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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 张伟  胡新德  王久涛  宋玲珍  李玲玲  陈树林  赵善廷  
【目的】比较中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾T(HEK293T)细胞的迁移能力,筛选适用于细胞骨架形态和外源基因对细胞迁移影响研究的细胞系。【方法】通过免疫荧光组织化学比较CHO和HEK293T细胞骨架的形态差异,通过延时成像和划痕试验比较细胞迁移能力,通过免疫印迹比较2株细胞系细胞骨架基因的相对表达,并从细胞骨架差异和结构基因的选择性表达方面解释细胞迁移能力的差异。【结果】CHO和HEK293T细胞系的细胞骨架在形态上存在较大差异,HEK293T细胞系的核质比是CHO细胞的2.25倍;CHO细胞比HEK293T细胞的迁移能力强,是HEK293T细胞的2.9倍;2种细胞内α-Tubulin/...
[期刊] 华北农学报  [作者] 雷宇华  闫芝芬  王立安  魏建昆  
以芽鞘为试材,对水稻珍汕97A(雄性不育细胞质,CMS)及珍汕97B(正常细胞质,N)的细胞质质量参数粘滞度进行测定。结果显示,珍汕97A的粘滞度低于97B的粘滞度。其同核异质体、基因型为珍汕 97(共含有 5种细胞质即正常细胞质 N,及 T、D、G、W 4种 CMS)的粘滞度大小顺序为N>W>G>D>T。用微丝、微管的抑制剂细胞松驰素B(CB)、秋水仙素处理后,细胞质的粘滞度明显下降。在相同条件下,粘滞度下降到同一程度所需抑制剂的浓度也呈现N>W>G>D>T趋势,说明细胞质粘滞度的大小与细胞骨架有关。由此推断,细胞质粘滞度差异与细胞骨架的含量、分布及细胞骨架基因的特异性有关。
[期刊] 水产学报  [作者] 李琳  严兴洪  
应用解聚微丝和微管细胞骨架的特异性药物,结合组织化学染色方法观察了坛紫菜壳孢子早期发育阶段中的细胞极性形成过程。观察结果表明,坛紫菜壳孢子从放散入水作变形运动到萌发成二细胞的孢子苗共有两次细胞极性形成过程:第一次发生在坛紫菜壳孢子作变形运动期间(形成前后轴);第二次发生在壳孢子拉长呈椭圆形的一细胞萌发体期间(形成细胞的上下轴)。在这两次细胞极性形成过程中,壳孢子外的粘性多糖,尤其是硫酸化的酸性粘多糖主要聚集在运动壳孢子的后缘和壳孢子萌发体的下方,说明粘性多糖有协同形成、稳定壳孢子细胞极性的作用。刚放散的壳孢子经高浓度的细胞骨架抑制剂处理后,壳孢子的正常运动被阻止,从而影响壳孢子的第一次细胞极性...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 姚雅琴  李蓓  张英利  牛娜  张改生  
以T型细胞质雄性不育(CMS)、化学杂交剂(CHA)诱导的雄性不育及成熟可育的花粉粒为材料, 用考马斯亮蓝R250显示细胞内微丝的方法,观察分析了3种类型花粉粒内微丝结构的变化。结果表明,成熟可育 花粉粒内微丝多以多聚体的形式存在,呈连续排列的网状结构且充满整个花粉粒;而其他两种不育花粉粒内,连续 排列的网状结构被破坏而呈颗粒状或短棒状结构,收缩集中分布于花粉粒中部,花粉粒周缘缺乏,且T型细胞质雄 性不育系的内微丝含量较化学杂交剂诱导的雄性不育花粉粒的少。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 武发菊  尚勇良  安芳兰  董文教  宋玉霞  董金杰  陈苗苗  牟克斌  黄银君  刘学荣  
【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 黄荣峰  王学臣  娄成后  
[期刊] 华北农学报  [作者] 王立安  马春红  闫芝芬  魏建昆  
用细胞骨架抑制剂秋水仙素(colchicine)、细胞松弛素B(cytochalasinB,CB)处理玉米同核异质体芽鞘,可使其细胞质的粘滞度下降,说明细胞质粘滞度与由微管、微丝等构成的细胞骨架密切相关;同核异质体四种细胞质粘滞度的强弱顺序为N>S>C>T,在相同条件下,使粘滞度下降到同一程度所需的抑制剂浓度也为N>S>C>T,说明粘滞度越大,细胞骨架受到抑制剂影响的程度越轻。造成同核异质体四种细胞质粘滞度存在明显差异的原因可能与其细胞骨架的特异性密切相关。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 刘彬   陆情梅   杨永鲜   周明帅   温晓艳   赵佳福  
【目的】探明miR-7与CTSK基因相互作用关系及其对贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响,为贵州黑山羊优良品种保藏、选育与开发利用提供依据。【方法】采用在线数据库筛选miR-7与CTSK基因3'UTR的结合靶点,通过将CTSK基因3'UTR插入双荧光素酶报告系统中进行互作位点检测;采用CCK-8和划痕试验检测miR-7是否靶向调控CTSK基因影响贵州黑山羊卵巢颗粒细胞的增殖和迁移;过表达miR-7后采用RT-qPCR检测其对促增殖蛋白PCNA、抗凋亡蛋白BCL2和促凋亡相关蛋白BAX、caspase-3、caspase-9表达水平的影响。【结果】成功构建CTSK基因3'-UTR 2个预测靶点的野生型和突变型双荧光素酶报告载体;双荧光素酶试验结果表明CTSK基因3'UTR区的2个预测靶位点均受miR-7调控;CCK-8和细胞划痕结果表明:转染miR-7试验组的卵巢颗粒细胞增殖和迁移能力均显著高于对照(NC)组;RT-qPCR结果表明:上调miR-7能极显著上调PCNA和BCL2的表达,抑制BAX、caspase-3和caspase-9的表达。【结论】miR-7可以靶向结合CTSK的3'UTR区2个靶位点并极显著抑制CTSK基因的表达;过表达miR-7可以显著促进贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖和迁移能力,并促进增殖标志基因、抗凋亡基因的表达和抑制促凋亡相关基因的表达。研究结果可为进一步研究miR-7靶向调控CTSK表达影响贵州黑山羊繁殖性能的分子机制提供理论依据。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 袁安文  许道军  王乃东  周卫国  薛立群  
将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%~92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9)μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8)μm和28 d(2 088.9±297.7)μm移植体(P
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 夏国良  
利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎,服龄为11.5日和13.5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12~14d。5d后换一次培养液,以后每2d换1次。培养8d后,13.5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞,而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞(直径<25μm)紧密地分布在皮质的外侧,而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11.5日龄胚胎卵巢经过10~12d培养,没有形成上述分布规律,所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。...
[期刊] 水产学报  [作者] 王著希  周胜  黄友华  王劭雯  黄晓红  周永灿  秦启伟  
在病毒感染宿主细胞过程中,病毒利用宿主细胞骨架如微丝、微管等完成进入、运输和释放等过程。为分离鉴定石斑鱼虹彩病毒SGIV囊膜蛋白,实验应用去污剂溶解病毒囊膜,然后结合1-D-SDS-PAGE切胶分离和LC-MS/MS质谱鉴定两种方法进行检测,除了病毒编码的囊膜蛋白外,还发现7种宿主细胞来源的蛋白,包括细胞骨架微丝肌动蛋白actin等,由此推测这些宿主蛋白是与病毒纯化过程中共纯化获得。鉴于actin在病毒感染中发挥着重要的作用,进一步通过蛋白印迹、免疫电镜实验验证了actin与病毒共纯化,揭示actin是一
[期刊] 西南农业学报  [作者] 高洪  赵宝洪  杨桂梅  杨建发  严玉霖  邹丰才  陈培富  
为研究内毒素(Endotoxin,ET)对体外培养的仓鼠肾细胞膜活性影响及阳离子A(Cation A,CA)对其的保护效应。随机将体外培养的仓鼠肾细胞(BHK-21)分为:对照组(Ⅰ组)、ET处理组(Ⅱ组)和ET+CA组(Ⅲ组),采用微量滴定法和定磷法,第3、6、12、24小时测定细胞膜上磷脂酶A2(PLA2)和ATP酶(ATPase)的活性。结果表明,II组中PLA2活性在整个实验过程中均显著高于I组(P<0.01或P
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 邬静  袁慧  彭双清  
为研究大鼠卵巢颗粒细胞(GC)的分泌功能,用氯丙嗪染毒体外培养的大鼠GC,采用MTT法检测细胞相对活力,ELISA法检测收集培养液中孕酮(P)和雌二醇(E2)的含量,半定量RT-PCR检测激素分泌相关调控基因FSHR、StAR、P450scc和P450arom mRNA的表达,免疫细胞化学染色法检测细胞中特异卵泡刺激素受体的表达。结果表明:经0.1、1.0和10.0μmol/L氯丙嗪染毒24 h后,与对照组相比,细胞相对活力分别为87.95%、83.96%和74.48%,E2的分泌量和StAR mRNA相对表达水平分别从对照组的6.16 pg/μg、2.014显著下降到3.70 pg/μg、0...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 王妍  赵晓娥  杨培先  张仕强  苏利红  马保华  
为了探讨小鼠卵巢颗粒细胞体外生长的特点及增殖的调控因素,分别添加2μg/mL胰岛素、50ng/mL FSH和20 ng/mL EGF的培养液培养小鼠卵巢颗粒细胞,每隔24 h对细胞进行计数,研究其对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。此外,还对培养过程中出现的卵巢颗粒细胞集落进行了AKP染色和C-kit免疫组化染色鉴定。结果显示,在培养的第4天添加EGF组和FSH组与对照组相比均具有显著的促增殖作用(P0.05);卵巢颗粒细胞集落经AKP染色和C-kit免疫组化染色均呈阳性。提示EGF和FSH对小鼠卵巢颗粒细胞具有促增殖效应,小鼠卵巢颗粒细胞具有干细胞的...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 吴俊波  杨璐茜  曹立朋  田宇  杜宁宁  金一  
【目的】探究获能和低温冷冻对猪精子细胞骨架中微管蛋白和肌动蛋白表达量的影响。【方法】利用SDS-PAGE、Western blot技术,分析获能和低温冷冻(-80和-196℃)后猪精子总蛋白质种类以及猪精子细胞骨架微管蛋白和肌动蛋白表达量的变化。【结果】低温处理后,猪精子总蛋白质的种类与新鲜精子相比发生变化,而获能处理后几乎没有差异。低温冷冻导致猪精子细胞骨架微管蛋白和肌动蛋白的表达量较新鲜精子下降,且-196℃冷冻组肌动蛋白的表达量要略高于-80℃冷冻组,但二者微管蛋白的表达量基本没有差异。获能处理后猪精子肌动蛋白表达量略有下降,而微管蛋白表达量基本没有变化。【结论】低温冷冻处理对猪精子总蛋...
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