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[期刊] 林业科学研究
[作者]
陈段芬 彭镇华 高健
A new gene,named as NTZDS1(GenBank accession number:EU138882),was cloned from the alabastrum of Narcissus tazetta var.chinensis through RT-PCR.The sequence consists of 1 899 bp,has an open reading frame of 1 725 bp encoding a polypeptide of 574 amino acids.Homology analysis showed that the deduced N...
关键词：
中国水仙 ZDS基因 序列分析 组织表达
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
高志民 陈段芬 彭镇华
MADS-box基因在植物花发育中具有重要作用。采用RT-PCR和RACE技术,从中国水仙幼嫩花蕾中分离到了一个MADS-box同源基因,命名为NtMADS3(GenBank登记号:EU081900)。该基因cDNA全长980 bp;编码区编码241个氨基酸,具有典型的植物MADS-box基因结构。序列分析表明,NtMADS3编码的蛋白与其他植物的MADS-box蛋白有着较高的一致性,其中与石刁柏的AOM3一致性高达89.2%,与拟南芥的AGL6一致性为60.0%。系统进化树分析表明NtMADS3基因属于E类功能基因。组织表达模式分析显示,NtMADS3基因在中国水仙的开花期各器官及花的各部位...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林晓红 潘鹤立 潘东明
【目的】克隆中国水仙几丁质酶基因,分析其在水仙不同组织中的表达,为提高中国水仙的抗病性提供参考。【方法】利用RT-PCR技术克隆得到中国水仙几丁质酶基因,对其序列及编码氨基酸序列进行生物信息学分析,通过qRT-PCR分析该基因在感染基腐病、病毒病及褐斑病中国水仙根、叶中的表达。【结果】中国水仙几丁质酶基因的cDNA序列长768bp,编码230个氨基酸,其编码蛋白的分子质量为25.4ku,理论等电点为9.04,为不稳定蛋白,亲水性强,二级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。该基因编码的蛋白与荷兰芹几丁质酶蛋白的亲缘关系最近,隶属于糖苷水解酶19家族,与溶菌酶相似超家族基因的保守结构域类似,推测其可能是...
关键词：
中国水仙 几丁质酶基因 序列分析 抗病性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林江波 王伟英 李海明 吴水金 邹晖 李跃森 戴艺民
【目的】克隆中国水仙植物ＡＴ富集序列锌结合蛋白基因（ＮＴＰＬＡＴＺ１），为研究该基因的生物学功能奠定基础。【方法】利用ＲＡＣＥ技术克隆了ＮＴＰＬＡＴＺ１ＣＤＮＡ全长，利用生物信息学方法分析其核苷酸及氨基酸序列，将ＮＴＰＬＡＴＺ１与原核表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－３连接，转化ＢＬ２１并进行诱导表达，通过半定量ＰＣＲ分析用多效唑处理后该基因在中国水仙不同生长时期叶片中的表达情况。【结果】ＮＴＰＬＡＴＺ１的ＣＤＮＡ全长１ ０２４ＢＰ，包含１个６４２ＢＰ的完整阅读框架，编码２１３个氨基酸；编码蛋白具有ＰＬＡＴＺ ｓｕＰＥＲｆＡｍｉＬｙ蛋白保守区，与大豆（ＧＬｙＣｉＮＥ ｍＡＸ，Ａｉｉ１９３１４．１）ＰＬＡ．．．
关键词：
中国水仙 PLATZ 基因表达 锌指蛋白
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯莹 周翔 潘腾飞 郭志雄 潘东明
【目的】构建中国水仙ZDS反义基因表达载体,为进一步研究ZDS基因的功能、改良中国水仙花色、培育花色新品种提供参考。【方法】以中国水仙花为材料,采用RT-PCR方法克隆其ZDS基因,通过PCR、双酶切、连接等方法将ZDS基因反向互补插入到pCAMBIA1301双GUS植物表达载体中,构建ZDS反义基因表达载体P1301-ZDS,再通过冻融法将重组质粒P1301-ZDS导入根癌农杆菌。采用根癌农杆菌介导法将ZDS反义基因转化中国水仙带盘鳞茎,通过直接、间接、延迟筛选法3种方法对侵染的带盘鳞茎进行抗性筛选,采用直接筛选法和逐步降低选择压(质量浓度)方法对抗性鳞茎进行增殖和分化培养,采用GUS组织化...
关键词：
中国水仙 ZDS基因 载体构建 遗传转化
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
林睿涓 高建忠 金仕容 赵玉明 陈再忠
源自DEAD-box家族的Vasa基因是生殖细胞的分子标记之一。本研究克隆了七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi)Vasa基因的全长序列,并进行了不同组织的表达分析。结果表明:七彩神仙鱼Vasa基因c DNA序列共2 370 bp,其中5'UTR占123 bp,3'UTR为279 bp,ORF编码655个氨基酸,长1 968 bp。氨基酸序列同源性分析表明七彩神仙鱼的Vasa基因与尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的同源性最高。半定量分析表明,Vasa基因在成熟七彩神仙
关键词：
七彩神仙鱼 Vasa基因 克隆 表达分析
[期刊] 淡水渔业
[作者]
彭啸 温彬 陈再忠 高建忠
为了探究胸腺素基因在七彩神仙鱼(Symphysodon aquifasciatus)中的特征、进化和功能，基于转录组序列比对及生物信息学的方法对七彩神仙鱼的胸腺素进行了鉴定、基因与蛋白结构分析、系统发生分析，通过RACE技术克隆获得了七彩神仙鱼胸腺素基因全长，利用qRT-PCR技术研究其在各组织中的表达规律，通过病原感染实验，研究了七彩神仙鱼β-胸腺素基因在病原胁迫下的表达规律。结果显示，七彩神仙鱼的胸腺素基因鉴定为胸腺素β1型，命名为dfTβ。克隆结果显示，dfTβ的全长为779 bp, ORF区序列长度为303 bp,编码100个氨基酸，其5′-UTR为43 bp, 3′-UTR为433 bp,含有22个poly-A。系统发育进化分析结果显示，七彩神仙鱼β-胸腺素同尼加拉瓜湖始丽鱼β-胸腺素聚为一簇。qPCR结果显示，β-胸腺素在七彩神仙鱼各组织中均有表达，其中在肠、皮肤、鳃中表达最高，在头肾和脾中表达最低。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后，七彩神仙鱼皮肤、头肾、脾和肠中dfTβ均在短时间内显著上调，并随着时间出现先上升后下降的趋势，但各组织中上调倍数最高峰的时间不同。研究结果表明，dfTβ基因参与了七彩神仙鱼受病原刺激后的免疫应答，且表达模式不同，表明其可能在不同组织、免疫的不同阶段发挥不同的作用。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
马艳 朱馨蕾 杨长庚 张富春 尹伟伦
为深入研究胡杨的抗盐分子机制,并获得与之相关的抗逆基因,采用SMART技术构建了胡杨盐胁迫处理cDNA文库。经随机测序,得到一个编号为SSL061的EST序列,与欧美杨的脱水素基因有较高相似性,通过PCR快速扩增文库的方法获得了胡杨脱水素基因(Pedhn)。分析表明,该cDNA的长度为813 bp,拥有681 bp的开放读码框,共编码227个氨基酸。该序列包括两个重复的富含赖氨酸的K片段和由7个连续的丝氨酸残基组成的S片段,但是缺乏Y片段。RT-PCR结果表明,胡杨在未受胁迫的情况下脱水素基因的转录水平较低,而随着盐胁迫浓度的升高,脱水素基因的转录水平总体呈上升趋势。
关键词：
胡杨 cDNA文库 脱水素 盐胁迫
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张楠 温彬 金仕容 高建忠 陈再忠
以七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)为研究材料,克隆了sox9基因cDNA序列,全长为1348 bp,开放性阅读框长990 bp,编码334个氨基酸,且预测的氨基酸序列具有SOX家族的HMG高保守区域。在构建的系统进化树中,七彩神仙鱼与奥利亚罗非鱼的sox9氨基酸序列同源性达89%,表明sox9基因在进化地位中具有保守性。RT-PCR结果显示:sox9 mRNA在精巢、脑、肠、胃以及皮肤中均有表达,尤以精巢中的表达量最高,而在卵巢中未见表达。sox9基因在仔鱼出膜后第45天表达量最高,而在第50天的表达量最低。原位杂交结果显示:sox9出现在成熟精巢的支持细胞内,而在卵巢中未检测到。综上所述,sox9基因参与七彩神仙鱼精巢的发育过程,可能对其性腺功能的维持起作用。
关键词：
七彩神仙鱼 sox9 时空表达 原位杂交
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李科 何炎森 陈晓静
以多花水仙花瓣抑制消减杂交文库获得的羟甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGS)基因片段为基础,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从黄花水仙2号和金盏银台中各克隆一条HMGS基因,两基因均含有一个1413 bp的开放阅读框,编码470个氨基酸,但存在2个氨基酸差异.氨基酸序列分析表明:黄花水仙2号与葡萄、大豆、蓖麻和玉米HMGS基因的氨基酸相似系数分别为83%、82%、82%和81%.以水仙Actin基因为内参基因,采用荧光定量PCR方法分析HMGS基因在两品种的表达水平,结果表明:两品种HMGS基因的表达水平差异并不明显.
[期刊] 华北农学报
[作者]
于小清 陈段芬
为了探索植物凝集素在分子水平的作用机理,利用RT-PCR技术从中国水仙(Narcissus tazettavar.chinensis)金盏银台中克隆到一个新的编码凝集素的基因。序列分析与预测结果表明,该基因cDNA片段总长为609 bp,含有一个由25个氨基酸残基组成的信号肽和一个519 bp的完整开放阅读框;编码172个氨基酸,分子量为18 712.31 Da;前体蛋白在氨基酸水平上与杂种多花水仙凝集素、雪花莲凝集素、石蒜凝集素的一致性分别为83%,81%和77%;其二级结构以α-螺旋、不规则盘绕和延伸链为主;三级结构与雪花莲凝集素极其相似,是一种能与D-甘露糖特异性结合的B型凝集素。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚万龙 何玉英 刘萍 李健 王清印
应用ＲＡＣＥ克隆技术获得中国对虾（ＦＥｎｎＥＲｏｐＥｎＡＥｕｓ ＣｈｉｎＥｎｓｉｓ）ｐ３８ ＭＡｐＫ基因全长Ｃ ＤｎＡ序列，并对该序列进行分析。结果显示，中国对虾ｐ３８ ＭＡｐＫ基因全长为１５６３ ｂｐ，开放阅读框长１０９８ ｂｐ，５＇非编码区长１２２ ｂｐ，３＇非编码区长３４３ ｂｐ，将该基因命名为ＦＣｐ３８。氨基酸序列分析推测，该基因编码３６５个氨基酸，分子量为４１．７７ Ｋ ＤＡ，理论等电点为５．６８。同源性分析表明，ＦＣｐ３８基因与凡纳滨对虾和日本囊对虾的ｐ３８相似性最高，为９８％。通过比对发现，该基因除含ｐ３８家族特有的标志性ＴｈＲ－Ｇｌｙ－ＴｙＲ双磷酸化位点和底物结合位点ＡｌＡ－Ｔ．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
伍宝朵 胡丽松 范睿 杨建峰 郝朝运
【目的】克隆胡椒CBF1 (C-repeat-binding factor 1)基因,在低温耐受种质石南藤和低温敏感种质热引1号胡椒中,分析其组织表达模式和低温胁迫前后表达量差异,为胡椒抗寒分子机制研究提供基础。【方法】以胡椒组织总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增CBF1基因ORF,采用生物信息学软件分析CBF1基因编码蛋白特性和结构域,利用荧光定量PCR方法分析该基因的组织表达模式和低温胁迫条件下表达情况。【结果】在热引1号胡椒(低温敏感)和石南藤(低温耐受)中克隆出CBF1基因,分别命名为PnCBF1和PwCBF1。在2份种质中,该基因开放读码框长度分别为660和654 bp,预测蛋白质分子量分别为24.07和23.87kD,等电点PI为4.82。实时荧光定量PCR分析结果表明CBF1基因在石南藤的根组织中高量表达; CBF1基因在热引1号胡椒和石南藤中受低温诱导表达,且表达模式不同,低温胁迫各时期,CBF1基因石南藤的表达量都极显著高于热引1号胡椒。【结论】克隆获得PnCBF1和PwCBF1,其在热引1号胡椒和石南藤中都受低温诱导表达,在低温耐受种质石南藤中的表达量极显著高于低温敏感种质热引1号胡椒,且表达模式不同。本研究中胡椒CBF1基因的克隆和表达分析为胡椒CBF/DREB1低温调控途径研究和抗寒分子机制研究奠定了基础。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨扬 许炎坤 舒琥 李强 蓝召军 刘丽
采用同源克隆、生物信息学方法及荧光定量PCR(Real-time PCR)对缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因进行克隆,分析和组织表达状况研究。结果显示:缩骨鲫基因组MSTN基因全长4 737 bp,含有两个内含子和三个外显子;编码区长度为1 128 bp,编码375个氨基酸,包括信号肽(1aa23aa),TGF-β前肽保守区域(34aa256aa),TGF-β功能区(281aa375aa),保守的RXXR蛋白酶酶切位点以及C
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
吕素慧 郗琳 聂静 温超 袁存权 马男 赵梁军
以切花菊‘神马’（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ‘Ｊｉｎｂａ’）为材料，利用ｒａＣｅ技术与同源克隆方法获得菊花ＣｍＰｉｎ１基因全长，通过ｑｒｔ－ＰＣｒ技术比较ＣｍＰｉｎ１在不同组织器官的表达，同时对ＣｍＰｉｎ１响应外施ｎａａ和去顶进行研究。结果表明：１）ＣｍＰｉｎ１基因ｏｒｆ全长１ ７６１ｂＰ，编码５８６个氨基酸，跨膜域位于蛋白ｎ端与Ｃ端；通过蛋白序列比对分析，菊花ＣｍＰｉｎ１蛋白与百日草ＺｖＰｉｎ１蛋白相似性最高；亚细胞定位结果显示ＣｍＰｉｎ１位于细胞膜；２）对ＣｍＰｉｎ１表达分析表明，该基因在菊花茎部与芽部具有相对较高的表达量，同时，在离体茎段中的ＣｍＰｉｎ１受到生长素诱．．．
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