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[期刊] 中国水产科学
[作者]
安贤惠 梁建国 李卫国 徐春花 吕毅 王旭 董靖 张崇星 张克云
以水产病害的病原菌为目标菌,从中国对虾(Penaeus chinesis)体液中分离筛选抗菌肽,通过Sephadex G-50、RP-HPLC等分离纯化技术,得到一种抑制水产病原菌的抗菌肽PC-V-2。经初步鉴定,该抗菌肽具有广谱抗性,不仅抗鲁克氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri),而且对金黄色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subttilis)等革兰氏阳性菌,大肠杆菌(Escherichia coli)等革兰氏阴性菌和白色念珠菌(Candida albicans)等真菌也有较强的抗性。另外,该抗菌肽还有一定的抑制凝血的活性,但没有检...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
钟雅 付康 陈正望 陆婕
以野生家蝇干燥幼虫为原料,在常规的生化提取基础上,通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)法进一步纯化,并结合电洗脱技术,利用灵敏的杀菌活性检测手段,从家蝇抗菌肽总组分中分离纯化出1个20 ku的抗菌肽,对苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌均有杀灭作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
梁英 关瑞章 黄文树
为分离日本鳗鲡脾脏中的抗菌肽,实验采用10 ku和3 ku切向流中空纤维柱对脾脏醋酸粗提物进行分级分离,并结合阳离子交换层析和反相高效液相层析技术对小于10 ku和小于3 ku 2部分样品分别进行分离纯化。结果显示,2种分子量截留纤维柱超滤获得了大于10 ku、小于10 ku和小于3 ku 3部分样品。小于10 ku和小于3 ku蛋白样品抗菌活性较大于10 ku样品强。对小于10 ku样品经阳离子交换层析以及采用pH 9缓冲液进行反相高效液相层析分离纯化,获得一个抗菌肽,质谱分析其分子量为1 391.82 u;对小于3 ku样品经阳离子交换层析并采用pH 9和pH 2两种缓冲液进行反相高效液相...
关键词：
日本鳗鲡 脾脏 抗菌肽 分离纯化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
邬晓勇 何钢 颜军 郭晓强 苟小军
对传统抗生素的活性测定方法进行了比较及改进,建立了蛙皮抗菌肽的活性测定方法——TTC微量稀释法;利用SephadexG25凝胶层析分离抗菌肽粗品获得一个活性组分命名为G5,利用TTC微量稀释法测定活性组分G5抑制大肠杆菌的MIC是80μg/mL、抑制铜绿假单胞菌的MIC是20μg/mL、抑制金黄色葡萄球菌的MIC是80μg/mL;活性组分G5再经凝胶HPLC分离纯化获得两个活性组分Ⅰ和Ⅱ,组分Ⅰ和组分Ⅱ再分别经过RP-HPLC分离纯化获得两个色谱纯的活性组分命名为RanaⅠ和RanaⅡ。
关键词：
抗菌肽 活性筛选 分离纯化
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李联泰 安贤惠 胡江 许宁 张晓磊 王静
以黄鳝皮肤黏液为材料,通过Sephadex G-50凝胶层析和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析,分离纯化了具有抗菌和镇痛活性的多肽MAS-Ⅳ-4,用Tricine-SDS-PAGE测得其分子量为10.4kD,用显微熔点仪测得其熔点为208~211℃。用抑菌圈法测定其抑菌活性,结果表明,MAS-Ⅳ-4对嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强的抑菌效果。此外,每只注射0.75ml以上的MAS-Ⅳ-4样品液能显著提高小白鼠的痛阈值。MAS-Ⅳ-4还具有微弱的溶血活性和丝氨酸蛋白酶抑制活性。
关键词：
黄鳝 皮肤黏液 抗菌肽 痛阈值 溶血活性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭娜 肖向红 徐义刚 柴龙会 张晶钰
【目的】利用毕赤酵母菌真核表达系统重组表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST,分析评价dybowskin-1ST的抑菌活性。【方法】采用TRIzol法提取蛙皮总RNA,经RT-PCR扩增获得抗菌肽dybowskin-1ST基因,将目的基因克隆到毕赤酵母菌分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K-1ST。经电转化将pPIC9K-1ST转入到毕赤酵母菌GS115中,获得高效表达dybowskin-1ST的重组菌株。以甲醇诱导重组菌株,上清液经SDS-PAGE检测表明有目的蛋白dybowskin-1ST分泌表达。目的蛋白经Ni-agarose色谱柱分离纯化后,对大肠埃希氏菌、...
关键词：
东北林蛙 抗菌肽 毕赤酵母 抑菌活性
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡瑞萍 张铎 张丽萍 张根伟 张蕾 赵宝华
为了分离纯化及鉴定枯草芽孢杆菌BSD-2代谢产物中抗菌肽,采用盐酸沉淀、Sephadex G-50层析以及反相HPLC对其进行分离纯化,并利用Tricine-SDS-PAGE、MAIDL-TOF-MS、红外光谱和核磁共振技术对其分子量、氨基酸序列以及结构进行初步解析。结果显示该抗菌肽是由29个氨基酸组成,分子量为3 514 Da,等电点为10.46。红外光谱和核磁共振分析其结构中含有-CH2-、-CH3、-OH、-NH2、-CH、-CO-以及苯环等官能团。
[期刊] 水产学报
[作者]
张东玲 关瑞章 黄文树 熊静 徐继松 宋宝东
为了能够快捷地分离纯化出单一的抗菌肽,实验采用不同pH值(离子交换流动相pH3.0、4.0、5.0;反相液相层析流动相pH 2.0、4.5、7.0)缓冲液,不同色谱柱(离子交换和凝胶过滤层析柱分别与反相液相层析柱)联用对日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果进行了比较,并分析了琼脂板扩散法和微孔液体培养法检测抗菌活性的优缺点。结果显示:pH 4.0缓冲液为最佳离子交换流动相,蛋白提取率为16.43%,得到2个洗脱峰;反相液相层析3种pH缓冲液分离效果均不理想,凝胶过滤层析柱与反相液相层析柱联用能明显改善日本鳗鲡肝脏抗菌肽分离纯化效果,洗脱峰数量较多,峰形单一且尖锐狭窄,基线平而低。琼脂板扩散法检测抗菌...
关键词：
日本鳗鲡 抗菌肽 pH 色谱柱 抗菌活性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
赵侠 李燕 孙慧敏 郑昌亮 宋益善
食源性二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV）抑制肽和抗氧化肽分别有助于清除体内自由基和调节机体血糖。为实现脱脂南极磷虾粉的高值化利用，为糖尿病治疗寻找新方法，从脱脂南极磷虾粉酶解产物中制备DPP-IV抑制肽和抗氧化肽。使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶水解脱脂南极磷虾粉，探究时间与水解度、活性、产率的关系，并分离纯化多肽，最后通过分子对接确定抑制作用位点。结果表明，酶解液经超滤、Sephadex G15分离纯化和液相-质谱联用技术鉴定后，得到了4条具有DPP-IV抑制和抗氧化作用的肽，氨基酸序列分别为WPPLSPFRCPR、IPDWFLNRQ、FLWLKKTPLPL和DTVPWFPR。其中IPDWFLNRQ具备较高DPP-IV抑制活性，DPP-IV抑制活性IC_(50)值为（0.616±0.097) mmol/L；WPPLSPFRCPR具有较高的抗氧化活性，DPPH EC_(50)值为(0.0983±0.011) mmol/L，ABTS EC_(50)值为(0.116±0.073) mmol/L。分子对接结果表明这4种肽主要通过氢键与DPP-IV活性中心及其以外的位点相结合，从而达到抑制DPPP-IV活性的作用。本研究基于脱脂南极磷虾粉制备食源性DPP-IV抑制肽和抗氧化肽，以期为南极磷虾粉的开发利用提供理论依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
邱宏端 徐姗楠 林娟 陈朝洋
耐盐红螺菌的无菌代谢产物经CM-SephadexC-50弱阳离子交换色谱柱分离,获得3个蛋白吸收峰:PSB2-1’峰,PSB2-2’峰,PSB2-3’峰。其中PSB2-1’峰对病原菌具有拮抗作用。PSB2-1’峰组分样品经透析脱盐,后进行SDS-PAGE电泳检测,其冷冻干燥样品进行毛细管电泳与MALDI-TOF质谱鉴定,结果表明PSB2-1’峰的抑菌蛋白物质已达到较高纯度,其准确分子量为9290Da。耐盐红螺菌拮抗物质具有较好的热稳定性,对紫外线不敏感,但对酸碱性较敏感;用蛋白酶处理,其抑菌活性受枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响。耐盐红螺菌产生的拮抗物质可初步归属于小分子热稳定肽(SH...
关键词：
耐盐红螺菌 拮抗物质 分离纯化 特性
[期刊] 华北农学报
[作者]
张双凤 张爱民 赵钢勇 张克宏
从棉花植株根部筛选的108株芽孢杆菌中,通过对棉花黄枯萎主要病原菌大丽轮枝菌拮抗效果的复筛,分离到一株LC-105菌株,其抑菌圈达到20 mm以上;本研究从该菌株的发酵代谢产物中,分离出活性拮抗物质,进一步通过DEAE-Sephadex A-50离子交换层析和Sephacryl-S100凝胶层析对其代谢产物进行了分离纯化,证明该拮抗物质为一种蛋白质,最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳证实了所分离物质的纯度达到电泳纯。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
熊清权 李志成 童伟 郑晓莹 苏晋文 葛武鹏 任娇
【目的】分离纯化牛乳酪蛋白酶解物,检测酶解物及其分离组分的抑菌活性,并制备抗菌肽乳基料。【方法】从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及木瓜蛋白酶中筛选一种蛋白酶水解牛乳酪蛋白,将其酶解产物经大孔吸附树脂和凝胶过滤色谱分离、纯化后,以对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)为指标,分析酶解物和分离组分的抑菌活性。【结果】(1)木瓜蛋白酶水解牛乳酪蛋白4.5h,其酶解物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑制作用。(2)大孔吸附树脂将牛乳酪蛋白酶解物分离成4个组分,其中以体积分数75%乙醇洗脱组分的抑菌作用较强。(3)凝胶过滤色谱将体...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈武 彭曙光 周清明 黎定军 罗宽
采用75%乙醇沉淀、阴离子交换色谱层析和阳离子交换色谱层析等方法,分离并纯化侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterospours)2-Q-9菌株外泌抗菌肽BL2Q9。结果表明,BL2Q9的相对分子质量为7 800,等电点为10.2。Edman降解测序发现其N末端封闭,串联质谱测序结果表明其与细菌第Ⅳ类鞭毛合成蛋白pilQ的前体蛋白以及转录抑制子CodY蛋白的部分序列相似,但与已知抗菌肽的序列相似性较低。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王秀英 邵庆均 黄磊
抗菌肽广泛存在于自然界中,在寄主先天性免疫机制中占有重要地位。尽管已经对其他节肢动物(包括昆虫和螫肢动物)体内的大量抗菌肽进行了研究鉴定,对甲壳动物体内分离出来的抗菌肽的研究报道却较少。Penaeidins是从南美白对虾血液中分离出来的一组抗菌肽。本文介绍了Penaeidins的结构、抗菌属性、免疫功能以及受到微生物刺激时Penaeidin基因的表达和Penaeidins的分布,并且对Penaeidins以及其他抗菌肽在水产动物疾病防治中的应用前景进行了展望。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵晓蕾 田甜 胡远亮 赵述淼 梁运祥
通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。
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