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[期刊] 华北农学报
[作者]
张剑峰 张鹤龄 于嘉林 迟胜起 贺秀芳 郝文胜 杨静华
根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的二价核酶序列。将该核酶基因克隆到pGEM-4Z中,构建成体外转录载体pGEM-4ZDR;同时将包含核酶切割识别位点的PLRV-Ch复制酶基因cDNA近5'端的874 bp片段反向插入到pGEM-4Z中,构建了体外转录载体pGEM-4ZR5。以线性化的重组质粒pGEM-4ZDR和pGEM-4ZR5为模板,在T7 RNA聚合酶的作用下,分别转录获得核酶RNA和PLRV-Ch复制酶基因5'端负链RNA底物片段。将以上2种RNA...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王菊萍 王莹 霍艳英 郭蔼光 徐勤枝 张开泰
为了探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7mRNA表达的阻断作用,采用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs),用脂质体介导瞬时转染BERP35T 2肺癌细胞系,并采用Northernblot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。结果表明,根据Smad7编码区序列在体外成功地制备了针对2个不同靶序列的siRNAs;Northernblot杂交显示,在转染siRNA的BERP35T 2细胞中,不管是内源性的还是外源性的,Smad7mRNA的表达丰度均明显下降。说明Smad7基因编码区中542563bp及701722bp2个区域均是siRNA作用的有效靶序列,本研究设...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
唐冬生 严霞 李芳 张细权 蒋泓 于辉 高东 李月琴 周天鸿
以鳜鱼(Sinipercachuatsi)为研究对象,以其重复的rRNA基因间的间隔序列为靶位点构建多位点基因打靶载体,为建立体内多位点基因打靶技术获得关键材料。先构建含TK和Neo基因的通用打靶载体pCTKNeo。采用LATaq高保真酶扩增获得左、右同源重组引导臂HRDS1、HRDS2,经T质粒克隆后,分别插入到pCTKNeo载体Neo基因的上下游,构建成鳜鱼专用的多位点打靶载体pCTKNeoHRDS1/2。同样将干扰素基因hIFN插入到pCTKNeoHRDS1/2载体的Neo基因与HDRS2之间。每次克隆均经PCR、酶切和测序等鉴定DNA片段的插入及插入方向,最终构建成多位点基因打靶载体p...
关键词：
基因打靶 多基因座 载体 重复序列 鳜鱼
[期刊] 统计与决策
[作者]
肖六亿 宋宁宁
文章从一维时间序列切割分析拓展至多维时间序列,在不压缩维度且保留完整数据信息的基础上,依据损失函数和分段误差两个判断准则,从众多切割点中选取多维时间序列最优切割点,进而讨论随时间连续变化的经济指标演变和发展的过程,亦可衡量政策的实施效果,预测指标未来走势。
关键词：
多维时间序列 最优切割法
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭志华 孙毅 张效梅 张健 白云凤
根据Genbank已报道马铃薯卷叶病毒(PLRV)基因组序列,分析其基因间隔区(IS)两端的保守区,自行设计、合成一对特异性引物,以PLRV内蒙古分离物总RNA为模板,经RT-PCR扩增得到含PLRVIS的一段369 bp的cDNA,克隆于载体pBS-T中。重组质粒经PCR鉴定、酶切分析和核苷酸序列测定,并进一步与PLRV其他分离物的同源序列作比对。结果表明:克隆的PLRV内蒙古分离物的IS序列与其他全部已发表的13个全基因组中的IS核苷酸序列有很高的同源性,最高达到100%,平均为97.90%,高于这13个PLRV全基因组序列96.81%的同源性,说明IS序列不仅在PLRV的不同株系间比较保...
[期刊] 林业科学
[作者]
卢孟柱
本研究利用ＰＣＲ和ＰＣＲ产物直接序列分析技术，获得了分属于松属（Ｐｉｎｕｓ）两个亚属Ｐｉｎｕｓ和Ｓｔｒｏｂｕｓ１２个松树种ｃｏｘＩ、ａｔｐ６和ｏｒｆ２５三个线粒体基因ＤＮＡ片段的序列。发现ｃｏｘＩ基因的ＤＮＡ序列在属内没有任何变异，但ａｔｐ６和ｏｒｆ２５在两个亚属间和亚属内出现了较多的碱基置换。这说明尽管裸子植物线粒体基因有较多的ＲＮＡ编辑（ＲＮＡｅｄｉｔｉｎｇ）存在，可促进ＤＮＡ序列的变异，但促进程度因不同基因而异。依据ａｔｐ６和ｏｒｆ２５所做的系统进化树不仅与分类结果一致，而且进一步表明了亚属内种间的亲缘关系。尽管线粒体基因序列变异比叶绿体和核ＤＮＡ变异小，线粒体基因编码序列变异仍适于研究...
关键词：
松树,线粒体基因,系统进化分析,序列变异
[期刊] 中国水产科学
[作者]
苏天凤 黄建华 吴进锋 江世贵
对来自粤东和粤西的方斑东风螺(Babylonia areolata(Link))和台湾东风螺(Babylonia formosae(Sowerby))的线粒体16S rRNA和COⅠ基因片段的序列进行分析,并对其遗传变异进行了比较研究。得到的序列总长度分别为506 bp(16S rRNA)和640 bp(COⅠ)。2种东风螺序列的碱基组成均显示较高的A+T比例(16S rRNA基因63.5%,COⅠ基因62.4%)。对位排序比较表明,16S rRNA基因片段变异较小,台湾东风螺和方斑东风螺各存在1个碱基变异位点;方斑东风螺COⅠ片段有12个碱基存在变异,包括3个简约信息位点和9个单一多态位点;...
[期刊] 华北农学报
[作者]
沈凤英 刘力强 吴伟刚 李亚宁 刘大群
nsdA(Negative regulator of Streptomyces differentiation)基因是天蓝色链霉菌中发现的与抗生素合成相关的负调控基因。根据天蓝色链霉菌A3(2)的序列设计引物扩增玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63菌株中的该基因,经测序和序列分析表明,由保守序列引物nsdA-2R和nsdA-2L克隆到的Men-myco-93-63菌株中的该基因800 bp片段与已知nsdA基因核苷酸保守区域序列同源性达到99%,由全长序列扩增引物nsdA WZ-R和nsdA WZ-L克隆到的该基因包含一个完整的开放阅读框,共编码369个氨基酸,与变铅青链霉菌和天蓝色链霉菌...
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯海燕 莫斯科 房永祥 景志忠
旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体(Tcell receptor,TCR)α链(AB087988)为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因(pTCR-α)。结果表明:克隆的TCR-α基因具有完整的ORF,全长819 bp,编码272个氨基酸,预测蛋白分子量为30 kDa,含18个强碱性氨基酸,23个强酸性氨基酸,87个疏水性氨基酸和103个极性氨基酸,含有一段20个氨基酸的信号肽序列;与GenBank上登载的TCR-α参考序列(AB087988)的同源性为94.6%,与其...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
云彦 郑喜邦 刘文强 窦忠英 雷安民
【目的】构建牛Nanog基因的真核表达载体pVenus-Nanog,筛选对其有效的干扰序列。【方法】以含有牛Nanog基因的PMD-18T-Nanog重组质粒为模板,经PCR扩增目的片段,将其克隆到真核表达载体pVenus上,酶切及测序鉴定正确后命名为pVenus-Nanog。将pVenus-Nanog用脂质体瞬时转染牛皮肤成纤维细胞,用荧光显微镜观察、RT-PCR和Western blotting分别检测Nanog的表达情况。针对牛Nanog基因的CDS区设计并合成3对干扰序列,分别命名为S1、S2、S3及阴性对照N.C.,用脂质体共转染pVenus-Nanog和siRNA于成纤维细胞,用半...
关键词：
牛 Nanog基因 真核表达 RNAi
[期刊] 中国农业科学
[作者]
付常振 昝林森 王虹 成功 王洪宝 李耀坤 姜碧杰 高建斌 杨宁
【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA,并构建表达载体pENTR-U6-shRNA。然后与载体psiCHECK-Ⅱ-SREBP1共转染293A细胞,筛选有效的pENTR-U6-shRNA。其次将筛选的pENTR-U6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST体外重组,得到腺病毒重组载体,并...
关键词：
牛 SREBP1 shRNA 重组腺病毒
[期刊] 数理统计与管理
[作者]
鲍家勇 赵月旭
时间序列数据的处理及挖掘一直是业界关注的热点,而海表温度也一直是人们观测、研究和预报的重要对象。本文主要考虑对一年的跨度进行切割,使得落在每个切割区间的海表温度数据满足最优的正态分布,以便对遥感数据的异常性作出检验。结合2003-2011年南海和东海海表温度数据集,本文引入Floyd算法,将寻求数据集最优分割问题转化为图论中网络中最短路求解问题,将不超过30天的点之间的距离设定为无穷大,以避免分割点过于密集的情况,并将频率与概率的距离定义的误差转化为线路权重,实现了动态全局最优分割。且正态分布下的3σ异常值检验法,实现了对异常值的识别。
[期刊] 财贸经济
[作者]
南飞
税收调整产业结构作用的发挥,从根本上说,依赖于以产业发展序列为导向,使税负在产业之间作非均衡、轻重有序的分布。只有税负水平轻重有序(指与产业发展序列相吻合),才能使税收的调节产生正效应,促使不合理的产业结构的转换、重构和优化:如果税负水平轻重无序,就会使税收的调节产生负效应,在一定程度上影响产业政策的贯彻,加剧产业结构的不均衡、不合理的状况。因此,要分析现行税制是否、或在多大程度上体现了国家产
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贾万忠 闫鸿斌 倪兴维 曹平 娄忠子 付宝权 史万贵
线虫(nematode)种类繁多,生活方式多样,一部分线虫可寄生于动物和植物体内,引起线虫病(nematodiasis),其中旋毛虫病、猪蛔虫病等是重要的人兽共患寄生虫病,在中国和世界各地普遍流行,危害严重。本文将对线虫线粒体基因组的研究进展、应用和今后发展方向做一简要综述。迄今,已完成46种线虫的线粒体基因组全序列测定和分析。线虫线粒体基因组的碱基组成、基因结构、基因变异等方面有其特点,这些分析结果为线形动物门线粒体功能基因组学研究、比较基因组学研究、分子分类学研究、虫种(株)鉴定与分类、分子系统发育和进化分析等提供了重要依据和指导作用,为线虫病诊断、分子流行病学调查等分子检测方法的建立提供...
关键词：
线虫 线粒体基因组 基因结构 分类
[期刊] 中国水产科学
[作者]
高天翔 吉崎悟朗 渡边精一
首次进行了中华绒螯蟹（ Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）线粒体 ＤＮＡ １２ＳｒＲＮＡ的序列分析。参考果蝇、蚤状溞序列对中华绒螯蟹线粒体ＤＮＡ １２ＳｒＲＮＡ基因片段做了引物设计、ＰＣＲ扩增及序列测定，结果得到 ４５７ ｂｐ的碱基序列，其Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ含量分别为 １５９ｂｐ（３４．７９％）、１７７ｂｐ（３８．７３％）、５１ｂｐ（１１．１６％）、７０ｂｐ（ １５． ３２％），与果蝇、蚤状溞的相同基因片段的序列含量基本相似。
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