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[期刊] 水产学报
[作者]
孙犁 卢霞 孔杰 孟宪红 闫允君 李波波 仲伟鹏 陈宝龙 曹宝祥 罗坤 栾生
中国明对虾在养殖中表现出较强的竞争行为,对其生长性能产生了较大的影响,然而,到目前为止其发生的分子机制尚不清楚。钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)是高度保守的Ca~(2+)/钙调蛋白(calmodulin, CaM)依赖性丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,由催化亚基(CNA)和调节亚基(CN-B)组成,是参与许多重要生理过程的多功能蛋白质。CNB在Ca~(2+)/CaM的介导下主要在动物的中枢神经系统发挥重要作用。另外,前期通过比较转录组分析筛选出的与中国明对虾竞争行为相关的候选基因中包括CNB基因。为了进一步明确CNB在中国明对虾竞争过程中的作用,实验通过RACE技术克隆了中国明对虾CNB基因(FcCN-B)的全长cDNA序列,并利用Real-time PCR技术分析了其在高竞争能力组(HCG)和低竞争能力组(LCG)组间不同组织(神经节、心脏、胃、肝胰腺和肠)中的表达情况。结果显示,FcCN-B的cDNA全长序列为2 867 bp,包括95 bp的5′非编码区(UTR),540 bp的开放阅读框(ORF),和2 232 bp的3′UTR,其中ORF中具有4个保守的EF-hand Ca~(2+)结合结构域。蛋白质同源性分析显示,FcCN-B的氨基酸序列与其他物种具有较高的同源性(78.8%～93.8%),其中最高的是中华绒螯蟹(93.8%)和黑腹果蝇(90.5%);系统进化关系分析显示,脊椎动物和无脊椎动物分别独立为一支,且中国明对虾与中华绒螯蟹单独聚为一支,之后与黑腹果蝇聚类关系最近,提示FcCN-B在中国明对虾中可能具有与其在中华绒螯蟹和果蝇中相类似的功能。Real-time PCR定量结果显示,FcCN-B在HCG组的神经节中的表达极显著高于LCG组,而其在HCG组的心脏中的表达极显著低于LCG组。研究结果表明,calcineurin B基因在中国明对虾的竞争行为中可能发挥一定的作用,将为解析中国明对虾竞争行为的分子机制奠定重要的基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李波波 孔杰 卢霞 孙犁 隋娟 刘绵宇 罗坤 孟宪红 陈宝龙 曹宝祥 刘宁 栾生
为了评估中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)核心育种群体calcineurin B基因(FcCN-B)表达量的遗传变异水平，从2018年构建的G13代群体中随机选取32个家系，每个家系随机选择20尾个体，分别放入20个网箱中(每个网箱包括32尾虾)，限制饲料投喂量，利用Real-time PCR方法检测每尾虾神经节组织中FcCN-B基因的表达量。结果表明，FcCN-B基因在个体水平上表达明显呈正偏态分布，均值(8.25)大于中位数(6.95)，表明存在极大值个体；极差为43.48，最大值是最小值的44.48倍，个体间表达量的变异系数为66.55%。家系间FcCN-B表达量的变异系数相对较小(19.31%)，最大值仅为最小值的2.20倍。单因素方差分析表明，FcCN-B基因的表达量在家系水平上差异显著(P＜0.05)。利用个体动物模型结合系谱信息，获得FcCN-B基因表达量的遗传力估计值为0.60±0.13。这表明其在育种群体中具有较高的遗传变异水平，遗传改良的潜力大。研究结果为解析中国明对虾竞争行为的分子机理、改良其竞争性提供了重要的参考数据。
[期刊] 水产学报
[作者]
张沛东 张秀梅 李健 孟庆武
在(22±1)℃及高密度养殖环境条件下,观察中国明对虾、凡纳滨对虾仔虾的摄食、自残、运动、间隔及攻击和防御行为,并探讨充气对两种仔虾行为的影响。结果表明,两种仔虾都偏好卤虫幼体。中国明对虾仔虾自残行为高发,运动活跃,间隔行为明显,攻击频率高;凡纳滨对虾仔虾自残现象少,好静,可忍受身体的相互接触,攻击频率低。充气对两种仔虾的行为均有显著影响。
关键词：
中国明对虾 凡纳滨对虾 行为 充气
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李政道 李健 葛倩倩 王佳佳 何玉英 王培春
为研究钠/氢交换体(Na+/H+-exchanger,NHE)在中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)响应pH胁迫过程中发挥的作用,首先采用静水毒性实验方法确定了中国明对虾酸碱半致死pH,然后利用RACE技术克隆了中国明对虾Na+/H+-exchanger isoform 3(命名为FcNHE3)基因,并通过荧光定量PCR及RNA干扰技术分析了其在pH胁迫下的表达特征及功能。结果显示,72 h酸性半致死pH和碱性半致死pH分别为5.2和9.1。克隆获得FcNHE3基因(Gen Bank:MF373587)cDNA序列全长3508 bp,开放阅读框2805 bp,编码934个氨基酸,具有信号肽和12个跨膜结构域;蛋白同源分析发现,FcNHE3与青蟹(Carcinus maenas)同源性最高,达到74%;系统进化分析显示,FcNHE3与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)和青蟹亲缘关系最近。荧光定量PCR分析表明,FcNHE3基因在鳃组织中表达量显著高于其他组织(P
[期刊] 水产学报
[作者]
邓康裕 史晓丽 张莹雪 孟宪红 孔杰 罗坤 栾生
采用ＲＡＣＥ技术克隆获得中国明对虾ＣＡｓｐＡｓＥ２基因ＣＤＮＡ序列全长，并对该序列进行分析。结果显示，中国明对虾ＣＡｓｐＡｓＥ２基因全长为１５１７ ｂｐ，开放阅读框长９２４ ｂｐ，５＇非编码区长７８ ｂｐ，３＇非编码区长５１５ ｂｐ，命名为ＦＣＣＡｓｐ２。推测该基因编码３０７个氨基酸，预测分子量为３４．２１ ｋｕ，理论等电点为７．６２。同源性和系统进化分析发现，ＦＣＣＡｓｐ２基因与凡纳滨对虾ＣＡｓｐＡｓＥ２和斑节对虾ＣＡｓｐＡｓＥ的相似性分别为８８％和８０％，与其他节肢动物ＣＡｓｐＡｓＥ家族基因聚为一类。荧光定量ＲＴ－ｐＣＲ结果显示，ＦＣＣＡｓｐ２基因在肝胰腺中的相对表达量最高，在肌肉中表达量．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
曹家旺 孟宪红 孔杰 史晓丽 栾生 罗坤 董丽君 陈宝龙
为了研究对虾免疫致敏过程中Dscam基因的表达规律,实验采用同源克隆和RACE技术获得了中国明对虾FcDscam基因cDNA全长序列,并对该序列进行生物信息学分析。结果显示,中国明对虾FcDscam基因的cDNA全长为6624 bp,其中包括171bp的5′端非编码区,459 bp的3′端非编码区,开放阅读框的长度为5994 bp,编码1996个氨基酸。推测该基因编码的蛋白含有一个信号肽、10个Ig结构域、6个FNⅢ功能区、1个胞质尾区和1个跨膜结构域。同源性分析及系统进化分析表明,FcDscam基因与节
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王修芳 刘庆慧 吴垠 黄倢
ｃｏａｔ－ε基因表达的蛋白是组成ｃｏＰⅠ的ｃｏａｔｏｍｅｒ复合体的一个亚基，为获得中国明对虾（ＦｅｎｎｅｒｏＰｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）ｃｏａｔ－ε基因全长序列，采用ｃＤｎａ末端快速扩增（ｒａＰｉＤ ａｍＰｌｉＦｉｃａｔｉｏｎ ｏＦ ｃＤｎａ ｅｎＤ，ｒａｃｅ）技术，扩增出ｃｏａｔ－ε基因的３端和５端，测序结果经Ｄｎａｍａｎ比对拼接得出ｃｏａｔ－ε基因全长，基因全长１４０２ ｂＰ，５非编码区（ｕｔｒ）８４ ｂＰ，３＇非编码区（ｕｔｒ）３１０ ｂＰ，开放阅读框１００８ ｂＰ，预测编码３３５个氨基酸，其中，第２３０–３００的氨基酸属于ｔＰｒ超家族，ｓｉｇｎａｌ Ｐ ３．０ ｓｅｒｖｅｒ预测．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
姚万龙 何玉英 刘萍 李健 王清印
为初步研究中国明对虾MKK4的生物学功能,采用RACE技术克隆获得中国明对虾MKK4基因全长c DNA序列,并对该序列进行分析。结果显示,中国明对虾MKK4基因全长为2 064 bp,开放阅读框长1 221 bp,5'非编码区长214 bp,3'非翻译区长629 bp。将该基因命名为Fc MKK4。推测该基因编码406个氨基酸,预测分子量为45.94 ku,理论等电点为8.50。同源性和系统进化分析发现Fc MKK4与肩突硬蜱和印度跳蚁的同源性分别为80%和78%,与其他节肢动物MKK4聚为一支。荧光定量RT-PCR结果表明,Fc MKK4基因在肌肉中的相对表达量最高,其次为肝胰腺。氨氮胁迫后...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚万龙 何玉英 刘萍 李健 王清印
采用ＲＡＣＥ技术克隆获得中国明对虾（ＦＥｎｎＥＲｏｐＥｎＡＥｕｓ ＣｈｉｎＥｎｓｉｓ）丝裂原活化蛋白激酶激酶３（ＭＫＫ３）基因全长Ｃ ＤｎＡ序列，并对该序列进行分析。结果表明，该基因全长为１４３４ ｂｐ，开放阅读框长１０１１ ｂｐ，５′非编码区长３３ ｂｐ，３′非编码区长３９０ ｂｐ，将该基因命名为ＦＣ ＭＫＫ３。推测该基因编码３３６个氨基酸，分子量为３７．８９ Ｋ Ｄ，理论等电点为６．０８。同源性和系统进化分析表明，ＦＣ ＭＫＫ３基因与丽蝇蛹集金小蜂（ｎＡｓｏｎｉＡ ｖｉｔＲｉｐＥｎｎｉｓ）和地中海实蝇（ＣＥＲＡｔｉｔｉｓ ＣＡｐｉｔＡｔＡ）的相似性分别为６９％和６８％，与其他节肢动物ＭＫＫ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李旭鹏 孔杰 孟宪红 栾生 罗坤
Bantam能够调控细胞增殖、细胞凋亡等过程,影响生物的免疫过程。本研究利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对感染WSSV的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肝胰腺和鳃组织内bantam表达水平进行检测,发现感染WSSV后6、12、24和48 h,中国明对虾肝胰腺中的bantam表达水平分别是对照组的(0.16±0.03)(P<0.05)、(0.63±0.26)、(0.32±0.06)(P<0.05)和(0.41±0.13)倍;中国明对虾鳃中的bantam表达水平分别是对照组的(0.30±0.17)(P<0.05)、(1.88±0.26)(P<0.01)和(1.94±0.07)(P<0.05)倍;中国明对虾鳃中泛素缀合酶E2的表达水平分别是对照组的(0.22±0.05)、(1.34±0.38)、(4.29±0.52)(P<0.01)和(1.28±0.79)倍。研究表明,bantam和泛素缀合酶E2的表达都受WSSV侵染的影响,可能与中国明对虾和WSSV之间的互作相关。但bantam和泛素缀合酶E2表达水平的变化是对虾抵抗WSSV侵染过程的免疫反应,还是宿主基因被病毒胁迫后的结果,需要进一步验证。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
关广阔 刘庆慧 黄倢
ＴｅＴｒａｓｐａｎｉｎ－３是四跨膜蛋白超家族的一员，在信号转导和免疫等过程中起到重要作用。本研究将中国明对虾（Ｆｅｎｎｅｒｏｐｅｎａｅｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）ＴｅＴｒａｓｐａｎｉｎ－３（ＦｃＴ＿３）的大胞外环区（Ｌａｒｇｅ ｅｘＴｒａｃｅＬＬｕＬａｒ Ｌｏｏｐ，ＬｅＬ）基因片段克隆，与原核表达载体ｐ ＢａＤ／ｇⅢａ连接，获得重组表达载体ｐ ＢａＤ／ｇⅢａ－Ｔ３Ｌ，转化入大肠杆菌Ｔｏｐ １０中，用Ｌ－阿拉伯糖（Ｌ－ａｒａＢ）诱导并经钴离子亲和层析纯化得到重组蛋白。质谱分析显示，纯化的重组蛋白为ＦｃＴ＿３。用地高辛将ＦｃＴ＿３Ｌ标记并与ＷｓｓＶ作用，Ｆａｒ－ＷｅｓＴｅｒｎ分析显示，ＦｃＴ＿３Ｌ与．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
关广阔 刘庆慧 黄倢
Tetraspanin-3是四跨膜蛋白超家族的一员,在信号转导和免疫等过程中起到重要作用。本研究将中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)Tetraspanin-3(Fc T3)的大胞外环区(Large extracellular loop,LEL)基因片段克隆,与原核表达载体p BAD/gⅢA连接,获得重组表达载体p BAD/gⅢA-T3L,转化入大肠杆菌TOP 10中,用L-阿拉伯糖(L-Arab)诱导并经钴离子亲和层析纯化得到重组蛋白。质谱分析显示,纯化的重组蛋白为Fc T3。用地高辛将Fc T3L标记并与WSSV作用,Far-western分析显示,Fc T3L与...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张沛东 张倩 张秀梅 涂忠
在实验室内营造半精养、精养养殖模式,研究不同养殖模式下底质类型(未添加底质、水泥底、全沙底、沙泥底和砂砾底)对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)存活、生长及行为特征的影响。结果表明,半精养模式下,中国明对虾的存活率和蜕皮频率在各底质处理组间均无显著差异(P>0.05);而精养模式中未添加底质处理组实验虾的存活率和蜕皮频率最低,沙泥底处理组存活率和蜕皮频率最高,分别达到100%和12.9%/d。两种养殖模式下,底质类型对中国明对虾的特定生长率(SGR)均有显著影响(P<0.05),其中半精养模式沙泥底处理组实验虾的SGR最高,是未添加底质处理组的1.39倍;而精养模式...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李少飞 何玉英 李吉涛 李健 刘萍 葛倩倩
利用RACE技术克隆获得中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)天门冬氨酸转氨酶GOT基因(Fc GOT)。Fc GOT基因c DNA全长为1 910 bp,其中,开放阅读框1 284 bp,编码427个氨基酸。同源性分析表明,中国明对虾天门冬氨酸转氨酶GOT氨基酸序列与其他节肢动物高度保守,与克氏原螯虾(Procambarus clarkii)和桔粉蚧壳虫(Planococcus citri)的同源性分别为78%和73%。系统进化分析表明,Fc GOT基因氨基酸序列与克氏原螯虾GOT聚为一支。组织表达分析发现Fc GOT基因在肝胰腺、鳃、血细胞、肌肉、心脏、淋巴中均有表...
[期刊] 水产学报
[作者]
孙杰 王宝杰 李晓华 孙姝娟 刘梅 蒋克勇 王雷
利用3′和5′RACE技术从中国明对虾血细胞中克隆了一个酚氧化酶原基因FCproPO,FCproPO基因cDNA全长为2311bp,其中开放阅读框2061bp,编码687个氨基酸,预测分子量为78.71ku。推测的序列与凡纳滨对虾同源性为84%,与日本囊对虾同源性为71%。RT-PCR实验结果表明,FCproPO在血细胞中的相对表达量最高,在心脏和精巢中几乎不表达。序列分析发现FCproPO含有两个保守的铜离子结合位点;进化分析发现FCproPO与斑节对虾、日本囊对虾、凡纳滨对虾等海水虾的酚氧化酶原亲缘关系最近。该基因在被鳗弧菌和对虾白斑病毒(WSSV)感染后的对虾肝胰腺中的表达量显著增加,并...
关键词：
中国明对虾 酚氧化酶原 基因克隆 表达
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