利用二倍体(D)、四倍体(T)泥鳅与大鳞副泥鳅(P)间的自交与杂交,获得9种细胞型子代,分别为(♀×♂):D×D、D×T、D×P、T×D、T×T、T×P、P×D、P×T和P×P。采用流式细胞计数法和染色体制片技术分别对其进行了DNA相对含量测定和染色体组型分析。DNA相对含量结果显示:D×D、D×P、P×D和P×P属于二倍体;D×T、T×D、P×T和T×P属于三倍体;T×T属于四倍体,且3种类型DNA含量比值接近2∶3∶4。D×D的染色体数2n=50,核型为8m+6sm+36t,臂数NF=64;T×T染色体数为4n=100,抗型16m+12sm+72t,NF=128;P×P为2n=48,12m...

二倍体泥鳅与大鳞副泥鳅杂交能够顺利获得杂交后代，其正反交核型都为（2n=49），但杂交后代精巢表现出明显的发育迟缓现象，杂交泥鳅自交与回交实验表明，其雄性不可育。为了初步探究二倍体泥鳅和大鳞副泥鳅杂交F1代雄性不育的原因，实验通过计算机辅助精子活力分析系统（CASA）、光学显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞技术对二倍体泥鳅（DD）、大鳞副泥鳅（PP）、其正反杂交F1代（DP）和（PD）四种泥鳅精子的形态结构与活力进行了分析。结果显示，激活30 s时，DD和PP的精子运动率分别为76.50% ± 0.70%和75.17% ± 8.60%，极显著高于DP（3.65% ± 1.75%）和PD（2.68% ± 0.63%）（P < 0.01），且杂交泥鳅的VAP、VCL、VSL等运动参数也极显著低于DD和PP（P < 0.01），说明杂交泥鳅精子的活力及其低下。应用流式细胞技术对四种泥鳅精巢内细胞进行倍性鉴定，发现DD和PP精巢内大多为1N精子，而DP和PD精巢内除了正常单倍体精子外，还有大量的2N和4N以及少量的8N细胞。通过扫描电镜和透射电镜发现，DD与PP精巢内精子细胞致密，细胞结构完整，大小均匀，其全长分别为（33.71 ± 2.12）和（34.28 ± 1.83）μm。而DP和PD精巢内的精子其头长显著高于DD和PP的精子 ，其尾长、中片长和全长皆显著低于DD和PP的精子。研究表明，杂交泥鳅的的精子与正常精子相比，在精子形态和内部DNA含量方面表现出明显多态性。这可能是是造成杂交泥鳅雄性不育的原因。杂交泥鳅中出现了大量的异常精子，如多尾精子、双核精子以及大头精子，根据测量，其头部大小表现也出明显的多态性，根据头部体积大小测量估算其倍性，其中有正常的精子即单倍体精子，同时有二倍体精子、四倍体精子、八倍体精子甚至更高倍性的精子。这些杂交泥鳅的异常精子为其精子活力低下以及雄性不育提供了重要证据。

以二倍体和四倍体泥鳅为研究对象,采用甲基化修饰依赖性内切酶测序技术(MethylRAD-Seq)在全基因组水平上分析泥鳅的DNA甲基化特点及倍性间的DNA甲基化变异。测序结果共得到302 111 684条Methyl-RAD序列标签。与参考基因组比对结果显示,泥鳅的甲基化位点主要分布在基因体区(gene body),其次为内含子区(intron)和基因间区(intergenic),而在其他功能元件上的分布较少。四倍体泥鳅的整体甲基化水平比二倍体高,尤其是在第一外显子区(1st Exon)和转录起始位点上游1 500bp至200bp区(TSS1500),且倍性间差异极显著(P

采用SRAP标记和线粒体DNA控制区测序方法对武汉和洞庭湖2个二倍体和四倍体泥鳅同域分布区4个泥鳅群体的遗传结构进行研究。SRAP分析结果表明,18对多态性引物组合在4个泥鳅群体中共检测到534个位点,每对引物组合检测的位点数为23～40个;各群体的Nei's基因多样性(h)和Shannon's信息指数(I)平均值分别为0.205～0.218和0.324～0.341,4个群体间的h以及I差异不明显;基于Nei's无偏遗传距离构建的UPGMA树显示,洞庭湖二倍体和四倍体泥鳅群体亲缘关系最近,先聚为一支,再与武汉四倍体泥鳅聚为一支,而武汉二倍体泥鳅聚为单独一支。测定了4个泥鳅群体40个个体线粒体D...

为筛选在泥鳅中稳定表达的内参基因,以确保泥鳅基因表达分析结果的可靠性,选取ACTB、TUBA、EF1A、GAPDH、TUBB和18SrRNA 6个常用的内参基因作为候选内参基因,分别用BestKeeper、geNorm、NormFinder、ΔCt和RefFinfer软件分析这6个基因在二倍体和四倍体泥鳅胚胎发育阶段、成鱼组织间以及倍性间表达的稳定性。结果显示,在胚胎发育各阶段,TUBB和TUBA的表达最稳定,可作为胚胎发育阶段qRT-PCR分析的内参基因;其中,TUBB在泥鳅倍性间的表达差异不显著,因此,可作为泥鳅胚胎发育中跨倍性qRT-PCR研究的内参基因。在成鱼各组织中,ACTB和18SrRNA的表达最稳定,可用作组织间qRTPCR分析的内参基因;其中,18SrRNA在倍性间的组织表达差异不显著,因此,可作为泥鳅组织间跨倍性qRTPCR的内参基因。

试验以泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus,Ma)为研究对象,采用PCR技术克隆获得trim63a基因(tripartite motif containing 63,又名肌肉环状指基因1)的cDNA部分序列,生物信息学分析结果显示,Matrim63a基因cDNA的编码序列(coding sequence,CDs)为1 035bp,编码344个氨基酸,与硬骨鱼类相似度较高。采用荧光定量PCR技术检测人工繁殖获得的二倍体(D×D)和四倍体(T×T)胚胎不同发育时期Matrim63a的表达量以及泥鳅二倍体(D)和四倍体(T)成鱼不同组织中Ma-trim63a的表达量,基因表达分析结果显示,Ma-trim63a在泥鳅二倍体和四倍体成鱼肌肉中的相对表达量最高,其次是心脏;Ma-trim63a在泥鳅二倍体和四倍体胚胎的13个发育时期均有表达,但是不同倍性的胚胎表达差异较大。

为探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)基因在二倍体和四倍体泥鳅之间的表达差异及其与DNA甲基化的相关性,克隆二倍体、四倍体泥鳅的CDS序列和启动子序列,并分别采用qRT-PCR和亚硫酸氢盐测序技术(BSP)分析IGFBP-1在二倍体、四倍体泥鳅中的表达水平及启动子区和第一外显子区的甲基化水平。结果显示,泥鳅的IGFBP-1基因CDS序列长789bp,编码262个氨基酸,二倍体、四倍体泥鳅间有5bp的差异,但氨基酸序列完全相同。在二倍体、四倍体中分别克隆得到2 341bp和2 331bp的启动子序列,倍性间的序列相似度达99%,启动子序列中包含典型元件TATA-box,以及SP1、CREB、C/EBP、POU2F2、GATA-2/3/4和SRY等转录因子结合位点。泥鳅的IGFBP-1基因主要在肝脏中表达,且四倍体泥鳅肝脏中IGFBP-1的表达水平显著高于二倍体(P<0.01)。四倍体泥鳅IGFBP-1基因启动子及第一外显子区的甲基化水平均比二倍体低,其中四倍体肝脏中的甲基化水平显著低于二倍体(P<0.01)。综合分析研究结果表明,在IGFBP-1基因主要表达的肝脏组织中,其mRNA表达水平与DNA甲基化水平呈负相关,启动子区较高的甲基化可能抑制了二倍体泥鳅IGFBP-1基因的表达。

对杂交三倍体泥鳅(4n♀×2n♂)的胚胎染色体进行了C带及染色体荧光原位杂交(FISH)分析,首次探讨了杂交三倍体泥鳅C带特征,为准确鉴别染色体提供依据,研究了核糖体5.8S+28S r DNA在杂交三倍体泥鳅胚胎中期染色体上的数目和位置。C带结果表明,杂交三倍体泥鳅的染色体C带包括臂端C带和着丝粒C带,没有发现臂间C带。M染色体只有1号染色体既有臂端C带又有着丝粒C带,但臂端C带均比着丝粒C带大,信号也比着丝粒的强;而其他M染色体及SM染色体、T染色体只有着丝粒C带。FISH分析显示,核糖体5.8S+2

为了寻求一种简便且实用的鱼类染色体倍性检测方法,本研究对二倍体与四倍体泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)的18个可量性状和5个鳍式进行了比较分析。结果发现,2种核型的泥鳅的可量性状比例存在诸多差异(如体长/头长、体长/吻长、体长/尾柄高、头长/体高、头长/吻长、头长/尾柄高、眼后头长/吻长、尾柄长/尾柄高等)。判别函数分析结果表明,利用所有具有极显著性差异的比例变量的最高区分准确率为93.4%,而仅利用头长/尾柄高和头长/吻长的比例组合区分的准确度为91.3%。因此,头长/尾柄高和头长/吻长的比例差异可作为区分二倍体和四倍体泥鳅的主要形态标记。

为探明三倍体和二倍体泥鳅的组织细胞学差异,运用血液涂片及组织切片方法,对三倍体、二倍体泥鳅的红细胞及其细胞核的长轴和短轴,血液中血细胞的组成及仔鱼眼部构造等进行了比较。结果表明,三倍体泥鳅红细胞及其核的长轴均比二倍体的要大,其中前者红细胞核的长轴约为后者的1.12倍,红细胞体积、核体积分别约为后者的1.62和1.44倍。三倍体泥鳅红细胞的相对数量明显少于二倍体泥鳅,而嗜中性细胞、单核细胞及淋巴细胞则多于后者。此外,三倍体泥鳅眼部色素层细胞数量少于二倍体。

采用形态学测定与统计分析相结合的方法,观察和测定泥鳅♀×大鳞副泥鳅♂(D×P)和大鳞副泥鳅♀×泥鳅♂(P×D)及其亲本的形态差异、可数性状及可量性状,研究泥鳅和大鳞副泥鳅杂交子代及其亲本的形态差异。结果显示,正反交子代(D×P和P×D)外观相似,同时具有双亲的一些特征,如尾柄处皮褶发达,与大鳞副泥鳅相似,而身体上的花纹与泥鳅更相似,大多为圆形斑点,兼有少部分条纹。在体型方面,2种杂交子代体型介于泥鳅和大鳞副泥鳅之间,较大鳞副泥鳅更圆。聚类分析和主成分分析显示,2种杂交泥鳅形态相近,均与大鳞副泥鳅更相似。判别分析综合准确率达到94.1%,可以有效鉴别这2种泥鳅和它们的杂交种。泥鳅和大鳞副泥鳅正反交均可获得存活子代,且孵化率、畸形率和早期存活率与自交组没有显著性差异(P>0.05)。

用从 10 0种随机引物中筛选出的 4种引物对自然群体中的泥鳅、大鳞副泥鳅进行了RAPD分析。结果表明 :4种引物 (S2 9、S96、S97、S99)分析所得泥鳅种群内遗传纯度分别为 0 .544 9、0 .4 94 6、0 .592 6、0 .642 0 ,大鳞副泥鳅遗传纯度分别为 0 .4 4 49、0 .4 30 4、0 .5159、0 .542 4 ;两者间遗传距离依次为 0 .5385、0 .5714、0 .50 2 4、0 .52 66;泥鳅特征带 1.0kb、0 .6kb、0 .9kb、0 .2kb ,大鳞副泥鳅特征带 0 .7kb、0 .52kb、0 .65kb、0 .5kb...

为了解彭泽鲫(Carassius auratus var.pengsenensis)♀×兴国红鲤(Cyprinus carpio var.singuonensis)♂杂交四倍体子代的细胞遗传特性,本研究以彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代为研究对象,以彭泽鲫雌核发育子代为内参,采用流式细胞仪测量其DNA相对含量,并对彭泽鲫雌核发育子代与杂交四倍体子代进行红细胞形态、大小的比较,另取杂交四倍体子代肌肉、鳍条组织块进行细胞培养,制作染色体标本,对其进行染色体计数及核型分析。结果显示:杂交四倍体子代仍为四倍体,其红细胞长轴、表面积、体积、核长轴、核表面积、核体积均显著大于彭泽鲫雌核发育子代。从形态上看,杂交四倍体子代红细胞相较于彭泽鲫雌核发育子代更长,辅助证明杂交四倍体子代为四倍体。杂交四倍体子代染色体组由200+条染色体组成,核型公式为4n=42m+64sm+62st+32t, NF=368,多出的染色体为超数染色体,未发现有异型性染色体,杂交四倍体子代属于中位演化类群。综上表明,彭泽鲫♀×兴国红鲤♂杂交四倍体子代仍为四倍体。

以泥鳅属鱼类黑龙江泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓ Ｍｏｈｏｉｔｙ，ｈ）、北方泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓ ｂｉｐａｒｔｉｔｕｓ，ｎ）、泥鳅（Ｍｉｓｇｕｒｎｕｓ ａｎｇｕｉｌｌｉｃａｕｄａｒｕｓ，二倍体ｂ，四倍体ｔ）和副泥鳅属鱼类大鳞副泥鳅（ｐａｒａＭｉｓｇｕｒｎｕｓ ｄａｂｒｙａｎｕｓ，ｐ）为亲本，进行自交与正反交，获得１１种子代，它们分别为（雌×雄）：ｈ×ｈ（ｈｈ）、ｎ×ｎ（ｎｎ）、ｐ×ｐ（ｐｐ）、ｂ×ｂ（ｂｂ）、ｐ×ｂ（ｐｂ）、ｎ×ｈ（ｎｈ）、ｎ×ｐ（ｎｐ）、ｐ×ｈ（ｐｈ）、ｂ×ｐ（ｂｐ）、ｔ×ｐ（ｔｐ）、ｐ×ｔ（ｐｔ）。经过２７０ｄ的养殖试验，在６０、９０、１２０、１５０和２７０ｄ这５个时间点测定．．．

【目的】基于白桦四倍体与二倍体杂交产生的子代（三倍体）测定分析结果，选出生长与材质性状兼优的杂交优势亲本及组合，为种子园的亲本选配提供理论依据。【方法】以白桦测交系交配设计获得的40个杂交组合10年生杂种试验林为研究对象，测定各杂交组合的生长、材性和保存率等性状，利用SPSS22.0、WinNCⅡ等软件对各性状进行方差、配合力及效应值分析，采用隶属函数法并结合主成分分析综合评价各性状，选择杂交优势亲本及组合。【结果】1）不同亲本杂交组合间的生长、材性和保存率等性状方差分析显示（除木材密度和保存率性状外），7个性状的组合间方差、配合力方差均达显著或极显著水平；7个性状的变异系数在6.34%～55.29%之间，广义遗传力和狭义遗传力分别在38.83%～73.72%和22.23%～68.48%之间，其中部分性状家系间变异较大、遗传能力较强。2）树高、胸径、材积、木质素含量和纤维长宽比5个性状的一般配合力（GCA）效应以及特殊配合力（SCA）效应差异均达显著或极显著水平。双亲的加性效应对胸径、材积等生长性状以及纤维素、半纤维素、纤维长宽比等材质性状具有明显影响，母本的加性效应远大于父本，且占主导地位，各性状中母本的方差分量在43.11%～94.15%之间，父本在0～4.86%之间。由特殊配合力效应分析发现，SCA仅对木质素含量和树高的控制较强，分别为52.03%和44.55%。3）根据亲本及杂交组合间各性状配合力效应值，采用隶属函数并结合主成分分析对各亲本及组合进行综合评价发现，父本F4、F7和F10为优异父本，Q19和Q103为生长或木材纤维性状的优异母本，其中Q103的材积遗传增益达8.60%。选择Q33×F1、Q103×F10、Q13×F12和Q19×F11为生长或纤维性状的优异杂交组合，其中Q33×F1和Q103×F10组合的材积遗传增益分别为16.33%和15.62%。【结论】白桦母本加性效应为本研究性状表现的主要贡献者；依据白桦三倍体家系生长、材性的各配合力效应值，最终选出优异父本3个（F4、F7和F10）、母本2个（Q19和Q103），优良杂交组合4个（Q33×F1、Q103×F10、Q13×F12和Q19×F11）。