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[期刊] 水产学报
[作者]
王宝杰 刘梅 蒋克勇 张国范 王雷
中国明对虾的血浆脱盐处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同pH范围IPG胶条、脱盐方式、上样量等进行了优化,并分别利用硝酸银和胶体考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析,采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对主要的高丰度蛋白点进行了质谱鉴定。结果显示,中国明对虾血浆在pH 4～7范围、18 cm的2-DE胶上得到了很好的分离,上样量为150μg左右,采用银染可以获得较好的分析胶图谱;而上样1 000μg左右,采用胶体考染方法能获得较好的制备胶图谱;通过MALDI-TOF/TOF MS鉴定的11个最主要的高丰度蛋白点都是血...
[期刊] 水产学报
[作者]
胡秀彩 沈晓静 吕爱军 孙敬锋 YEONG Yiksung 宋亚娇 李莉 孔祥会
为了建立鱼类皮肤蛋白质组双向电泳图谱及质谱鉴定，以鲫为实验动物，采用蛋白双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术，进行鲫皮肤的蛋白质组学研究。结果表明，当上样量为８００μｇ，采用１８ ｃＭ、ｐ Ｈ３～１０ Ｉｐｇ胶条，等电聚焦８０ ０００ ＶＨ，２－ＤＥ图谱检测为２１４个皮肤蛋白点，匹配率达８８％；对其中３１个蛋白点进行ＭＳ／ＭＳ鉴定为２２种蛋白，包括肌球蛋白、肌动蛋白、角蛋白、锌指蛋白５８５Ｂ、效应蛋白ＲＡＢ１５、卷曲螺旋结构域蛋白１６８、ＮｃＫ１相关蛋白，肌酸激酶、烯醇化酶、丙酮酸脱氢酶、腺苷酸激酶同工酶等；进行蛋白功能聚类（ｇＯ）分．．．
关键词：
鲫 皮肤 蛋白质组 双向电泳 质谱
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王宝杰 刘梅 蒋克勇 张国范 王雷
应用超速离心技术对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血浆样品进行处理,比较去除和未去除高丰度蛋白血浆的双向凝胶电泳(2-DE)图谱。结果表明:对虾血浆高丰度蛋白经去除后,血浆样品中的低丰度蛋白得到较好的分离和浓缩。未处理样品的2-DE图谱分离的蛋白质170个,而去除高丰度蛋白后血浆2-DE图谱上分辨率增高,分离出蛋白质点520个,一些低丰度蛋白质被有效分离出来。研究证实,超速离心技术可有效去除对虾血浆高丰度蛋白(血蓝蛋白),提高低丰度蛋白的检出敏感性,为对虾等甲壳动物的血浆蛋白质组学研究提供了基础保障。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘志远 励建荣 李学鹏 李婷婷 王彦波 黄和 陈华健 陆维克
为了探索并建立中国明对虾的肌肉蛋白双向电泳体系,实验将中国明对虾的肌肉组织溶解处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同的裂解液配方、IPG胶条的pH范围及其长度、等电聚焦程序、上样量等进行了优化,并分别利用银染和考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析。结果显示,中国明对虾肌肉蛋白的等电点主要位于4～7之间,裂解液中添加硫脲、CHAPS、DTT等,可以增加对虾肌肉蛋白的提取率;采用17 cm,pH 4～7的中型IPG胶条,主动水化上样120μg,适当延长除盐时间和等电聚焦时间,搭建盐桥,采用浓度为12.5%的二向分离胶和硝酸银染...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 周宇 谭芸 甘西
以吉富罗非鱼为研究对象,通过对其肝脏蛋白质的提取方法、等电聚焦程序和IPG胶条pH选择这几个关键环节的优化探索,建立了吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术体系。结果表明:①采用液氮研磨法比匀浆器匀浆法提取蛋白质的效果更好;②聚焦时延长除盐时间至10 h,同时升高电压至8000 V,可获得清晰的电泳图谱;③通过双向电泳检测到吉富罗非鱼肝脏的蛋白点主要分布于pH值4.0~7.0之间。该技术体系的建立为今后开展罗非鱼蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。
关键词：
吉富罗非鱼 肝脏 蛋白质组学 双向电泳
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
薛宝贵 黄智慧 周洲 马爱军
通过对表皮蛋白质提取方法、不同裂解液配方、等点聚焦程序和上样量等条件的对比试验,建立及优化了大菱鲆表皮组织蛋白质的双向电泳体系。试验采用改良的TCA/丙酮和超声波提取相结合的方法提取大菱鲆表皮组织的全蛋白,裂解液配方根据Bio-Rad公司推荐的进行调整,使用17cmpH4~7的IPG胶条被动水化上样,上样量为250μg。等点聚焦程序采用30V线性6h、250V线性2.5h、500V线性1.5h、1000V快速2h、4000V线性3h、8000V快速3h、8000V线性1h、500V24h,凝胶银染后用I mage Master2D Platinum7.0软件进行分析,最终得到较满意的双向电泳图...
关键词：
大菱鲆 表皮组织 蛋白质 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
董婧 逯晓萍 吕二锁 薛春雷 李俊伟
为了优化玉米叶片双向凝胶电泳技术条件，通过比较３种总蛋白提取方法对玉米双向电泳结果的影响，并对蛋白质上样量、ＩＥＦ等电聚焦条件及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶浓度等参数进行探索、优化；结果发现，与酚提取法和磷酸缓冲液法相比，采用改进的ＴＣＡ／丙酮法提取总蛋白操作简单、方便，所得的２－ＤＥ图谱中蛋白质点数量多、背景清晰，是一种适用于提取玉米苗期叶片总蛋白的有效方法；同时筛选出：第一向ＩＥＦ等电聚焦样品上样量为８００μｇ，聚焦条件为２０ ０００ Ｖ／ｈ，在浓度为１２．５％的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，能够在１７ Ｃｍ的ＩＰｇ胶条上获得背景低、分辨率较高、重复性好的双向电泳图谱，该优化体系适用于玉米叶．．．
关键词：
玉米 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李丽杰 苏宏 马怀宇 吕德国
为开展山定子(Malus baccata Borkh.)根系蛋白质组学研究,以当年生15片真叶的山定子实生苗白色幼嫩根系为试材,采用TCA-丙酮沉淀法、酚抽提法和Trizol抽提法3种方法提取其总蛋白质,并对样品上样量、IPG胶条的p H值范围和等电聚焦参数进行优化,建立适用于山定子根系的双向电泳技术体系。结果表明:采用Trizol抽提法提取的蛋白质产率最高,可达3.15mg·g-1FW,且其SDS-PAGE图谱明显优于其他两种方法 ;选用800μg的上样量,17 cm p H值4~7的IPG胶条和改进后的等电聚焦程序所得到的二维电泳图谱蛋白点最多,最清晰,分辨率最高。
关键词：
山定子 根系 蛋白质 提取 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
石海波 王云生 冯勇 高聚林 白海 苏二虎 张来厚 赵瑞霞 刘志雄 黄灵忠 姜丽丽
为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同p H值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用p H值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800μg效果最佳,采用p H值4~7的I...
关键词：
玉米 籽粒 蛋白组学 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王珊珊 郝宇涵 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。
关键词：
黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
王璐 杜国强 师校欣
双向电泳技术是蛋白质组研究的核心技术之一,本文对其原理、发展概况、优缺点及其在园艺植物蛋白质组学研究中的应用做了介绍,并对其今后的发展做了展望。
关键词：
双向电泳 蛋白质组学 园艺植物
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李丽杰 苏宏 马怀宇 吕德国
为开展山定子（Ｍａｌｕｓ ｂａｃｃａｔａ ｂｏｒｋｈ．）根系蛋白质组学研究，以当年生１５片真叶的山定子实生苗白色幼嫩根系为试材，采用ｔｃａ－丙酮沉淀法、酚抽提法和ｔｒｉｚｏｌ抽提法３种方法提取其总蛋白质，并对样品上样量、ｉＰＧ胶条的Ｐ ｈ值范围和等电聚焦参数进行优化，建立适用于山定子根系的双向电泳技术体系。结果表明：采用ｔｒｉｚｏｌ抽提法提取的蛋白质产率最高，可达３．１５ＭＧ·Ｇ－１ＦＷ，且其ｓＤｓ－ＰａＧＥ图谱明显优于其他两种方法 ；选用８００μＧ的上样量，１７ ｃＭ Ｐ ｈ值４～７的ｉＰＧ胶条和改进后的等电聚焦程序所得到的二维电泳图谱蛋白点最多，最清晰，分辨率最高。
关键词：
山定子 根系 蛋白质 提取 双向电泳
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王立 张硕 侯喜林 李英
以不结球白菜品种‘矮脚黄’的雌蕊为材料,从蛋白质提取、IEF程序、IPG胶条pH范围和染色方法等方面进行比较,利用Tris-HCl提取方法,使用pH 4～7 IPG胶条和改进的等电聚焦程序,改良银染方法,建立了适用于不结球白菜雌蕊蛋白质的双向电泳技术体系,并使用该体系对开花前2 d的花蕾雌蕊和开花2 d后的雌蕊蛋白质进行比较分析,获得187个差异蛋白点。
关键词：
不结球白菜 雌蕊 蛋白质 双向电泳
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐湛宁 李福贵 陈杰 蒋霞云 邹曙明
为建立并优化草鱼鳃蛋白质组双向电泳的技术体系,实验将草鱼鳃经裂解处理后,通过固相p H梯度胶条进行一向等电聚焦和SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白分离,对不同的裂解液配方、蛋白纯化方法、IPG胶条的分离范围、上样量和染色方法等进行了探索和优化,并应用lmage Master 2D Platinum 7.0软件对电泳图谱进行了分析。结果表明:采用裂解液中添加DTT来取代Tris和TBP、选择分离范围为pH4-7的IPG胶条和150μg的主动水化上样,电泳结束后对凝胶进行硝酸银染色,获得了覆盖范围广、低背景
[期刊] 林业科学研究
[作者]
索慧英 郑密 卢晗 曲冠证 李莹
[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4～7内,选用24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。
关键词：
小黑杨 蛋白质 双向电泳 优化
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