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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马冬梅 白俊杰 简清 劳海华 叶星 罗建仁
为进一步开展重组中华鲟(Acipenser sinensis)半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin功能分析和应用研究,进行了诱导方式、诱导时间和培养基pH值对该重组菌的表达量的影响研究。结果表明,用直接诱导法,在诱导72 h、pH值为6.5、甲醇终浓度为0.5％的条件下,对重组酵母进行诱导最为合适,重组cystatin表达量可达每升培养基215 mg,约占培养基上清总蛋白量的76.3％。经离子交换层析法纯化,重组cystatin的纯度可达94.2％。生物活性检测试验表明。该方法提取的重组cystatin对木瓜蛋白酶的活性具有明显的抑制作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李英华 白俊杰 简清 叶星 李新辉 罗建仁 梁旭方
取本室构建的鲤生长激素毕赤酵母工程菌GS115 (pPICZαA -GH) ,甲醇诱导 ,SDS -PAGE检测 ,证明重组鲤生长激素 (RecombinantCarpGrowthHormone ,rcGH)在酵母中得到分泌表达。重组酵母菌生长曲线显示 ,细胞从培养第 8小时进入对数生长期 ,至 32hOD660 升至峰值 11.5 ,此后OD660 缓慢下降。在以 10 0 %甲醛按 0 .5 %添加量诱导至 72h、pH为 6 .0时 ,rcGH表达量最高。凝胶扫描分析 ,分泌表达的rcGH占上清总蛋白的 36 .4 1% ,表达量为 30 0～ 4 0 0mg/L发酵液。经离子交换层析法...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘战民 陆兆新 吕凤霞 别小妹 赵海珍
采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件。结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/m g;经Sephadex G 75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/m g;最佳离子交换条件为:0~0.5 m o l/L N aC l(缓冲体系为N oA c-HA c,pH 5.8)溶液线性洗脱、Sepharose F ast F low离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 ...
关键词：
毕赤酵母 原果胶酶 分离纯化
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈忠军 蔡恒 路福平 李正英 杨志华
将带有monellin基因的重组分泌型表达载体pETMO转入大肠杆菌BL21(DE3)。得到重组工程菌株BLC01。研究不同的表达条件对甜蛋白表达水平的影响,得到优化发酵条件:装液量为50ml/250ml三角瓶,当培养液OD值达0.8时,添加诱导剂IPTG至浓度为0.9mM,32℃诱导5h。此时,甜蛋白monellin表达量可高达细菌可溶性蛋白的45.2%。超声破碎细胞后,利用热处理和酸处理结合的方法有效去除宿主蛋白,透析后利用Sephadex G- 50进行柱层析,得到纯化重组甜蛋白monellin。monellin基因在重组大肠杆菌中的表达产物具有生物活性。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李燕妹 吕峰 许雅楠 汤陈鹏
采用酵母发酵结合酶法纯化石莼功能性低聚糖.以蛋白脱除率、低聚糖保留率和低聚糖含量为指标,探讨影响石莼功能性低聚糖脱蛋白、去除游离糖的主要因素,并采用U_(10)*(108)拟水平均匀试验设计优化其关键工艺参数.结果表明,酵母发酵结合酶法纯化石莼功能性低聚糖的最佳工艺条件组合为:酵母接种量7%、发酵时间4.0 h、酸性蛋白酶使用量250 U·g(-1)、酶解液pH 4.0、酶解温度45℃,同时结合150 r·min(-1)的摇床转速、30℃的发酵温度、2.5 h的酶解时间,所得纯化后的石莼功能性低聚糖样液中
关键词：
酵母发酵 酶法 纯化 石莼功能性低聚糖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
柴丽红 李积胜 车红荣
为了对富铬酵母的工业化生产提供参考依据,用活性干酵母为菌种制备富铬酵母,通过单因素试验和正交试验,以富铬酵母中有机铬总量为指标,确定了富铬酵母的优化发酵条件为:Cr3+质量浓度300μg/mL,接种量120 mL/L,pH 6.5,培养时间28 h,装液量280 mL/L,发酵温度28℃。
关键词：
活性干酵母 无机铬 有机铬 发酵条件
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张秀丽 杨啸 刘庆慧 马璀艳 黄倢
在pBAD/gIIIA-VP37重组表达载体构建的基础上,研究发酵工艺参数对重组WSSV-VP37(rVP37)蛋白表达量的影响,并对重组质粒的稳定性和重组菌的生长进行研究。结果表明,pBAD/gIIIA-VP37表达的rVP37以包涵体形式存在于菌体中,发酵温度及诱导时间影响rVP37蛋白表达和菌体产量,以37℃诱导5h最佳。重组质粒在宿主菌中具有良好的分离稳定性,WSSV-VP37基因的插入对宿主菌的生长规律影响不大。
关键词：
发酵条件 重组VP37 蛋白表达
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
何磊 刘均忠 秦胜利 于佳民 孙谧
以26S rDNA法将实验室保藏的1株产虾青素的海洋酵母菌YS-185鉴定为粘红酵母。以海洋酵母菌YS-185为试验菌株,运用摇瓶发酵优化的方式,探索培养基组分和发酵工艺条件对该菌发酵的影响。实验结果表明,该菌生长最适培养基组分为葡萄糖8 g/L、蛋白胨8 g/L,最适生长起始pH值为5.5、转速220 r/min、接种量8%、温度20℃;虾青素合成的最佳培养基组分葡萄糖8 g/L、蛋白胨8 g/L,最佳虾青素合成条件:pH 5.5,转速220 r/min,接种量8%,培养温度25℃。发酵优化后的虾青素产量2.670μg/ml,较优化前的1.572μg/ml提高了69.8%。温度对酵母菌的生长...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李立恒 王征 谢达平
为探明蜜环菌深层发酵液中多糖的成分,从多糖的提取、SephadexG-200凝胶柱层析等方面进行了多糖的纯化,从多糖水解液的纸层析、多糖的质谱、多糖的红外光谱等方面研究了多糖的结构.结果表明蜜环菌深层发酵液中多糖是由-D-吡喃葡萄糖和β-D-吡喃葡萄糖通过糖苷键连接而成,由于其中具有与天麻相似的β-D-吡喃葡萄糖苷,因而具有与天麻相类似的药理作用和临床疗效.
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王泽举 刘延琳 刘爱国 韩娜
利用WL营养琼脂培养基,对葡萄酒自然发酵过程中,不同阶段分离的408株酵母菌进行了初步鉴定。结果表明,供试酵母菌被归入8个属的9个种:酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、季也蒙有孢汉逊酵母Hanseniaspora guilliermondii、东方伊萨酵母Issatchenkia orientalis、毕赤克鲁维酵母Pichia kluyver、膜璞毕赤酵母Pichia membranefaciens、美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima、红冬孢酵母Rhodosporidium muc...
关键词：
葡萄酒 酵母鉴定 自然发酵
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
罗倩 黎继烈 王卫 郭璐 朱晓媛
对重组毕赤酵母发酵产青霉素G酰化酶(PGA)的培养条件进行探讨。依据基础盐摇瓶发酵培养基,通过单因素试验考察了接种量、甘油浓度、pH以及诱导过程中氨水浓度、甲醇浓度等因素对PGA表达的影响。并采用Box-Behnken实验设计进行因素组合优化。结果与意义:最佳发酵条件为:甘油浓度40 g/L、氨水浓度0.1%、甲醇浓度1.0%、pH 5.6、接种量10%,在此条件下PGA酶活力达到8 680±12 U/L。本实验结果对下一步利用发酵罐进行重组毕赤酵母扩大培养有借鉴作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
宋育阳 白稳红 刘延琳
利用WL营养琼脂培养基,对宁夏御马葡萄酒厂的神索葡萄自然发酵过程中不同阶段分离得到的105株葡萄酒相关酵母进行初步鉴定和聚类,进而对代表性菌株进行26S rDNA D1/D2区的序列分析。结果表明:供试酵母菌株经分类鉴定应归入4属5种,分别是葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、毕赤克鲁维酵母Pichia kluyveri、假丝酵母Candida zemplinin、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae和巴氏酵母Saccharo-myces pastorianus,分别占分离菌株总数的3%、8%、1%、1%和87%;非酿酒酵母non-Saccharom...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张滨 马美湖 杨华
优化了红平红球菌(Rhodococcus erythropolis)产微生物絮凝剂(MBF)的发酵条件,并对该微生物絮凝剂(MBF)进行了分离纯化。结果表明:以红平红球菌为出发菌株,以廉价的蔗糖和尿素作为碳源和氮源,发酵培养液的配方为蔗糖30.0 g/L,尿素7.5 g/L,CaCl20.5 g/L,MgSO41.0 g/L,NaCl 0.2 g/L,pH 9,在30.0 L发酵罐中,以发酵温度35℃,搅拌转速350 r/min,发酵时间96 h的条件下发酵,其发酵液中絮凝率为89.31%;发酵液经离心后,用0.5%三氯甲烷∶正丁醇(4∶1)处理,利用不同浓度乙醇分级沉淀,初步分离得到粗制MB...
关键词：
红平红球菌 微生物絮凝剂 分离纯化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张晓 夏延斌
利用乳酸菌和酵母菌复合发酵芹菜汁制备发酵母液,对植物乳杆菌、短乳杆菌和鲁氏酵母3种菌的混合培养条件进行优化,分析碳、氮源种类及比例、培养温度、pH、接种比例及接种量对3种菌在芹菜汁中的生长情况。结果表明,较优培养条件为发酵母液的起始pH 6.5,发酵母液中添加乳糖与酵母膏的质量比5∶1,培养温度30℃,植物乳杆菌、短乳杆菌和鲁氏酵母按三角瓶液态培养的纯菌种体积比2∶2∶1,接种量7%。在此条件下,乳酸菌活菌数可达1.78×108cfu/mL,酵母菌活菌数可达1.22×108cfu/mL。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
许佳惠 尹雅洁 李欣悦 柳凯 梁运祥 赵述淼 胡远亮
将Brevibacillus brevis US575角蛋白酶基因kerUS进行密码子优化,并在毕赤酵母GS115中表达,以提高角蛋白酶产量。结果表明:优化的基因可在毕赤酵母中成功表达,重组角蛋白酶的分子质量约30 ku,最佳反应条件为pH 9.5和60℃,1 mmol/L的Mn~(2+)、Ba~(2+)对角蛋白酶活性有促进作用。此外,重组角蛋白酶易降解干酪素和β角蛋白(羽毛粉),酶促反应最大速度v_(max)=0.019 g/(L·min),K_m=4.64 g/L,比活力=440 U/mg。研究获得的产角蛋白酶重组毕赤酵母具有较好的应用前景。
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