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[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈丹红 陈青青 田红艳 施华娟 刘文斌
本研究运用细胞生物学研究方法,探讨中草药提取物黄连素对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝细胞(L8824)活力、氧化应激和细胞凋亡的影响。用不同浓度黄连素(0μmol/L、5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)分别处理体外培养的草鱼肝细胞Oh、6 h、12 h和24 h,采用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,黄连素浓度和时间对细胞活力有显著交互作用(P<0.05),且黄连素浓度对其活力影响差异显著(P<0.05),草鱼肝细胞活力随着黄连素的浓度增加先升高后降低(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
汪纪仓 刘学忠 袁燕 裔传卉 卞建春 刘宗平
【目的】探讨氧化应激在镉诱导大鼠肝细胞凋亡中的作用。【方法】采用两步灌流法获得大鼠肝细胞,经过24 h培养,用醋酸镉处理细胞,或者Z-VAD-fmk、NAC和镉共同处理细胞。应用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内ROS水平和线粒体膜电位,分光光度法检测caspase-3活性、GSH和MDA含量。【结果】结果表明,肝细胞暴露于浓度为2.5、5、10μmol.L-1的镉后,细胞相对存活率显著下降(P<0.01),凋亡率显著或极显著升高(P<0.05或P<0.0...
关键词：
镉 大鼠肝细胞 细胞凋亡 氧化应激
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王霞 邬静
以原代分离培养仔猪睾丸支持细胞为模型,经含不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L)乙酸棉酚或40μmol/L乙酸棉酚加800μmol/L的乙酰半胱氨酸(NAC)的培养基培养24 h后,检测细胞增殖率、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性、培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞凋亡情况,研究棉酚对仔猪睾丸支持细胞的氧化应激及细胞凋亡的影响。结果显示:棉酚呈浓度依赖性抑制仔猪睾丸支持细胞增殖率,棉酚浓度大于等于10μmol/L时,细胞增殖率极显著降低;棉酚造成细胞内ROS水平显著升高、SOD活性显著降低、MDA含量升高及培养基中LDH活性升高;NAC显著抑制棉酚诱导的细胞内ROS水平升高、细胞增殖抑制及细胞凋亡。表明棉酚能诱导仔猪睾丸支持细胞凋亡,这可能与过量ROS生成而造成细胞氧化应激有关。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王希春 周凡 冯士彬 孟庆娟 李玉 刘芳芳 吴金节
【目的】研究中草药单味及复方提取物对原代培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响,旨在为探明中草药治疗奶牛乳腺疾病机制提供试验依据。【方法】采用组织块种植法培养3月龄、分娩后3~5 d的昆明种远交系小白鼠的乳腺组织,采用胰蛋白酶消化法获得相对纯化的小鼠乳腺上皮细胞,并运用SDS-PAGE法进行鉴定。制备5味中草药(重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶)及治疗奶牛乳房炎用中草药复方提取物,分别作用于对数生长期的乳腺上皮细胞5 d,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)分析细胞活力。【结果】将通过组织块种植法与胰蛋白酶消化法相结合,可得到纯化的有酪蛋白分泌功能的乳腺上皮细胞;中草药重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲...
关键词：
中草药 小鼠乳腺上皮细胞 细胞培养 增殖
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
马蕊 刘仲华 黄建安 林勇 陈金华 钟源
为比较绿茶、红茶提取物对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞光损伤的抑制作用,用不同浓度的绿茶、红茶提取物对人表皮角质形成细胞(HaCaT)预处理6 h,以60 mJ/cm2的剂量照射细胞,比较细胞生存率和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及丙二醛(MDA)含量的变化,用荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量,用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,并对绿茶、红茶的茶多酚及儿茶素类物质含量进行比较。结果表明:与空白对照组相比,UVB辐射模型组的HaCaT细胞活性下降了21.61%,细胞损伤严重;与UVB辐射模型组相比,绿茶、红茶提取物...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
尹晓燕 田兴 李大鹏 汤蓉
为探究亚硝态氮对于草鱼离体肝细胞抗氧化系统的影响,将分离得到的离体草鱼肝细胞在含0(空白),1,10和100 mg/L(浓度以氮计)的亚硝酸钠的M199生长培养基中,分别培养6、12、24、48和96 h后,检测肝细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和谷胱甘肽转移酶(GST)的活性,谷胱甘肽(GSH)水平以及总抗氧化能力(TAC)。结果显示:高浓度的亚硝酸钠会引起肝细胞内的SOD、CAT、GST、γ-GCS活性显著升高;除100 mg/L实验组外,各实验组的GSH水平均显著高于对照组,而TAC则随着亚硝酸钠浓度的升高,表现为先升高后下降的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵金坤 梁宏伟 邹桂伟 王焕岭 李忠
【目的】通过磷脂结合蛋白Ｖ／碘化丙啶（Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／Ｐｉ）流式细胞分析法和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（ＴＵｎｅＬ）法检测低氧胁迫下鲢肝、脑细胞的凋亡情况。【方法】将鲢分成对照组和低氧处理组，对照组正常饲养，低氧处理组用保鲜膜将水箱上口封住进行低氧处理，分别在鲢浮头期以及死亡期取其肝、脑组织，同时取对照组鲢肝、脑组织，采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／Ｐｉ流式细胞分析法和ＴＵｎｅＬ法检测其细胞凋亡情况。【结果】Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／Ｐｉ流式细胞仪分析结果表明，在鲢肝脏中细胞凋亡率依次是对照组８．８５％、低氧处理组浮头期２２．０６％、低氧处理组死亡期２２．９１％；脑中细胞凋亡率依次是对照组８．１８％、．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
卢荣华 张文雅 张玉茹 杨丽萍 王俊丽 孟晓林 聂国兴
外泌体是具有磷脂双分子膜结构的纳米级囊泡,能够参与机体多种生理过程。实验探讨了草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定方法,并初步研究外泌体对草鱼肝细胞中miRNAs及免疫相关基因表达的影响。实验以草鱼肝细胞L8824为材料,通过超速离心获得外泌体,利用电子显微镜观察外泌体形态,采用纳米颗粒示踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体粒径和数量,同时利用Western blot分析其标志蛋白CD63的表达,最后用正常肝细胞和油酸诱导的脂肪肝细胞源外泌体孵育草鱼肝细胞,通过Real-time qPCR技术检测两种不同来源的外泌体对草鱼肝细胞中miR-122/33及免疫相关基因(TNF-α,NF-κB,IL-1β,IL-6和IL-10)转录水平的影响。结果显示,草鱼肝细胞外泌体为30～150 nm的不均匀囊泡,呈圆形或椭圆形,有完整的膜结构;外泌体标志蛋白CD63呈阳性表达;NTA技术检测显示外泌体囊泡占所有囊泡的50%以上;脂肪肝细胞源外泌体显著提高了肝细胞中miR-122及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA转录水平。研究表明,通过超速离心法可成功分离草鱼肝细胞外泌体,且脂肪肝细胞源外泌体在草鱼肝细胞免疫调节中可能发挥重要作用。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
李聃 杨先乐 张书俊 喻文娟 陈昱
红霉素-N-脱甲基酶(ERND)是细胞色素P450 3A(CYP3A)依赖的酶类,可通过测定该酶催化代谢产物甲醛的量来反映其活性,从而评价CYP3A活性的高低。以草鱼肝细胞系(GCL)为模型,红霉素为底物,采用Nash比色法检测ERND产物甲醛含量,Lowry比色法测定细胞蛋白含量,建立鱼类细胞中CYP3A活性的简便检测方法。研究表明,底物以0.4 mmol/L作用60 m in后进行检测较为合适。细胞样品中ERND产物甲醛平均回收率为78.80%±4.37%,平均日内精密度为2.80%±1.40%,平均日间精密度为3.91%±1.45%,通过计算探针酶ERND活性可为鱼类细胞CYP3A活性的...
[期刊] 水产学报
[作者]
汪开毓 赵德明 耿毅 黄小丽 刘光迅
Hepatic cells apoptosis induced by olaquindox in common carp, Cyprinus carpio, were studied. The test was conducted for 30 days, with dose of 200mg?kg~(-1) feed. Terminal deoxynucleotidy transferase mediated dUTP-Biotin nick-end labeling (TUNEL), electronic microscopic and flow cytometry were perfor...
关键词：
鲤 细胞凋亡 喹乙醇 肝细胞
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
车勇良 孙谧 欧阳五庆 姚如永 王跃军 王春波 张琇
观察扇贝多肽 (PolypeptidefromChlamysferreri) (PCF)对实验性氧化所致小鼠胸腺细胞凋亡的影响。采用台盼蓝 (TrypanBlue)活细胞拒染法在普通光学显微镜下观察细胞的存活率 ;以四甲基氮唑盐 (MTT)法测定细胞的增殖活性 ;以生化检测 (DNAladder)法观察PCF对细胞DNA片断化的影响 ;用透射电镜观察细胞的超微形态结构变化。台盼蓝染色法证实PCF能增强细胞的活性并与PCF浓度成正比 ;MTT法表明PCF不仅能保护细胞免受损伤 ,而且还能促进细胞的增殖 ,并有PCF依赖性 ;生化检测显示PCF能减少细胞凋亡的DNA片断化数目 ;细胞的超微结构还表...
关键词：
栉孔扇贝 过氧化氢 胸腺细胞 凋亡
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
符晨星 贺建华 侯德兴
采用Folin-Ciocalteu法对荷叶、枳实和水皂角3种中草药提取物的多酚定量,用分光光度法进行清除自由基能力的评估。结果表明,经过粗提后,多酚含量最高的是枳实提取物,多酚含量为(462.5±19.28)mg/g,其次是荷叶和水皂角提取物,分别含多酚(293.8±78.57)和(270.3±28.53)mg/g。清除DPPH自由基能力最强的是水皂角提取物,其次是荷叶和枳实提取物,IC50值分别为(0.021±0.003)、(0.037±0.007)和(0.061±0.010)mg/mL。抗氧化性测定结果显示,3种中草药的抗氧化性与其酚类物质含量并不呈正相关。
关键词：
中草药 抗氧化性 多酚含量
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王磊 宿红艳 王媛 穆春华 赵志文
采用热激处理烟草愈伤组织诱导细胞凋亡的产生,通过对处理烟草基因组的DNA电泳分析,力求找出促进凋亡产生的最佳温度及时间,以期为深入研究逆境条件下植物细胞程序性死亡提供一理想模型.结果表明:在53℃下处理烟草细胞2.25 h后,再经25℃恢复培养10 h能观察到较清晰的DNA梯状条带,此时烟草细胞进入凋亡状态.
关键词：
细胞凋亡 烟草 温度 热激 DNA梯形带
[期刊] 水产学报
[作者]
刘瑾 张美娟 于成兵 杨烁烁 张京 徐建雄 徐维娜
为研究黄连素对高脂诱导的斑马鱼肝脏细胞脂质代谢组学的影响，以斑马鱼细胞为实验材料，通过棕榈酸钠（0.25 mmol/L，24 h）诱导肝脏细胞脂质沉积模型，经黄连素（25 μmol/L，6 h）处理后收集细胞。采用高效液相色谱-质谱联用技术进行脂质代谢组学分析，对不同处理的斑马鱼肝脏细胞的脂质代谢物进行筛选鉴定并对脂代谢相关因子的基因表达进行检测。结果显示，与对照组相比，高脂组共筛选出1 761个差异离子，其中鉴定出147种差异表达的代谢产物基因，123个表达升高、24个降低；高脂+黄连素组共筛选出2 728个差异离子，其中鉴定出346种差异表达的代谢产物，139个升高、207个降低。与高脂组相比，高脂+黄连素组共筛选出1 605个差异离子，其中鉴定出259种差异表达的代谢产物，45个升高、204个降低。进一步对不饱和脂肪酸代谢通路研究发现，差异代谢产物二高-γ-亚麻酸（DGLA）和二高-α-亚麻酸（ETA）含量在高脂组中显著上升，且添加了黄连素后含量显著下降；与对照相比，高脂+黄连素组的DGLA和ETA含量并无显著差异。通过检测DGLA和ETA分解相关酶的基因（atgl、hsl）表达量发现，与对照组相比，高脂组二者均显著降低，添加了黄连素后均显著升高；检测合成相关酶基因（acc、elovl6、elovl7a、scdb、fas和fads2）的表达量，结果显示，与对照组相比，高脂组细胞内acc、elovl6和scdb的表达量显著升高，fads2表达量显著降低，而添加了黄连素后细胞内fads2的表达量显著升高，fas、elovl6和scdb表达量显著降低。综上所述，高脂诱导通过抑制脂质分解相关基因表达，促进脂质合成相关基因的表达进而引起脂肪在细胞中的过度沉积，添加适量黄连素可以显著改善这一现象。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
任瑞芬 李泽迪 朱梦婷 刘燕 张孔英
目的】超低温保存后花粉生活力呈多种变化情况，已有研究表明活性氧（ROS）是超低温保存后花粉生活力变化的主要原因之一。因此，本研究探讨液氮冻存后花粉生活力与ROS诱导的氧化应激和细胞程序性死亡间的关系，以进一步揭示ROS在超低温保存后花粉生活力变化中的作用机制。【方法】以芍药‘粉玉奴’的花粉为材料，对比分析超低温保存不同时间长度后花粉生活力、ROS生成量、氧化应激以及细胞程序性死亡指标的变化情况。【结果】花粉超低温保存过程中，ROS成分超氧阴离子自由基（O_2·-）含量在液氮冻存1个和3个月后相对较高，过氧化氢（H_2O_2）含量随着保存时间的延长显著增加，羟自由基（·OH）含量在保存3个月后开始下降，且H_2O_2和·OH含量均与花粉生活力显著相关。其次，氧化损伤指标丙二醛（MDA）含量在保存3个月后显著升高，与花粉生活力、H_2O_2和·OH含量显著相关；细胞程序性死亡（PCD）指标caspase-3-like蛋白酶活性在液氮冻存1个月和3个月后均高于对照，细胞凋亡率在保存5个月和8个月后显著升高，且细胞凋亡率均与花粉生活力、H_2O_2和·OH含量均显著相关。此外，适宜浓度的外源抗氧化剂（抗坏血酸、谷胱甘肽）和类凋亡抑制剂（caspase-3抑制剂）显著提高了液氮冻存8个月后的花粉生活力。【结论】芍药‘粉玉奴’花粉超低温保存过程中，ROS对超低温保存后的花粉生活力产生了重要的影响，其成分H_2O_2和·OH的作用尤为突出，其诱发的氧化应激反应和细胞程序性死亡是液氮冻存后花粉生活力变化的重要原因。
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