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[期刊] 中国科学技术大学学报
[作者]
吴德海 张树庚 刘连新
中性粒细胞诱外捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)是一种来源于中性粒细胞的DNA网状结构,能够捕获和杀死病原微生物,从而在宿主防御中发挥重要作用.越来越多的证据表明NETs与肿瘤的进展密切相关,且能够通过多种方式促进肿瘤的复发转移.其临床意义也逐渐突显出来.本综述重点阐述促癌微环境中NETs的形成及促进肿瘤复发转移的机制,并对NETs临床应用价值进行探究.
关键词：
中性粒细胞外诱捕网 肿瘤 机制
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
于昊 李曼曼 薛洋 姜志洋 茆达干
［目的］本试验旨在研究毛喉素（FSK）对体外培养的猪卵泡颗粒细胞分化的作用及其机制。［方法］体外分离培养猪原代卵泡颗粒细胞，预培养24 h。应用FSK（10 nmol·L~(-1)）处理细胞48 h，检测细胞形态、脂滴积聚、标记基因和周期相关基因表达；处理96 h检测孕酮（P_(4)）水平及类固醇合成相关蛋白的表达。［结果］与对照组相比，FSK改变了细胞形态，增大了细胞直径，并使细胞内脂滴含量增加（P < 0.01）；FSK降低了细胞的增殖活性和增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA的表达水平（P < 0.01）；FSK降低了颗粒细胞标记基因促卵泡素受体（FSHR）mRNA的表达水平，提高了黄体细胞标记基因前列腺素受体（PTGFR）和促黄体素受体（LHCGR）mRNA的表达水平（P < 0.01）；FSK促进了P_(4)分泌，提高了类固醇合成相关蛋白StAR、P450scc和3β-HSD的表达水平（P < 0.01）；从细胞周期看，FSK降低了细胞周期素B1（CCNB1）、细胞周期素D1（CCND1）和细胞周期蛋白依赖性激酶1 (CDK1）、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）基因的表达（P < 0.01），而使细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A/B（P21~(cip1)/P27~(kip1)）基因表达上调（P < 0.01），并将细胞周期阻滞在G0/G1期。［结论］FSK能够通过抑制细胞增殖、增强脂滴积聚和孕酮合成代谢、退出细胞周期来促进颗粒细胞向黄体细胞转化。
关键词：
毛喉素 猪 颗粒细胞 分化 细胞周期
[期刊] 中国水产科学
[作者]
潘连德 邹玉蓉
运用吖啶橙检测法研究中华鳖 (Trionyxsinensis)嗜中性粒细胞吞噬功能。试验测定了中华鳖嗜中性粒细胞对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)和大肠杆菌 (Escherichiacoil)的吞噬和杀伤能力。结果发现 ,中华鳖嗜中性粒细胞分别和金黄色葡萄球菌、大肠杆菌温育 30～ 180min ,吞噬百分率分别由 15%增加到 6 5%、由 9%增加到 6 3% ,杀伤百分率由 6 %增加到 6 2 %、由 2 %增加到 6 4 % ,吞噬指数由 0 .56增加到11.92、由 0 .14增加到 10 .77,杀伤指数由 0 .32增加到 0 .95、由 0 .2...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姜代勋 陈武 侯显涛 于同泉 路苹 穆祥
【目的】以猪中性粒细胞为靶细胞,研究白芍制剂对其相关功能(呼吸爆发和弹性蛋白酶释放)及磷酸二酯酶活性的影响。【方法】中性粒细胞分离纯化后,以细胞色素C还原法检测中性粒细胞呼吸爆发,以弹性蛋白酶底物的减少反映弹性蛋白酶的释放量,以HPLC检测底物cAMP的变化反映磷酸二酯酶的活性等。【结果】白芍制剂呈剂量依赖性抑制中性粒细胞的呼吸爆发(P<0.001),3个不同浓度的抑制率分别为33.15%、45.96%和62.22%;对弹性蛋白酶的释放在低浓度时表现抑制作用(P<0.05),抑制率为23.22%,在高浓度时表现促进作用;对中性粒细胞磷酸二酯酶活性具有抑制作用,低、高浓度抑制率分别为13.24%...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
董婧 王耀 黄小侠 李林
为探究细胞焦亡在肿瘤免疫微环境中的分子机制，收集国内外最新文献资料，对小动物肿瘤现状、细胞焦亡、诱导细胞焦亡的蛋白家族和其在肿瘤免疫微环境中的作用机制进行阐述。结果表明：1）细胞焦亡是由Gasdermins(GSDMs)家族蛋白所介导的可调节的细胞程序性死亡，GSDMs被蛋白酶水解激活，切割形成N端（具有成孔活性），在细胞膜上打孔，导致渗透性细胞裂解，从而将促炎分子释放到细胞外，引发炎症和免疫反应，对肿瘤微环境的调节有重要意义；2）细胞发生焦亡时会不断胀大破裂，释放细胞内容物，其产生的炎性环境可以招募细胞毒性T细胞（CD8+T）、巨噬细胞和NK细胞等免疫细胞杀死和吞噬肿瘤细胞，抑制髓源性抑制细胞（MDSC）;3）细胞焦亡将肿瘤免疫微环境激活为免疫刺激状态，使其由“冷”转“热”，抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移，靶向治疗肿瘤疾病，降低患病宠物的死亡率。综上，诱导细胞焦亡和调控肿瘤免疫微环境为抗肿瘤治疗提供了新思路，细胞焦亡分子生物学机制的深入研究有望为宠物临床提供一种前景广阔的新型治疗方法。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姜代勋 陈武 谷金妮 许剑琴 于同泉 路苹 穆祥
【目的】通过对猪中性粒细胞磷酸二酯酶(PDE)基因表达、活性及特异性抑制剂实验检测,研究其存在的主要PDE亚型及在体外的活性,为探讨PDE在中性粒细胞的分布、活性变化及对cAMP、cGMP调节与中性粒细胞功能关系提供依据。【方法】采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PDE基因在猪中性粒细胞的表达,以高效液相色谱(HPLC)检测环核苷酸在PDE反应前后的含量变化,计算PDE活性。【结果】在检测的18个PDE亚型中,PDE1B、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、11A共15个PDEmRNA在猪中性粒细胞表达,特异性抑制剂实验表明PDE4、PDE5分...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
于春微 张玉明 邓清华
为研究乙酰乙酸(Acetoacetic acid,AcAc)对奶牛中性粒细胞炎症信号通路的影响,以脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛中性粒细胞炎症模型为研究对象,利用qRT-PCR、生化和酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-1β、IL-6、TNF-α和IKKβ激酶活性。结果表明:1)qRT-PCR结果显示,与对照组相比较,LPS处理组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达显著增强(P<0.01)。与LPS处理组比较,LPS+AcAc混合处理组,其表达量显著下调(P<0.05);2)生化检测结果显示,与对照组相比较,LPS处理组中性粒细胞IKKβ激酶活性显著增强(P<0.01)。与LPS处理组比较,LPS+AcAc混合处理组IKKβ激酶活性则显著降低(P<0.05);3)ELISA结果显示,与对照组相比较,LPS增加促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β的释放。相对于LPS处理组,LPS+AcAc混合处理组促炎因子的释放则显著降低(P<0.01)。综上,AcAc可以抑制LPS诱导的奶牛中性粒细胞炎症信号通路的激活,具有一定的抗炎功能。
关键词：
奶牛 中性粒细胞 酮体 炎症 先天免疫
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王永斌 王允祥 陆兆新
从雷蘑(Clitocybe gigantean)AS 5.105深层发酵的滤液中分离得到胞外粗多糖CEP,以KM系S180荷瘤小白鼠为试验模型,用免疫器官重量法,进行高、中、低剂量CEP的腹腔注射试验。结果表明,CEP能明显提高小白鼠的免疫功能,具有较高的抑瘤活性,并与剂量呈显著相关性;高剂量组与对照组相比较,小白鼠胸腺指数和脾脏指数均有显著增加(P<0.05);与低剂量组相比较,脾脏指数有显著增加(P<0.05)。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
常藕琴 霍礼霞 罗满林 石存斌 张德峰 潘厚军 任燕
分离纯化草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾中性粒细胞、鉴定和检测其活性,目的在于为研究中性粒细胞的功能和免疫防御机制提供细胞材料。本研究使用鱼类脏器组织中性粒细胞分离试剂盒和差异贴壁法分离获得草鱼肾中性粒细胞;应用迪夫氏染色、碘化钾-吡啰红G (KI-Py G)染色、电镜技术鉴定细胞形态,使用多功能酶标仪检测经MPA刺激的细胞活性,台盼蓝染色法和CCK-8检测细胞存活率。结果显示,获得的细胞大小均一,细胞核圆形或肾形,胞质有A、B型颗粒,表面有皱褶,具有中性粒细胞的形态特征;细胞纯度达(99.3±0.53)%,细胞活力达(97.70±0.76)%,在体外培养24h内细胞存活率可保持在(89.91±3.56)%;在PMA刺激下检测到细胞表达MPO、ROS、NO和NETs的量显著提高(P<0.05),与刺激时间呈正相关。结果证实,分离的细胞具有很好的活力,具有中性粒细胞的功能特征。本研究成功建立草鱼中性粒细胞的分离方法,细胞具有很好的活力,可为深入研究鱼类中性粒细胞的功能和免疫机制提供基础。
关键词：
草鱼 中性粒细胞 分离 鉴定 活性检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曹秋瑜 姚望 杜星 潘增祥 李齐发
[目的] 了解猪DCN基因的序列特征、蛋白结构和性质，探讨其在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用。[方法] 利用PCR扩增和测序技术获得猪DCN基因编码区序列，并进行生物信息学分析；利用双酶切法构建猪DCN基因的过表达载体，瞬时转染至体外培养的猪卵巢颗粒细胞中，利用qRT-PCR和western blot技术检测其mRNA和蛋白水平；利用流式细胞术检测猪卵巢颗粒细胞凋亡率。[结果] 猪DCN基因编码区核苷酸序列与哺乳动物其它物种在进化过程中比较保守。猪DCN基因编码蛋白含有360个氨基酸，有糖胺聚糖附着位点（GAS）、亮氨酸重复序列N端结构域（LRRNT）和12个富亮氨酸重复序列（LRR）等重要的保守结构域。猪DCN蛋白三级结构呈马蹄铁形状。成功构建了猪DCN基因真核生物表达载体，转染体外培养的猪卵巢颗粒细胞后发现，DCN过表达显著促进了猪卵巢颗粒细胞凋亡率，显著上调了促凋亡基因BAX与凋亡标志蛋白cleaved-Caspase3的表达水平，而BCL-2/BAX比值则显著降低。[结论] DCN基因在哺乳动物的进化过程中比较保守，是猪卵巢颗粒细胞的促凋亡因子。
关键词：
猪 DCN基因 卵巢颗粒细胞 细胞凋亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
霍泱安 李小雪 孙郴 李齐发 杜星
[目的]本研究旨在分析猪卵泡发育不同阶段颗粒细胞中内参基因的表达稳定性，筛选有效内参基因用于鉴定猪卵泡发育关键调控基因及其表达模式。[方法]基于形态学观察与类固醇激素检测分离猪腔前、有腔、成熟和闭锁卵泡，同时收集相应颗粒细胞；利用RT-qPCR检测甘油醛3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、β-肌动蛋白（ACTB）、ATP合酶F1（ATP5F1）、β2-微球蛋白（B2M）、真核翻译伸长因子1α（EEF1A1）、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1（HPRT1）、核糖体蛋白S3（RPS3）、微管蛋白α-1b（TUBA1B）和泛素C（UBC）等9个候选内参基因在猪卵泡不同发育阶段颗粒细胞中的表达水平；综合△Ct、geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder等算法分析候选内参基因在猪卵泡发育过程中的表达稳定性。[结果]研究发现候选内参基因在猪卵巢颗粒细胞中的表达水平存在较大差异，其中EEF1A1和TUBA1B的表达水平较高，而HPRT1和UBC的表达水平较低；不同算法得到的稳定性存在差异，其中△Ct、NormFinder和BestKeeper分析发现RPS3和ATP5F1的稳定性较高，geNorm分析发现GAPDH和HPRT1的稳定性较高，最终利用RefFinder进行综合权重分析指出候选内参基因的稳定性高低排序如下：RPS3、ATP5F1、HPRT1、EEF1A1、GAPDH、ACTB、TUBA1B、B2M、UBC；进一步以不同表达稳定性内参基因为参照对母猪繁殖力候选基因（FSHR和NORFA）在卵泡发育过程中的表达模式进行检测，结果表明内参基因稳定性对准确鉴定目的基因表达水平和变化模式至关重要。[结论] RPS3和ATP5F1在猪卵泡发育过程中具有较高的表达稳定性，可作为有效内参基因用于后续猪卵泡发育相关研究，同时为鉴定猪卵泡发育关键调控基因及其表达模式等相关研究内参基因的选择提供了理论依据。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
戴可可 李尚来 蔡玉 陈培勇 徐辉 吕文莉 赵冰茹 张艳丽
[目的]本试验旨在研究卵泡抑素（Follistatin， FST）基因对湖羊卵巢颗粒细胞（Granulosa Cells， GCs）增殖及凋亡的影响，为揭示FST基因对湖羊繁殖调控机理的影响提供理论基础。[方法]首先利用免疫组织化学方法检测FST在卵巢组织中的表达特征；然后利用EdU、qRT-PCR、WB、流式细胞等技术，分析FST基因过表达和干扰对湖羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响；最后通过RNA-seq分析FST基因干扰前后湖羊卵巢颗粒细胞的转录组表达差异变化。[结果]FST在湖羊卵巢颗粒细胞内高表达，干扰FST能抑制湖羊卵巢颗粒细胞增殖，降低细胞中PCNA基因的mRNA和蛋白水平，过表达FST则表现出相反的趋势；RNA-seq结果进一步显示干扰FST后颗粒细胞中细胞周期调控、卵母细胞减数分裂、孕激素分泌等相关功能及通路发生显著变化。[结论]FST可以促进湖羊GCs增殖，抑制GCs凋亡，影响卵母细胞分裂、生殖激素分泌相关基因的表达，进而参与湖羊卵泡发育进程。
关键词：
FST 湖羊 颗粒细胞 增殖 凋亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
祝启钊 谢晓磊 杨海霞 王晋 片慧芳 虞德兵
[目的]本研究旨在明确WNT6基因在蛋鸡卵泡发育过程中的生物学功能，并对其作用机制进行初步探究。[方法]本研究以300d海兰蛋鸡为研究对象，首先检测了WNT6 mRNA在不同组织中表达特征；同时对体外培养的鸡卵泡颗粒细胞进行敲减和过表达WNT6基因后，经CCK8检测细胞增殖和ELISA检测细胞培养基中的孕酮（P4）含量，以及荧光定量PCR检测卵泡刺激素受体（FSHR）和StAR、CYP11A1等基因表达量；另外，设立卵泡刺激素（FSH）浓度梯度处理体外培养的蛋鸡卵泡颗粒细胞，研究FSH对WNT6和WNT通路相关基因表达量的影响。[结果]结果显示，WNT6 mRNA在蛋鸡卵泡颗粒细胞内特异表达，且在处于卵泡选择关键时期的小黄卵泡颗粒细胞内具有最高表达水平；与对照组相比，过表达WNT6极显著促进颗粒细胞增殖（P＜0.01），极显著提高了颗粒细胞P4合成量（P＜0.01），并显著提高FSHR、CYP11A1、StAR、CYP19A1和HSD3B1基因表达量（P＜0.05）；与之相反，敲减WNT6后颗粒细胞增殖被抑制（P＜0.01），P4合成量极显著显著减少（P＜0.01），并显著降低FSHR、CYP11A1、StAR、CYP19A1和HSD3B1基因表达量（P＜0.05）；与此同时，本研究还发现，FSH呈剂量依赖性促进WNT6基因表达（P＜0.05），FSH还可显著提高颗粒细胞LRP1基因表达量（P＜0.05）并极显著降低FOXO1基因表达量（P＜0.01）。[结论] WNT6在蛋鸡卵泡颗粒细胞内特异性表达，且其表达水平受FSH调控，WNT6促进颗粒细胞增殖与类固醇激素合成，并提高颗粒细胞FSHR基因表达表达水平。本研究结果提示，WNT6协同FSH促进蛋鸡卵泡发育并调控蛋鸡卵泡选择
关键词：
WNT6 颗粒细胞 卵泡选择 卵泡刺激素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
林凯 虞德兵 解晓东 于敏莉 李东锋 杜文兴
【目的】卵泡抑素（Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ）能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积，可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞，阐明ｔＧＦ－β／ｓｍａｄ信号通路在Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化１４ ｄ的鸭胚为试验材料，采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞，待细胞长到７０％—８０％时，将培养基换成含有浓度分别为０、１、１０、１００ ｎＧ·ｍ ｌ－１的Ｆｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ培养基，继续培养３６ ｈ后，采用ＣＣＫ－８检测骨骼肌卫星细胞增殖情况；使用抗ｐａｘ７抗体染色，ｄａｐｉ染核，鉴定骨骼肌卫星细胞；采用ｒｅａｌ－ｔ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
林凯 虞德兵 解晓东 于敏莉 李东锋 杜文兴
【目的】卵泡抑素(Follistatin)能够调节骨骼肌肥大和脂肪沉积,可促进骨骼肌卫星细胞增殖。拟采用体外重组Follistatin处理增殖期的鸭骨骼肌卫星细胞,阐明TGF-β/Smad信号通路在Follistatin调节鸭骨骼肌卫星细胞增殖过程中的作用机制。【方法】以孵化14 d的鸭胚为试验材料,采用差速贴壁的方法分离骨骼肌卫星细胞,待细胞长到70%—80%时,将培养基换成含有浓度分别为0、1、10、100 ng·m L-1的Follistatin培养基,继续培养36 h后,采用CCK-8检测骨骼肌卫星细胞增殖情况;使用抗pax7抗体染色,DAPI染核,鉴定骨骼肌卫星细胞;采用real-t...
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