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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
严梦涵 许丽惠 游泽龙 陆芍华 何晴 郑娱 许高琳 王全溪
利用生物信息学软件I-Mutant2.0分析植物乳酸菌素PlnJ的氨基酸序列，筛选出最不稳定的氨基酸位点，进行定点突变，构建点突变重组表达质粒。对点突变重组表达质粒进行原核表达，并筛选表达最适条件；采用镍亲和层析法纯化重组蛋白。以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌，探究100℃水浴加热0、5、15、30 min对重组PlnJ抑菌功能的影响。结果表明，PlnJ第3位氨基酸——赖氨酸(AAG)对其稳定性具有重大影响。以人工合成第5位氨基酸，即赖氨酸(AAG)突变为缬氨酸(GTG)的PlnJ核苷酸序列作为模板，成功构建重组表达质粒，PCR和酶切鉴定结果显示目的条带184 bp,测序后证明突变成功。重组蛋白诱导表达条件的优化结果表明：在37℃、12 h、0.8 mmol·L~(-1)IPTG的最优诱导条件下，特异目的蛋白表达显著(27.5 ku);咪唑洗脱液浓度280 mmol·L~(-1)是最优洗脱条件，可获得较为单一的目的蛋白。采用牛津杯抑菌试验法及麦氏比浊法比较突变前后的PlnJ蛋白的抑菌效果，结果表明，突变后的蛋白[PlnJ(G5)]与突变前的蛋白(PlnJ)100℃加热0、5、15、30 min,对大肠杆菌的抑菌效果均差异显著(P<0.05),而对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效果均差异极显著(P0.05)。综上，第5位氨基酸，即赖氨酸(AAG)突变为缬氨酸(GTG)后，PlnJ(G5)的热稳定性得到了提高，且不改变其抑菌效果。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘朔 姜梅 陈晓红 陈刚 董明盛
为了解纳豆激酶分子结构与其功能的关系,研究了纳豆菌诱变株DU115的纳豆激酶基因突变对其酶活性和热稳定性的影响。从原生质体紫外诱变纳豆菌DU115和野生纳豆菌BN10基因组DNA中扩增纳豆激酶成熟肽基因nkD和nkB,构建重组表达载体pPICZα-A-nkD和pPICZα-A-nkB,在毕赤酵母X-33中实现了表达,并对表达产物进行分离纯化、酶活性测定及热稳定性检测。结果表明,与nkB基因序列相比,nkD基因有两处的核苷酸发生了突变(A107G和C396T),A107G碱基突变导致氨基酸的替代D36G(Asp→Gly);诱变菌株纳豆激酶DNK与野生菌的BNK在65℃处理15 min后,前者的热...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴惠芬 毛胜勇 姚文 朱伟云
研究了分离自仔猪肠道的乳酸菌L5和L7对低pH值、胆盐的耐受性。结果表明,pH值在2.5、3.5 和4.5时,L5菌株处理1 50 min对其无显著影响,在pH 1.5时经30 min处理,L5仍可维持较高的存活率;L7菌株在pH 3.5和4.5条件下经150 min处理后可保持较高的存活率,而在pH 1.5和2.5条件下经处理30 min后菌株数量显著下降。胆盐对L5和L7菌株的生长有一定影响,但低浓度短时间内影响较小。在同一胆盐浓度下,随培养时间的增长,活菌数下降。当胆盐浓度高于0.2%时,L5和L7菌株的生长极差。热稳定性试验结果表明,L5菌株在50℃下可成活,且呈正常生长趋势,但其对8...
关键词：
乳酸菌 低pH值 胆盐 存活 仔猪肠道
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈立圳 王全溪 向思琳 高玉云 许丽惠 王长康
对乳酸菌素plnJ-K基因序列进行优化,利用基因串联表达技术构建重组串联表达载体pET-32a-pln-J-K,并将pET-32a-pln-J-K转化到大肠杆菌BL21中;对温度、时间、IPTG浓度等诱导条件进行优化,并与优化前的表达量进行对比.SDS-PAGE检测结果表明,在IPTG浓度为0.6 mmol·L~(-1),温度为37℃,时间为12 h的诱导条件下,目的蛋白的表达量最多.蛋白质印迹法鉴定结果表明,目的蛋白被正确表达.
关键词：
乳酸菌 乳酸菌素 重组串联表达
[期刊] 草业科学
[作者]
贾婷婷 吴哲 玉柱
为探讨不同类型乳酸菌添加剂对燕麦(Avena sativa)青贮品质和有氧稳定性的影响,分别将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnous)和布氏乳杆菌(L.buchneri)3种乳酸菌添加剂添加到燕麦青贮饲料中,发酵45d后测定发酵品质、营养成分和有氧稳定性。结果表明,添加3种乳酸菌制剂后,燕麦青贮饲料的pH值、丙酸(PA)和氨态氮(NH3-N)含量显著低于对照(P<0.05);布氏乳杆菌处理组的乙酸(AA)含量最高(P<0.05);植物乳杆菌处理组乳酸菌含量最高(P<0.05);对照和添加布氏乳杆菌处理的有氧稳定时间超过168h,随有氧暴露天数的增加,对照和布氏乳杆菌处理组pH变化平稳,酵母菌数量较低。3种乳酸菌添加剂均能明显改善燕麦青贮饲料的发酵品质,添加植物乳杆菌和布氏乳杆菌能保留较多的燕麦青贮饲料WSC含量,对照组和布氏乳杆菌处理组的有氧稳定性较优。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张旭 赵斌 张香美 李平兰
试验利用溶钙圈法及牛津杯双层平板法,从国内外优良发酵肉品中分离筛选产细菌素的乳酸菌,通过形态学、生理生化学鉴定,16SrDNA及种间特异性基因PCR扩增将菌株鉴定到种,并对其细菌素相关基因进行分析,初步确定细菌素种类。结果表明:在排除有机酸、过氧化氢等干扰因素后,从分离纯化到的92株乳酸菌中筛选到一株对指示菌仍有明显抑制作用的菌株L-ZS9,该菌株所产抑菌物质对蛋白酶(酸性蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶和中性蛋白酶)敏感,而α-淀粉酶对其活性基本无影响,因而确定L-ZS9为细菌素产生菌。经鉴定L-ZS9为类植物乳杆菌,进一步对菌株细菌素相关基因进行PCR扩增表明,L-ZS9含有Ⅱb类细菌...
关键词：
乳酸菌 筛选 细菌素 类植物乳杆菌
[期刊] 水产学报
[作者]
廖英杰 刘波 任鸣春 崔红红 谢骏 戈贤平
为探讨饲料中不同水平赖氨酸对团头鲂幼鱼生长、血清生化及血清中游离必需氨基酸的影响,选用初始均重(3.34±0.03)g的团头鲂幼鱼540尾,随机分成6个实验组,每个实验组3个重复,每个重复30尾鱼,分别投喂赖氨酸含量为1.29%、1.71%、2.09%、2.48%、2.88%、3.27%的饲料,养殖实验为10周。研究表明:(1)与对照组相比,2.48%赖氨酸实验组显著提高了团头鲂幼鱼的鱼体末重、增重率、特定增重率、氮沉积率、蛋白质效率和蛋白沉积率,显著降低了饵料系数,但不影响存活率;(2)2.09%赖氨酸实验组显著提高鱼体蛋白含量和降低脏体比系数,2.88%、3.27%赖氨酸实验组显著降低了粗...
关键词：
团头鲂 赖氨酸 需要量 生长
[期刊] 草业科学
[作者]
舒刚钦 王慧 张琛 张云华 张玲 程建波 范彩云 陈丽娟
乳酸菌是影响植物青贮效果的关键因素。为探究构树源不同乳酸菌对构树(Broussonetia papyrifera)青贮品质的影响，本试验首先从自然青贮构树叶中分离乳酸菌并鉴定，以上述构树源的乳酸菌青贮发酵构树叶为试验组，不添加乳酸菌青贮构树叶为对照组，避光青贮发酵60 d后进行检测分析，研究构树源不同乳酸菌对构树叶青贮品质的影响。结果表明：构树叶青贮料中共分离出清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides) 4株乳酸菌，前3株乳酸菌均为同型发酵乳酸菌，后一株为异型发酵乳酸菌，其中戊糖片球菌和粪肠球菌对构树单宁的耐受性显著优于其他两种菌(P <0.05)。与对照组相比，各试验组干物质含量、粗蛋白含量和可溶性碳水化合物含量均显著高于对照组(P <0.05)，戊糖片球菌和粪肠球菌组的粗蛋白含量显著高于类肠膜魏斯氏菌(P <0.05)。与对照组相比，各试验组pH和丙酸含量显著低于对照组(P <0.05)，乳酸含量显著高于对照组(P <0.05)，戊糖片球菌和粪肠球菌组的pH、乙酸、氨态氮含量显著低于其他试验组(P <0.05)，类肠膜魏斯氏菌组乳酸含量显著低于其他试验组(P <0.05)。综上表明，添加外源乳酸菌可改善构树叶青贮品质，不同乳酸菌对构树单宁耐受性影响其对构树叶青贮发酵品质。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陆小雪 解春艳 顾振新
从泡菜和酸奶中分离出产γ-氨基丁酸(GABA)乳酸菌10株,筛选得GABA高产菌株B、BY和SS。3个菌株在含10 g.L-1谷氨酸钠(MSG)的MRS培养基中培养6 d,发酵液中GABA含量分别达到3.680、3.341和2.700 g.L-1。通过16S rDNA基因鉴定和生理生化鉴定,确定菌株B和SS为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis);菌株BY为唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivariussub sp.therm ophilus)。
关键词：
γ-氨基丁酸 乳酸菌 分离 鉴定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
马旭光 刘晶晶 郑泽慧 袁旭峰 任济伟 王小芬 崔宗均
根据热电偶原理采用无纸记录仪测定温度,研究不同质量浓度乙酸和乳酸对玉米秸秆青贮料有氧稳定性及干物质的影响,并通过批次厌氧发酵工艺,分析不同质量比的乙酸和乳酸对提高青贮料甲烷产率的作用。结果表明:乙酸能有效提高青贮料的有氧稳定性,且随乙酸浓度的增加,青贮料有氧稳定性提高。相应地,乙酸添加量为10%和8%的处理干物质损失分别为1%和3%,而乙酸量添加为2%和没有添加乙酸的处理干物质损失分别为20%和25%,且干物质损失率(x)与甲烷产量减少率(y)呈线性正相关:y=0.705x+1.224(R2=0.986 2)。在仅以乙酸和乳酸为原料的厌氧发酵体系中,高浓度乙酸的甲烷产率显著高于高浓度乳酸(P<...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
于卓腾 毛胜勇 朱伟云
从肉鸡空肠黏膜上分离到6株菌,均为革兰氏阳性菌,其中3株乳杆菌(R2、R4、R6),3株肠球菌(R1、R3、R5)。生理生化鉴定表明,R2为嗜酸乳杆菌;R4为德氏乳杆菌乳亚种;R6为德氏乳杆菌德氏亚种;R1、R3和R5为粪肠球菌。产乳酸能力分析表明,培养至12h时R2产乳酸速度最快,到24h时R4产生乳酸浓度最高,为69.59mmol/L。在抑菌试验中,R2、R4对鸡大肠杆菌O1、鸡伤寒沙门氏菌O9和金黄色葡萄球菌的抑制作用显著高于其它菌株(P<0.05);药敏试验结果表明,R2和R4对治疗性抗菌素青霉素、四环素、卡那霉素、链霉素、万古霉素有较强的耐受性;对添加剂用抗菌素二硝托胺、硫酸多粘菌素...
关键词：
肠黏膜 乳酸菌 抗菌素
[期刊] 水产学报
[作者]
罗运仙 谢骏 吕利群 冷向军 李小勤 吴小凤 李忠铭
为考察饲料中补充晶体或微囊赖氨酸对草鱼生长性能的影响,配制了豆粕含量为23%(高豆粕组),15%(低豆粕组)的两种实用饲料,在低豆粕饲料中补充晶体赖氨酸或微囊赖氨酸,使赖氨酸达到与高豆粕组一致的水平,共4个处理组,即高豆粕组、低豆粕组、低豆粕+晶体赖氨酸(晶体赖氨酸组)、低豆粕+微囊赖氨酸(微囊赖氨酸组),每处理设3个平行。饲养平均体重为(49.0±2.0)g的草鱼8周。结果表明,各组鱼体增重率分别为279.3%、239.7%、245.6%、277.5%,饲料系数为1.62、1.88、1.85、1.62。与低豆粕组相比,添加晶体赖氨酸对草鱼生长无改善(P>0.05),而添加微囊赖氨酸则提高草鱼...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
董志岩 方桂友 刘景 叶鼎承 冯玉兰 吴德峰 杨烨
将90头平均体重为(32.0±1.5)kg的杜长大三元杂交猪随机分为5个组,1组为对照组(粗蛋白质含量为17.47%、可消化赖氨酸含量为0.80%),2-5组为试验组.试验组采用2×2因子设计,粗蛋白质含量分别为15.47%和13.47%,可消化赖氨酸含量分别为0.80%和0.85%,试验期50 d,研究日粮粗蛋白质和赖氨酸含量对生长猪生长性能及血液生化指标的影响.结果表明:与对照组相比,降低日粮粗蛋白质含量,赖氨酸含量不变,对猪的生产性能无显著影响(P>0.05);当日粮粗蛋白质含量为15.47%,可消化赖氨酸含量为0.80%或0.85%,血清尿素氮含量显著降低(P<0.05),必需氨基酸含...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯会贤 梅星星 蒋瑞瑞 郭克豹 孙向丽 康相涛 王彦彬
【目的】从健康鸡肠道中分离筛选优质乳酸菌，为制备禽用微生态制剂提供技术支持。【方法】选用３０日龄健康青年鸡，取其盲肠内容物，通过选择性培养基筛选出具有产酸能力的乳酸菌，对其进行耐ｐＨ ３．０胃酸和３ｇ／Ｌ牛胆盐筛选试验及菌株生长曲线、产酸能力测定，并通过平板抑菌试验筛选出具有较强抑菌效果的菌株。最后对此菌株１６ＳｒｒＮＡ进行克隆测序，经ＢＬＡＳｔ比对和系统进化树分析，对菌株进行鉴定。【结果】从所取鸡盲肠内容物中分离得到Ｌ１～Ｌ９ ９株乳酸菌，其中Ｌ２、Ｌ４和Ｌ９株耐ｐＨ ３．０和３ｇ／Ｌ牛胆盐的综合能力较强。经过比较３株菌的生长曲线和产酸曲线，发现Ｌ２菌株耐酸耐牛胆盐、生长迅速、产酸能力强，且．．．
关键词：
乳酸菌 16SrRNA 大肠杆菌 鸡
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