条带相比较,确定荔丰3号可以作为国内小麦醇溶蛋白电泳的标准样品。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
庞欢瑛 李岩 鲁义善 简纪常 吴灶和
本研究采用蛋白质组学技术,建立了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)ZJ03培养至稳定期的蛋白质组双向电泳图谱,并对部分蛋白分子进行了肽质量指纹图谱分析鉴定。首先将溶藻弧菌接种于TSB培养基28℃培养24 h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,荧光染料标记,24 cm pH4 ～ 7的胶条进行等电聚焦,再用12.5%的胶进行SDS-PAGE。2-D胶经过分析,得到902±8个蛋白斑点,重复胶的匹配点数为866±28,匹配率为96%。从双向电泳图谱中选取68个高丰度蛋白质点进行肽质量指纹图谱鉴定,其中60个在NMPDR数据库中得到鉴定,另外8个在NCBI数据库中得到鉴定。鉴...
[期刊] 水产学报
[作者]
王宝杰 刘梅 蒋克勇 张国范 王雷
中国明对虾的血浆脱盐处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同pH范围IPG胶条、脱盐方式、上样量等进行了优化,并分别利用硝酸银和胶体考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析,采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对主要的高丰度蛋白点进行了质谱鉴定。结果显示,中国明对虾血浆在pH 4～7范围、18 cm的2-DE胶上得到了很好的分离,上样量为150μg左右,采用银染可以获得较好的分析胶图谱;而上样1 000μg左右,采用胶体考染方法能获得较好的制备胶图谱;通过MALDI-TOF/TOF MS鉴定的11个最主要的高丰度蛋白点都是血...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋健民 刘爱峰 程敦公 戴双 李豪圣 刘建军 赵振东
【目的】通过对籽粒淀粉积累和淀粉合成关键酶的活性进行比较,初步明确不同Wx蛋白组成小麦品种淀粉理化特性差异的酶学基础。【方法】以6类Wx蛋白组成的14个小麦品种为试材,测定其籽粒灌浆过程中直、支链淀粉积累动态和4种淀粉合成关键酶的活性变化,对测定结果进行统计分析。【结果】Wx蛋白数目和类型对4种淀粉合成关键酶活性和直、支链淀粉合成有明显影响。随着Wx蛋白数目的增多,4种淀粉合成关键酶活性呈现升高的趋势,尤其是淀粉粒束缚淀粉合成酶(GBSS),籽粒直链淀粉含量也相应升高。Wx-B1缺失蛋白对GBSS活性影响最大,直链淀粉合成能力下降最明显,其次是缺失Wx-D1蛋白,Wx-A1蛋白缺失作用最小。籽...
关键词：
小麦 Wx蛋白组成 淀粉合成酶
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
夏春胜 周性恒
本文利用现代分析手段,分析了褐刺蛾质型多角体病毒多角体蛋白组成与含量,发现其由16种氨基酸组成,富含谷氨酸和天冬氨酸,不含脯氨酸,碱性氨基酸与酸性氨基酸的比值为0.54。
关键词：
昆虫病毒 褐刺蛾 多角体 蛋白质
[期刊] 水产学报
[作者]
高娃 温虹 王浩 陆佳荃 吕利群 姜有声
为了鉴定CyHV-2的主要免疫原性蛋白，本研究用分离的CyHV-2-YC-1分离株感染异育银鲫尾鳍细胞系（GiCF），用蔗糖密度梯度超速离心法对细胞感染液中的CyHV-2进行纯化，纯化后的CyHV-2病毒免疫小鼠制备抗CyHV-2多克隆抗体。纯化的病毒颗粒经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色后，用抗CyHV-2多克隆抗体进行Western blotting分析和质谱鉴定。结果显示，透射电镜观察下发现50%～66%的蔗糖梯度多见完整囊膜包裹的CyHV-2病毒颗粒，也有少量囊膜破损的病毒颗粒。Western blotting结果显示，抗CyHV-2多克隆抗体与多种病毒蛋白具有特异性免疫反应，质谱鉴定显示，其中8种主要免疫原性蛋白分别是ORF92、ORF115、ORF25、ORF57、ORF66、ORF72、ORF131和ORF132。研究表明，通过蔗糖密度梯度超速离心法提纯CyHV-2病毒颗粒后，本研究制备的抗CyHV-2多克隆抗体能够特异性识别CyHV-2病毒的主要免疫原性蛋白。本研究将为CyHV-2免疫学检测方法的建立以及疫苗的研制提供更多的候选抗原。
关键词：
鲤疱疹病毒Ⅱ型 免疫原性 蛋白 质谱鉴定
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐湛宁 李福贵 陈杰 蒋霞云 邹曙明
为建立并优化草鱼鳃蛋白质组双向电泳的技术体系,实验将草鱼鳃经裂解处理后,通过固相p H梯度胶条进行一向等电聚焦和SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白分离,对不同的裂解液配方、蛋白纯化方法、IPG胶条的分离范围、上样量和染色方法等进行了探索和优化,并应用lmage Master 2D Platinum 7.0软件对电泳图谱进行了分析。结果表明:采用裂解液中添加DTT来取代Tris和TBP、选择分离范围为pH4-7的IPG胶条和150μg的主动水化上样,电泳结束后对凝胶进行硝酸银染色,获得了覆盖范围广、低背景
[期刊] 淡水渔业
[作者]
潘锋 胡玫 王和海
本文通过对奥利亚(Oreochromis aureus)、莫桑比克(Oreochromis mossambicus)和尼罗(Oreochromis niloticus)三种罗非鱼血清蛋白和心脏、眼睛、脑、骨骼肌和肝脏五种组织的乳酸脱氢酶(LDH),苹果酸脱氢酸(MDH)及酯酶(EST)三种同工酶电泳图谱的对比,比较了三种罗非鱼种和组织的特异性,找出了奥利亚罗非鱼的特异蛋白和特异酶带为种的鉴别及生化、遗传的研究提供了依据。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王显生 高文瑞 石庆华 张桦 张巨松 李建贵 何小玲 麻浩
以鹰嘴豆为材料,通过对样品制备、电泳条件的优化,建立其籽粒贮藏蛋白的双向电泳技术,并通过电泳图谱的分析,了解贮藏蛋白等电点和相对分子质量的分布情况.结果表明,经考马斯亮蓝染色获得贮藏蛋白斑点约380个,等电点范围在pH4.0～8.0,其中大部分集中在pH6.0～7.0;鹰嘴豆籽粒贮藏蛋白质的相对分子质量为11000～120000,表现出2个分布峰,一个在30000～40000,另一个在50000～60000;鹰嘴豆与大豆籽粒贮藏蛋白的分子质量和等电点分布基本相似.
关键词：
鹰嘴豆 贮藏蛋白 双向电泳
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