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[期刊] 中国水产科学
[作者]
李停 贾永义 刘士力 蒋文枰 李宁 杨润清 顾志敏
采用紫外线照射鲤鱼（Ｃｙｐｒｉｎｕｓ Ｃａｒｐｉｏ）精子使其遗传物质失活，并用冷休克方法抑制翘嘴鲌（Ｃｕｌｔｅｒ ａｌｂｕｒｎｕｓ）卵第二极体的排出，诱导出翘嘴鲌雌核发育二倍体。运用３因素５水平二次正交旋转组合设计方法，分别建立冷休克起始时间（ｘ＿１）、处理时间（ｘ＿２）和处理温度（ｘ＿３）３个因素与翘嘴鲌雌核发育率（ｙ＿１）和孵化率（ｙ＿２）两个指标之间的二次回归模型，探究翘嘴鲌减数分裂雌核发育的最优诱导条件组合。并采用响应面分析法（ｒｓＭ），讨论各因素水平的单因素效应、互作效应对响应值的影响。结果表明，受精后６ Ｍｉｎ进行冷休克，处理时间为１８ Ｍｉｎ，休克温度为７℃时，雌核发育率达最大（．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
操文杰 张静蓉 张庆飞 赵玉华 王卫民
为探究鳡和翘嘴鲌精子在诱导彭泽鲫雌核发育子代中的异精效应，实验分别以鳡和翘嘴鲌精子激活彭泽鲫卵的胚胎发育获得子二代（F_(2)）群体：P×G（彭泽鲫♀×鳡♂）和P×Q（彭泽鲫♀×翘嘴鲌♂），以P×P（彭泽鲫♀×彭泽鲫♂）F_(2)为对照，比较各群体的染色体核型、DNA含量、形态学特征以及生长等。结果显示，P×G、P×Q和P×P的核型分别为3n=150=45m+66sm+27st+12t、3n=150=54m+51sm+39st+6t和3n=150=51m+48sm+45st+6t，与父本鳡的核型（2n=48=10m+24sm+12st+2t）和翘嘴鲌的核型（2n=48=16m+26sm+6st）明显不同；P×G和P×Q的DNA含量与P×P比值在95%的置信区间内（均为0.97）；上述结果表明，P×G和P×Q的F_(2)群体均为雌核发育子代。基于形态学参数的主成分分析显示，P×G和P×Q与P×P散点分布区域基本无重叠；P×G和P×Q与P×P间能通过判别函数进行初步判别（准确率达97.8%），即存在显著的形态学差异；这表明P×Q和P×G子代存在异精效应。与P×P相比，P×G和P×Q的F_(2)群体各日龄的平均体质量、平均体长、增重率和增长率均表现出优势，且P×G优势显著。综上所述，鳡和翘嘴鲌精子均能诱导彭泽鲫卵的雌核发育，且不同的精子源诱导对雌核发育子代的影响不同，存在典型的“异精效应”。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨青 李琪 于瑞海 李吉清
利用紫外线诱导进行栉江珧(Atrina pectinata)雌核发育单倍体的研究,用强度为2 561μW/(cm2.s)的紫外线(254nm)照射不同时间的精子与正常卵子受精展开实验。结果发现随照射时间的增加,卵裂率、早期胚胎存活率和D型幼虫发生率总体呈下降趋势,遗传失活的精子与正常卵子受精后其胚胎发育至D型幼虫前期停止。经紫外线照射的精子受精后所产生的单倍体胚胎发育速度慢于正常受精所产生的二倍体胚胎,各照射组均出现非整倍体。40 s照射组中卵裂率达到51.2%,D型幼虫发生率为0,单倍体率最高,达到36.8%,出现“Hertwig效应”。由于雌核发育单倍体的有效诱导既需要精子遗传物质失活、又...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
余锐 梁旭方 张进 易提林 符云 叶卫
采用紫外线照射灭活精子,经冷休克诱导染色体加倍的方法对翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)进行人工诱导雌核发育育种。灭活翘嘴鳜精子,紫外线照射剂量80 mJ/cm2是最佳的辐射剂量。冷休克结果表明,在0～3℃冰水下,冷休克起始时间为授精后3～7 min均有效,以5 min为最适;冷休克持续时间10-50 min均有效,以30 min最佳。综合以上两项因素,授精5 min后,休克时间持续30 min组的原肠胚存活率和孵化率均为最高,与其他处理组差异显著(P<0.05),此时雌核发育率最高,达到4.72%。
[期刊] 水产学报
[作者]
孙远东 袁志栋 谭树华 范军豪 周工健
湘云金鳙的卵子经适宜UV剂量灭活处理的异源四倍体鲫鲤精子激活后,在4~6℃下冷休克11~13 min,抑制第二极体排出和第一次卵裂使染色体加倍,成功获得了极体雌核发育(mei G)和有丝分裂雌核发育(mit G)湘云金鳙二倍体个体。结果发现,用异源四倍体鲫鲤精子诱导获得mei G、mit G成活率可达到19.4%±2.3%和7.3%±1.9%。运用形态学测量、染色体计数和微卫星标记技术对雌核发育二倍体个体(mei G、mit G)进行了分析,其染色体数目为48;微卫星分析表明,雌核发育二倍体基因组完全来自于母本,没有受到父本染色体的污染,证实其为雌核发育二倍体。对雌核发育湘云金鳙性腺发育进行连...
关键词：
湘云金鳙 雌核发育 遗传育种 体色
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
董迎辉 杨爱国 刘志鸿 任建峰 周丽青 宫学红
2004年5~6月,用紫外线照射法使精子遗传物质失活,结合用6-二甲基氨基嘌呤(6-dime-thylaminopurine,6-DMAP)处理受精卵抑制第2极体释放,诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体。采用中心波长254nm、光照强度800μw/cm2·s的紫外线照射栉孔扇贝精子50s,然后立即与正常卵子授精,在20℃水温下,受精后35~40min光镜下观察到20%~30%卵子排出第1极体时,分别以40、50、60、70、80mg/L的6-DMAP持续处理受精卵10、15、20min,染色体计数法检测各处理组二倍体率,从而筛选诱导栉孔扇贝雌核发育二倍体两因素的最佳组合。结果表明,6-DMAP的浓度和...
关键词：
栉孔扇贝 人工诱导 雌核发育二倍体
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
赵晓勤 李家乐 汪桂玲
引入相对胚龄τ_0作为计时单位,通过系列试验确定热休克法抑制第一次卵裂的起始时间,以实现对金鱼(Carassius auratus)雌核发育诱导过程中的卵子染色体加倍操作进行优化的目的。研究结果表明,在固定热休克处理温度为38~39℃,热休克处理持续时间为2min的前提下,20℃、22℃和25℃三种不同预处理水温组的孵化率与正常仔鱼数量曲线都形成一个单一的峰,且均在3.4τ_0时达到最佳优化点,对应胚胎发育阶段为第一次卵裂中期。结果提示了以τ_0单位度量热休克处理时机的准确性以及该优化方法在鲤科鱼类雌核诱导操作中的通用性,从而为相关鱼类的雌核发育操作提供了有价值的资料。
[期刊] 水产学报
[作者]
杨育凯 谢仰杰 蔡明夷 简林江 陈庆凯 楼宝 王志勇
为建立黄姑鱼雌核发育诱导方法,实验利用紫外线照射使黄姑鱼精子遗传失活,与卵子授精后再通过冷休克抑制极体排放进行倍性恢复,成功诱导出黄姑鱼雌核发育二倍体。精子经强度为3 800μW/(cm2.s)的紫外线照射10～100 s,受精卵孵化率呈现明显的Hertwig效应;当照射时长达到60 s以上,各实验组全部孵出仔鱼均呈现单倍体综合症。精子的紫外线照射时间、受精卵冷休克起始和持续时间等三因素三水平正交实验结果表明,精子经紫外线照射60 s,受精2 min后卵子在3～4℃海水中持续冷休克10 min为最佳诱导条件组合,可以获得最高的孵化率(16%)。最佳组合仔鱼形态和细胞相对DNA含量与正常二倍体一...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘月亮 贾永义 蒋文枰 刘士力 迟美丽 顾志敏
在成功获得翘嘴鲌减数分裂型雌核发育鱼的基础上,观察比较了雌核发育胚胎与单倍体胚胎和普通胚胎的发育特征及时序差异,探讨了冷休克处理对胚胎发育的影响及完善雌核发育胚胎孵化管理的措施,并对雌核发育翘嘴鲌成鱼进行了形态学特征分析。结果表明:(1)与普通胚胎相比,雌核发育胚胎受精率较低且仔鱼畸形率较高,单倍体孵化率极低。(2)雌核发育组胚胎出现不规则细胞分裂、卵膜破裂、卵黄囊凝集及单倍体综合征等现象,其中原肠期和出膜前期为胚胎死亡高峰期。(3)雌核发育二倍体与普通胚胎的发育特征相似,卵裂至原肠期阶段发育特别缓慢,原
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
支宇 刘其根 吴嘉敏 刘东
为了开发浙江青田稻田田鱼优良种质资源，采用紫外线灭活精子、染色体加倍等雌核发育技术，成功获得青田田鱼雌核发育子一代(G_1)。对照普通子一代(F_1),测量和观察160日龄G_1的形态特征和性腺发育情况；在全基因组水平上，利用SNP技术，鉴定和分析G_1遗传物质。结果发现G_1有3种体色，个体间生长差异大，黑色生长最快，平均体质量达392.45 g。G_1平均生长速度慢于F_1。G_1形态参数与F_1存在差异，全长与体高之比差异极显著。G_1个体之间卵巢发育不一致，大个体的卵巢发育类似于F_1,主要为Ⅲ时相的初级卵母细胞。SNP检测发现，通过1次雌核发育技术的种质改良，田鱼遗传物质的纯合性由母本平均38.42%提高到G_1平均61.85%,并有父本遗传物质渗入G_1个体，致使个体在体色和生长速度方面均表现出显著的差异性。本研究成功得到了青田田鱼人工雌核发育群体，为今后青田田鱼育种和种质资源开发奠定了良好基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
陈菲 沈铭辉 柯才焕 蔡明夷 游伟伟
应用组织切片方法,比较观察了杂色鲍普通二倍体、人工诱导三倍体、人工诱导雌核发育单倍体和雌核发育二倍体在成熟分裂和第一次卵裂期间的细胞学变化,以探讨人工诱导杂色鲍雌核发育的细胞学机制。结果表明,精子经紫外线辐射进行遗传失活处理后,仍然能够进入卵子,并激动卵子发育,卵子能够正常完成两次减数分裂,与普通受精卵没有明显差别。精子入卵后形成精核,大多能够逐渐解凝、液化并膨大,最终形成形态正常的雄性原核,但在第一次卵裂早期退化成浓缩的染色质小体(DCB),并在胞质分裂时随机地分配到其中一个子细胞里的分裂沟附近。在人工诱导三倍体和雌核发育二倍体受精卵中,受精卵经细胞松弛素B处理后,染色单体在第二次成熟分裂期...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
支宇 刘其根 吴嘉敏 刘东
为了开发浙江青田稻田田鱼优良种质资源，本研究采用紫外线灭活精子、染色体加倍等雌核发育技术，成功获得青田田鱼雌核发育子一代（G_(1)）。对照普通子一代（F_(1)），测量和观察了160日龄G_(1)的形态特征和性腺发育情况；在全基因组水平上，利用SNP技术，鉴定和分析了G_(1)遗传物质。结果发现G_(1)有3种体色，个体间生长差异大，黑色生长最快，平均体质量达392.45 g。G_(1)平均生长速度慢于F_(1)。G_(1)形态参数与F_(1)存在差异，全长与体高之比差异极显著。G_(1)个体之间卵巢发育不一致，大个体的卵巢发育类似于F_(1)，主要为Ⅲ时相的初级卵母细胞。SNP检测发现，通过1次雌核发育技术的种质改良，田鱼遗传物质的纯合性由母本平均38.42%提高到G_(1)平均61.85%，并有父本遗传物质渗入G_(1)个体，致使个体在体色和生长速度方面均表现出显著的差异性。本研究成功得到了青田田鱼人工雌核发育群体，为今后青田田鱼育种和种质资源开发奠定了良好基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柳学周 宁鑫 徐永江 赵明 李春广 李军
采用紫外线(UV)灭活的冷冻真鲷(Pagrosomus major)精子激发漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)卵子发育。冷冻真鲷精子适宜的UV灭活剂量为72 mJ/cm2,随着处理时间延长,胚胎的孵化率呈现哈特维希效应,其中40 s灭活组胚胎孵化率达到最高[(29±1.9)%],单倍体率100%。利用冷休克法抑制卵子第二极体排出,成功获得雌核发育二倍体仔鱼。冷休克处理温度为0~2℃,处理起始时间3 min、持续时间45 min时,雌核发育二倍体胚胎的孵化率最高,达(9.4±0.71)%,获得批量雌核发育仔鱼。雌核发育仔鱼经流式细胞仪和染色体倍性鉴定,均为二倍体(2n=...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
苏鹏志 陈松林 杨景峰 田永胜 翟介明 孙礼娟
采用冷冻保存的鲈(Lateolabrax japonicus)精液不经紫外线照射直接与大菱鲆(Scophthalmus maximus)卵进行杂交,可以刺激大菱鲆卵进行胚胎发育,胚胎发育率(发育至原肠期后胚胎成形的卵占总卵数的百分比)可达79.1%。通过与精子照射组单倍体发育过程等对比观察发现,杂交后代为大菱鲆的单倍体。如果在"受精"后2~10min内将大菱鲆卵在0~6℃冷休克处理10~50min,均能诱导卵子染色体加倍。对冷休克处理条件的筛选结果表明,在0℃条件下,卵子在受到鲈鱼精子刺激后6min开始进行冷休克处理25min,二倍体孵化率(雌核二倍体苗占受精卵的百分比)最高,可达34.8%。...
关键词：
大菱鲆 鲈 精子 雌核发育 冷休克
[期刊] 水产学报
[作者]
杨景峰 陈松林 苏鹏志 邵长伟 田永胜 廖小林 翟介明 李波
用冷冻保存的花鲈精子作为异源精子,采用紫外线(UV)对精子进行照射使其遗传物质失活,然后与卵子进行授精,可以刺激条斑星鲽鱼卵进行雌核发育,在受精后一定时间采用冷休克处理"受精"卵,抑制第二极体排出成功获得了条斑星鲽雌核发育二倍体鱼苗。实验表明,花鲈精子只有经过紫外线照射遗传失活后,才能诱导产生条斑星鲽雌核发育二倍体鱼苗。经过大量实验筛选出诱导条斑星鲽雌核发育的最佳条件为花鲈冷冻精子采用80 M J/cm2的紫外线照射,然后与条斑星鲽卵子进行授精,在受精后7~9 m in,将受精卵放在-1.0~1.5℃海水中进行冷休克处理,持续时间为60~90 m in,在此条件下,获得的雌核发育二倍体的相对诱...
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