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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
石径 许倩 罗永康
通过测定６株不同乳酸杆菌菌种的产蛋白酶特性，筛选酶活力较高的菌株。利用乳酸杆菌粗提酶液３７℃下对脱脂乳进行酶解，并采用间接竞争酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定酶解脱脂乳中α－乳白蛋白（α－ＬＡ）、β－乳球蛋白（β－ＬＧ）、α－酪蛋白（α－ＣＮ）和β－酪蛋白（β－ＣＮ）４种乳蛋白的抗原性与过敏原性，从而探讨乳酸杆菌所产酶液对脱脂乳的酶解作用以及对乳蛋白抗原性及过敏原性的影响。结果表明：副干酪乳杆菌Ｈ９和植物乳杆菌Ｐ８菌株的蛋白酶活力较高，２株菌种所产酶液在对脱脂乳进行酶解的过程中，水解度逐渐增大，乳蛋白的抗原性及过敏原性在酶解过程中都缓慢降低，α－ＬＡ和β－ＬＧ抗原性在酶解后期略有上升，不同．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
许倩 李大鹏 黄和平 石径 罗永康
为评价浓缩乳蛋白(Milk protein concentrate)溶液经动态高压微射流(Dynamic high-pressure microfluidization,DHPM)及DHPM结合加热(65℃30min和95℃30min)处理过程中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、α-酪蛋白和β-酪蛋白抗原性的变化,采用间接竞争ELISA法测定不同压力条件下MPC中各蛋白抗原性的变化。结果表明:1)4种蛋白抗原性对DHPM及DHPM结合加热的反应各不相同。2)DHPM+65℃/95℃处理后,蛋白质α-乳白蛋白、α-酪蛋白和β-酪蛋白抗原性均明显低于DHPM处理样和水化对照样。因此,DHPM及DHPM结...
关键词：
动态高压微射流 加热 浓缩乳蛋白 抗原性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘倩 唐泰山 廉慧锋 王凯民 张常印 雷治海
从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(100倍)和抗原包被浓度(4.4μg.mL-1),该方法具有较好的特异性和敏感性。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
布冠好 郑喆 郑海 罗永康
检测牛乳中的主要过敏原β-乳球蛋白,利用β-乳球蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛β-乳球蛋白的多克隆抗体,以β-乳球蛋白包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗、四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了牛乳中β-乳球蛋白的间接竞争酶联免疫检测法(ELISA)。确定了包被抗原质量浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释度为1∶6 400,酶标二抗稀释度为1∶10 000。结果达到批内误差3.87%,批间误差6.51%;检测的线性范围为0.05~1.00μg/mL,标准曲线回归方程y=-1.930 2x-0.124 1,相关系数为0.994 5,说明所建立的方法灵敏度高,具有良好...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张明琦 高美须 支玉香 潘家荣 李淑荣 吕淑霞
【目的】研究辐照对蟹过敏蛋白生化性质和抗原性的影响。【方法】选择3、5、7、9kGyγ射线对蟹过敏蛋白进行辐照处理,利用紫外分光光度计测定辐照后蟹过敏蛋白溶液浓度和浊度变化;荧光光度计测定辐照后蟹过敏蛋白溶液疏水性变化;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定辐照后过敏蛋白分子量的变化;Western blot印迹和间接竞争ELISA法测定辐照后过敏蛋白抗原性变化。【结果】辐照使过敏蛋白溶液的浓度下降,浊度增加,疏水性提高,过敏蛋白条带消失,硝酸纤维素膜上无过敏条带产生,且随着辐照剂量的增加,辐照后过敏蛋白与抗体结合能力减弱。【结论】辐照使过敏蛋白的空间结构发生变化,抗原决定簇被掩盖或破坏,证明辐照技术...
关键词：
蟹过敏原 辐照 生化性质 抗原性
[期刊] 水产学报
[作者]
刘光明 史千玉 蔡秋凤 潘冰青 翁武银 苏文金 曹敏杰
以日本鳗鲡皮与肌肉组织为研究对象,采用碱溶、酸溶、盐析、冻干等方法纯化得到胶原蛋白,采用加热、饱和硫酸铵分级盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析等方法纯化得到两种亚型的小清蛋白(PV-Ⅰ和PV-Ⅱ),纯化的目标蛋白经动物特异性抗体的免疫印迹实验确证。酶联免疫吸附测定和免疫印迹分析结果显示,纯化的胶原蛋白和小清蛋白分别与鱼类过敏患者阳性血清发生特异性反应,且二者之间无免疫交叉反应。体外模拟胃液消化实验和SDS-PAGE分析结果显示,胶原蛋白和小清蛋白均具有较高的消化稳定性。结果提示,日本鳗胶原蛋白和小清蛋白具有较高的消化稳定性和免疫原性,二者可引发不同患者的IgE介导特异性超敏反应。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郝凤奇 李景梅 杨洲红
【目的】制备抗肠致病性大肠杆菌(EPEC)的重组嗜酸乳酸杆菌,并初步探索其免疫效果。【方法】采用DNAStar软件选取EPEC E2348/69的eae全基因中抗原性较高的984bp片段(编码328个氨基酸残基,命名为eae Int328)为目标序列,以EPEC E2348/69基因组为模板,PCR扩增eae Int328基因,构建重组表达载体pSIP409-eae Int328,电转化法获得相应的重组嗜酸乳酸杆菌,采用SppIP诱导重组菌表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白。以BALB/c雌性小鼠为受试动物,灌胃重组嗜酸乳酸杆菌15d后,再灌胃EPEC,第21天...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李铮 罗永康 冯力更 刘晓宇 张颖
将低聚异麦芽糖通过糖基化引入乳清蛋白制备乳清蛋白-低聚异麦芽糖,用间接竞争ELISA法测定不同乳清蛋白与低聚异麦芽糖质量比,不同反应时间生成的乳清蛋白-低聚异麦芽糖中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白抗原性的变化。结果表明:糖基化能有效降低乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的抗原性;不同反应时间、不同乳清蛋白与低聚异麦芽糖质量比对乳清蛋白中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白抗原性的影响不同,乳清蛋白与低聚异麦芽糖的质量比为1∶4,反应24 h时效果最好,α-乳白蛋白的抗原性从25.67μg/mL降低到9.33μg/mL,β-乳球蛋白的抗原性从97.82μg/mL降低到28.25μg/mL。
关键词：
乳清蛋白 低聚异麦芽糖 糖基化 抗原性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
熊清权 李志成 童伟 郑晓莹 苏晋文 葛武鹏 任娇
【目的】分离纯化牛乳酪蛋白酶解物,检测酶解物及其分离组分的抑菌活性,并制备抗菌肽乳基料。【方法】从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶中筛选一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,将其酶解产物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)为指标,分析酶解物和分离组分的抑菌活性。【结果】(1)木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白4.5h,其酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。(2)大孔吸附树脂将牛乳酪蛋白酶解物分离成4个组分,其中以体积分数75%乙醇洗脱组分的抑菌作用较强。(3)凝胶过滤色谱将体...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘家星 汪开毓 陈德芳 刘韬 贺扬 曾宇鲲 蒋洁
为检测罗非鱼源无乳链球菌兼职蛋白ＥＦ－Ｔｕ（延伸因子Ｔｕ，ＥｌｏｎｇａＴｉｏｎ ＦａｃＴｏｒ Ｔｕ）的抗原性，本实验克隆了罗非鱼源无乳链球菌Ｈｎ０３０３的ＥＦ－Ｔｕ基因序列，并进行了蛋白相关性质的预测和系统发育树的构建。通过原核表达得到ＥＦ－Ｔｕ重组蛋白，同时利用纯化的蛋白免疫家兔获得多克隆兔抗ＥＦ－Ｔｕ重组蛋白血清以用于ＥＦ－Ｔｕ蛋白抗原性检测。结果显示，罗非鱼源无乳链球菌Ｈｎ０３０３ ＥＦ－Ｔｕ基因有１个由１１９７个碱基组成的ｏｒＦ，编码３９８个氨基酸。生物信息学分析显示其分子式为ｃ＿（１９３３）Ｈ＿（３０９６）ｎ＿（５３２）ｏ＿（６１５）Ｓ＿（１１），分子质量为４３．９８１ ｋｕ，理论等．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
汪笑宇 战文斌 邢婧 绳秀珍
分别用热酸抽提法、碱抽提法和胃蛋白酶消化法分离豚链球菌NUF849的类M蛋白,通过SDS-PAGE和Western-blotting印迹法分析比较三种方法所提类M蛋白的组成和抗原性差异。结果表明,热酸抽提法分离制备的类M蛋白得率和纯度都较其它两种方法高,蛋白的抗原性保持较好。采用热酸抽提法提取5株豚链球菌NUF633、NUF693、NUF701、NUF812、NUF849和2株停乳链球菌SD和L2的类M蛋白,其SDS-PAGE图谱明显不同,种间差异明显,豚链球菌主要类M蛋白的分子量分别为60、48、37、30、27、24和15ku,停乳链球菌主要类M蛋白的分子量分别为68、48、42、37、2...
关键词：
豚链球菌 停乳链球菌 类M蛋白 抗原性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕高婧 刘艳玲 徐洪军 薛秀恒 王志耕 梅林 何攀 方如兰
【目的】对冷藏原料乳中易污染的嗜冷菌进行分离筛选,为提高乳品品质、控制乳品质量提供参考。【方法】从冷藏原料乳中筛选出1株嗜冷菌,通过形态学观察、生理生化试验、16SrDNA分子生物学分析,对该株嗜冷菌进行鉴定;并采用福林-酚试剂法、蛋白酶定性检测试验、耐热性试验以及牛奶酸度、黏度影响等试验,对其产酶特性进行研究。【结果】从冷藏原料乳中分离出的该株嗜冷菌为革兰氏阴性短杆菌,与GenBank中登录的荧光假单胞菌的生理生化特征相符,二者同源性为92.5%~97.6%。对该菌产胞外酶能力的研究发现,该菌所产胞外酶为一种耐热碱性蛋白酶,最适温度为30℃,最适pH为8.0,可引起牛乳黏度增大、凝集和乳清析...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘祥
对溶藻弧菌外膜蛋白ＯｍｐＵ进行分子克隆构建，抗原性生物信息学分析，为疫苗的开发奠定了基础。通过分子克隆获得ＯｍｐＵ蛋白的原核表达菌株，重组表达后利用切胶纯化获得ＯｍｐＵ蛋白，免疫小鼠制备抗血清，Ｗｅｓｔｅｒｎ ＢｌＯｔｔｉｎｇ检测发现ＯｍｐＵ蛋白具有很好的抗原性。采用在线软件预测ＯｍｐＵ为亲水的分泌型蛋白；存在多个酶切位点。采用ｔｍＨｍｍ ｓｅｒｖｅｒ ｖ．２．０程序预测ＯｍｐＵ无跨膜结构并定位于细胞膜外。通过ｓｉｇｎａｌ ｐ ４．１软件分析发现ＯｍｐＵ的１～２１位氨基酸为信号肽序列。ｓＯｐｍａ服务器预测ＯｍｐＵ的二级结构含无规则卷曲２７．９４％，α－螺旋为３３．２４％，β－转角为１０．２９％．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
戴珊 赵燕 刘芬 滕慧 张学文
以pET–30a和pEGX为出发载体，构建牛乳铁蛋白功能片段BlfFf基因工程表达的非融合性表达质粒pET–BlfFf和和融合性表达质粒pEGX–BlfFf，并在大肠杆菌BL21中诱导了蛋白表达。表达产物经SDS–PAGE分析，非融合型表达pET–BlfFf导表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在，而融合型的pEGX–BlfFf表达的目标蛋白则可大量溶于细胞破碎上清液中，说明后者更适合表达可溶性目标蛋白。pEGX–BlfFf诱导表达产物经GST标签填料柱亲和层析纯化后，可制备出可溶性融合蛋白GST–BlfFf，其产量约为60 mg/L。该蛋白经凝血酶去除GST标签，获得纯化的目标肽BlfFf。对BlfFf的生物活性的试验表明，经过胃蛋白酶水解后的多肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有抗菌活性。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
戴珊 赵燕 刘芬 滕慧 张学文
以pET–30a和pEGX为出发载体，构建牛乳铁蛋白功能片段BlfFf基因工程表达的非融合性表达质粒pET–BlfFf和和融合性表达质粒pEGX–BlfFf，并在大肠杆菌BL21中诱导了蛋白表达。表达产物经SDS–PAGE分析，非融合型表达pET–BlfFf导表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在，而融合型的pEGX–BlfFf表达的目标蛋白则可大量溶于细胞破碎上清液中，说明后者更适合表达可溶性目标蛋白。pEGX–BlfFf诱导表达产物经GST标签填料柱亲和层析纯化后，可制备出可溶性融合蛋白GST–BlfFf，其产量约为60 mg/L。该蛋白经凝血酶去除GST标签，获得纯化的目标肽BlfFf。对BlfFf的生物活性的试验表明，经过胃蛋白酶水解后的多肽对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有抗菌活性。
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