- 年份
- 2024(8118)
- 2023(11624)
- 2022(10293)
- 2021(9775)
- 2020(8166)
- 2019(18826)
- 2018(19170)
- 2017(36061)
- 2016(20108)
- 2015(22861)
- 2014(22997)
- 2013(22330)
- 2012(20460)
- 2011(18314)
- 2010(18098)
- 2009(16296)
- 2008(15783)
- 2007(13791)
- 2006(11875)
- 2005(10099)
- 学科
- 济(70126)
- 经济(70033)
- 管理(54631)
- 业(49426)
- 企(41593)
- 企业(41593)
- 方法(32738)
- 数学(27766)
- 数学方法(27402)
- 学(20353)
- 农(19223)
- 中国(18989)
- 财(18185)
- 业经(15784)
- 地方(15002)
- 理论(14206)
- 制(14202)
- 和(12904)
- 农业(12552)
- 贸(12442)
- 贸易(12435)
- 易(12058)
- 环境(11876)
- 教育(11584)
- 务(11488)
- 技术(11421)
- 财务(11416)
- 财务管理(11390)
- 银(11262)
- 银行(11204)
- 机构
- 大学(276989)
- 学院(276101)
- 管理(106340)
- 济(97805)
- 经济(95369)
- 研究(94424)
- 理学(92331)
- 理学院(91198)
- 管理学(89393)
- 管理学院(88916)
- 中国(68038)
- 科学(64700)
- 京(60111)
- 农(53209)
- 所(49267)
- 业大(47206)
- 研究所(45519)
- 财(45136)
- 中心(42412)
- 农业(42369)
- 江(40523)
- 北京(37514)
- 范(37452)
- 师范(36937)
- 财经(36145)
- 院(34464)
- 技术(33739)
- 州(33051)
- 经(32805)
- 师范大学(29584)
- 基金
- 项目(196650)
- 科学(152175)
- 研究(140263)
- 基金(140050)
- 家(124145)
- 国家(123086)
- 科学基金(103833)
- 社会(83370)
- 省(79248)
- 社会科(78628)
- 社会科学(78605)
- 基金项目(75075)
- 自然(70524)
- 自然科(68802)
- 自然科学(68786)
- 自然科学基金(67505)
- 划(67077)
- 教育(64497)
- 编号(57882)
- 资助(57070)
- 成果(47664)
- 重点(44135)
- 部(41594)
- 发(41434)
- 创(40969)
- 课题(40584)
- 科研(38270)
- 计划(38251)
- 创新(38157)
- 项目编号(35967)
共检索到396750条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 林业科学研究
[作者]
汪阳东 李春秀 齐力旺 张守攻
以我国重要的生物能源灌木——中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段。在GenBank中Blast(GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高达88%,位于fad2基因编码区中部。将所得片段经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建了反义表达载体pBI121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和氨苄青霉素的再生烟草植株。初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异,而亚油酸则减少10.3%...
[期刊] 华北农学报
[作者]
贾会丽 郭继承 吴欣明 王运琦 刘建宁 方志红 石永红 董宽虎
钙依赖蛋白激酶作为一个关键的信号传导器,通过调控和参与植物体内的代谢途径等方式在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。为了探索柠条锦鸡儿相关基因的功能,本研究利用同源克隆的方法,从柠条锦鸡儿中克隆了1个CDPK类基因的CDS,命名为CkCDPK。通过测序和生物信息学分析,结果显示,该基因包含1 710 bp的开放阅读框,编码570个氨基酸,分子质量为64.03 ku,蛋白质等电点(PI)为9.12。结构分析显示,CkCDPK含有N端可变区、蛋白激酶区、4个EF手型结构和类似钙调素等结构域。利用实时荧光定量PCR检测了CkCDPK基因在不同逆境胁迫下的表达量,结果显示,NaCl胁迫和干旱胁迫下该基因的表达量呈现出单峰趋势,其中,盐胁迫6 h、干旱胁迫4 h表达量最高,外源ABA诱导下该基因的表达量基本呈逐渐上升趋势。表明该基因可能参与了柠条锦鸡儿的抗逆性调控。构建植物超表达载体pCAMBIA3301-CkCDPK,可为进一步研究CkCDPK基因在柠条锦鸡儿抗逆性调控中的作用奠定基础。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
许锋 朱俊 张风霞 王燕 程水源 程述汉
根据其它植物PAL基因的保守区域,设计一对兼并引物,采用RT-PCR方法从国槐中克隆了一个长866bp的PAL基因片段,命名为SjPAL。序列分析发现SjPAL多肽与其它植物的PAL氨基酸序列高度同源(87%以上),且包含与水稻和拟南芥的PAL类似的活性位点。系统进化树分析表明SjPAL与豆科植物的PAL亲缘关系较近。RT-PCR结果显示,SjPAL在根和茎的表达量约为叶中的3倍。利用反义RNA技术将SjPAL基因克隆至植物表达载体pBI121,构建了SjPAL反义RNA植物表达载体pBI121-PAL,通过根癌农杆菌EHA105将其导入拟南芥基因组,对获得的抗性植株进行PCR鉴定、North...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林萍 汪阳东 齐力旺 张守攻
【目的】探索中间锦鸡儿基因组中FAD2基因的拷贝数,分析不同拷贝的表达模式,以期揭示不同拷贝在植物体内的功能分工。【方法】根据中间锦鸡儿(Caragana intermedia)FAD2基因的保守序列设计1对引物SF和SR,利用该引物对PCR扩增制备114 bp的Southern检测探针,探针进行地高辛标记后,采用罗氏Southern杂交试剂盒进行Southern检测。根据中间锦鸡儿3个FAD2基因各自的特异差异序列,分别设计定量PCR引物序列,以actin基因为内参,对中间锦鸡儿的根、茎、叶及不同发育时期(发芽15,25,35 d)种子的cDNA进行定量PCR分析。【结果】中间锦鸡儿FAD2...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孔丽颖 李翔 李才运 刘晓东 李月
为研究棉花ＣＢＦ２基因在植物抗逆中的作用，构建了ｐ ＣＡＭＢＩＡ１３００－Ａｔ ＣＢＦ２ｐ－ＧＢ ＣＢＦ２－Ａｔ ＣＢＦ２ｔ植物互补表达载体，并对拟南芥ＣＢＦ２突变体进行遗传转化。以新海１６ Ｃ ＤＮＡ为材料，采用ｐＣＲ的方法克隆４个棉花ＣＢＦ２基因，同时克隆拟南芥ＣＢＦ２基因启动子Ａｔ ＣＢＦ２ｐ和终止子Ａｔ ＣＢＦ２ｔ，并将这些基因与ｐ ＢｌｕｅｓＣＲＩｐｔ ｓＫ载体连接，构建ｐ ＢｌｕｅｓＣＲＩｐｔ ｓＫ－Ａｔ ＣＢＦ２ｐ－ＧＢ ＣＢＦ２－Ａｔ ＣＢＦ２ｔ中间过渡载体，用ｓＡＣⅠ和ＢＡＭ ＨⅠ双酶切中间载体，获得Ａｔ ＣＢＦ２ｐ－ＧＢ ＣＢＦ２－Ａｔ ＣＢＦ２ｔ核心片段，将此片段插入到ｐ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
范丙友 高水平 刘改秀 史国安 李嘉珏 孔祥生
根据GenBank登录的牡丹ACS基因DNA全长序列(FJ769773),设计一对特异性引物,在优化的PCR扩增体系的基础上,应用高保真DNA聚合酶KOD-Plus从洛阳红牡丹叶片总DNA中扩增出牡丹ACC合成酶基因片段PsACS-4。测序结果表明:克隆序列长970 bp,不包含牡丹ACS基因内含子序列,与目标序列同源性达100%;用SacI和SmaI对重组质粒和空载体pBI121双酶切、连接,将PsACS-4基因片段反身插入到植物表达载体pBI121的35S启动子下游,成功构建了牡丹ACS反义基因植物表达载体。
关键词：
牡丹 ACC合成酶 反义植物表达载体
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
姚新灵 万巧风 陈彬 李珺 丁海麦 狄建军 郭蔼光
为了研究不同启动子驱动的反义SAGP抑制内源ADP-Glc PPase小亚基编码基因表达的效果,创造适于外源基因表达的突变体,利用RT-PCR方法,由马铃薯块茎cDNA克隆获得ADP-Glc PPase小亚基编码基因(SAGP)的1 821 bp cDNA。核酸数据库检索和序列比对分析表明,已克隆的SAGP基因cDNA推测编码607个氨基酸组成的多肽,其中第312和411的天冬酰氨均突变为丝氨酸。以pCambia为基础,分别构建了CaMV35S和GBSSI块茎启动子驱动的小亚基cDNA反义结构植物表达载体。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张志刚 白德朗 陈烈臣 熊兴华 李栒 官春云
丙酮酸羧化酶(PEP)是控制油菜蛋白质/油脂含量比例的一个关键酶,抑制种子中pepc基因的表达,使其底物(丙酮酸)更多地朝生成油脂的方向流动,对提高种子的含油量,增加油菜的经济价值具有重要的意义.利用PCR技术从甘蓝型油菜湘油15号基因组中扩增了PEP基因片段,并将其克隆到pGEM-TEasy载体上进行测序.测序结果表明:扩增片段长576bp,与Yannai报道的PEP基因相应区域的同源性为95%.用扩增引物上设计的BamHI和SacI两位点酶将PEP基因片段切下,反向插入到pBI121.N质粒的Napin启动子之后,构建了种子特异性反义PEP表达载体,并通过农杆菌介导法将反义PEP基因转化到...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
向建华 高国赋 周小云 刘爱玲 邹杰 陈信波
利用拟南芥的WAX2基因序列,BLAST检索出3个水稻同源基因,分别命名为OsWAX2-1,OsWAX2-2,OsWAX2-3,与拟南芥WAX2基因的同源性分别为56.0%,55.2%,52.0%;其预测的编码蛋白与WAX2蛋白的同源性分别为61.5%,60.5%,64.7%.这3个蛋白都存在4个跨膜结构和2个固醇去饱和酶的保守区,说明这3个蛋白质都属于跨膜蛋白,并可能与角质层的蜡质合成有关.从全长cDNA数据库检索获得了3个OsWAX2的全长cDNA.以pCAMBIA-1300-multi为载体,构建了CaMV35S启动子驱动的3个OsWAX2的过表达载体pOEOSW2-1,pOEOSW2-...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
苏君艺 陆璇璇 朱维宁 张林生
【目的】利用基因枪将WZY2基因RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri导入"郑引1号"小麦,获得WZY2基因表达缺失型小麦,为深入分析WZY2基因功能奠定基础。【方法】以植物表达载体pAHC25为基础,构建含有反向重复序列的RNA干扰表达载体pAHC-WZY2-Ri,利用基因枪将其转入"郑引1号"小麦幼胚愈伤组织中,经过筛选、PCR检测得到阳性植株。【结果】从转化的1 500个愈伤组织中获得27株再生植株。利用PCR对再生植株进行检测,获得阳性植株3株,转化率为0.2%。【结论】构建了WZY2基因的RNA干扰表达载体,成功地将WZY2基因RNA干扰表达载体导入"郑引1号"小麦,获得阳性植株...
关键词：
小麦 WZY2基因 RNA干扰 遗传转化
[期刊] 华北农学报
[作者]
滑璐玢 于秀敏 杨杞 王瑞刚 宝力德
为研究胚胎发育晚期蛋白(LEA)在柠条中的生物学功能,从已构建的柠条锦鸡儿干旱胁迫抑制削减杂交文库中筛选到一条LEA蛋白编码基因,并采用RT-PCR法进行克隆。所得LEA基因的开放阅读框(ORF)长1 119 bp,编码373个氨基酸的蛋白质,命名为CkLEA4-1。结合序列比对与系统进化分析结果,推断CkLEA4-1属于5族LEA蛋白。利用实时荧光定量PCR技术对CkLEA4-1在干旱、高盐等逆境胁迫条件下的表达情况进行初步研究,结果表明,CkLEA4-1受到不同程度的诱导,推测该基因可能与柠条锦鸡儿响
关键词：
柠条锦鸡儿 LEA 基因克隆 表达分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘超 康国章 郭天财 岳彩风 沈丙权
采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出小麦淀粉合成关键酶—AGPase质体型大亚基(AGPase plastidial large subunit,LSU Ⅱ)cDNA一段特异保守序列,长度为535 bp(GenBank No.EF378944),与DQ409820(小麦)、U66876(大麦)、AK069296(水稻)和DQ406819(玉米)分别有98%,97%,88%,88%的同源性,表明克隆出了小麦LSU Ⅱ基因的部分cDNA序列。以pWM101质粒表达载体为基础,将LSU Ⅱ反向置于pWM101质粒的CaMV35S启动子之后,构建了LSU Ⅱ的反义表达载体pWM10...
关键词：
小麦 AGPase LSU Ⅱ 表达载体
[期刊] 西南农业学报
[作者]
覃迎姿 王爱勤 黄文静 杨丽涛 李杨瑞
延伸因子eEF1A(Eukaryotic elongation factor 1A)是在核糖体催化氨基酸链延伸以及推动、控制蛋白质合成过程中起重要作用的蛋白质因子。利用RT-PCR技术扩增得到甘蔗eEF1A的编码区1420 bp的cDNA序列,反向连接到受体质粒pB I121载体中,构建含GUS基因的甘蔗eEF1A基因反义植物表达载体pB IantiEF。用冻融法将pB IantiEF导入根癌农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法,将eEF1A反义基因转化烟草K346。将获得的43株抗卡那霉素烟草经PCR筛选,得到38株呈阳性的反义转基因植株,阳性植株再经Dot-Southern杂交检测,...
关键词：
甘蔗 eEF1A 反义转基因 遗传转化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李兰玉 陈苇 杨清辉 罗延青 符明联 董云松 李根泽 王敬乔
利用甘蓝型油菜种子特异性贮存蛋白基因cruciferin启动子及NOS终止子构建了无选择标记基因且含有反义结构的油酸脱饱和酶基因(Fad2)的RNA i表达载体。通过农杆菌介导法,获得了无选择标记转基因植株;再生植株的PCR检测表明,外源基因已高频率地整合到油菜基因组中,而且获得的转基因种子通过脂肪酸含量分析表明,油酸含量比对照有了很大的提高。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
武苾菲 李万峰 徐海燕 张立峰 齐力旺 韩素英
[目的]研究并了解中间锦鸡儿CiDR1基因功能及其对干旱胁迫的响应,为抗性育种提供候选基因。[方法]通过RACE技术从中间锦鸡儿中克隆CiDR1基因的c DNA全长,利用生物信息学分析软件对其基因结构及功能进行分析和预测。再通过qRT-PCR技术对干旱胁迫后的幼苗中的CiDR1表达模式进行研究。[结果]从中间锦鸡儿中克隆到CiDR1基因的c DNA全长共计4 297 bp,Gen Bank登录号为KP277100。生物信息学分析表明,预测的CiDR1蛋白序列中含有1 243个氨基酸残基,具有抗病基因特征结
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
