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[期刊] 水产学报
[作者]
刘红柏 张颖 杨雨辉 叶继丹 孙大江
采用饱和硫酸氨分步沉淀和Sephadex G-200凝胶层析的方法,首次分别纯化制备了健康非免疫状态下中华鲟(Acipenser sinensis)、史氏鲟(Acipenser schrenckii)和达氏鳇(Huso dauricus)的血清免疫球蛋白(Ig),并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白免疫印迹(Western blotting)及免疫琼扩实验等方法对其Ig及Ig亚单位的分子量和部分特性进行了分析。PAGE及SDS-PAGE的结果显示:史氏鲟,中华鲟和达氏鳇IgM的相对分子量分别为867kD,896kD和924kD;3种鲟鱼Ig...
关键词：
史氏鲟 达氏鳇 中华鲟 免疫球蛋白
[期刊] 水产学报
[作者]
林天龙 陈强 俞伏松 杨金先 龚晖 林能锋 许斌福 伊光辉
采用饱和硫酸铵分步盐析法结合柱层析提取、纯化欧洲鳗血清免疫球蛋白 (Ig) ,实验证实欧洲鳗Ig主要分布在硫酸铵饱和度 30 % - 5 0 %的区间内 ;Sephacryl-S2 0 0进一步提纯的Ig主要存在于第一个蛋白峰 ;而Sepharose - 4B柱层析提纯的Ig则存在于第二个蛋白峰 ;DEAE - 5 2离子交换柱层析可进一步纯化Sepharose -4B柱层析的产物 ;ELISA和Western -blot分析证实上述提取物具有抗体的免疫学活性 ;SDS -PAGE分析纯化的Ig ,显示欧洲鳗Ig重链约为 6 8kD、轻链约为 2 6kD。
关键词：
欧洲鳗 免疫球蛋白 纯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘云 孙峰 姜国良
运用Sephacryl S-200凝胶层析和HiTrap rProtein ASepharose亲和层析2种方法对牙鲆(Paralichthys olivaceus)血清免疫球蛋白进行分离纯化,结果表明,牙鲆免疫球蛋白分布于33%~50%的硫酸铵饱和溶液中,其中45%的分离效果最好。凝胶层析和亲和层析样品均出现2个蛋白峰,用还原SDS-PAGE检测确定牙鲆免疫球蛋白存在于第2个蛋白峰中。牙鲆免疫球蛋白重链分子量约为75.4 kD,轻链分子量约为29.9 kD和28.2 kD,推测牙鲆血清免疫球蛋白的分子量为836 kD。制备了兔抗牙鲆免疫球蛋白多克隆抗体,免疫双扩散法检测多克隆抗体效价为1∶3...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
许娜娜 钱冬 赵海泉
分离纯化了花鲈(Lateolabrax japonicus)血清免疫球蛋白(Ig),并对其特性进行初步研究与分析。采用山羊-IgG(Goat-IgG)免疫花鲈并制备血清,分别采用硫酸铵分级沉淀法、A蛋白亲和层析法及Goat-IgG偶联亲和层析法提取花鲈Ig,对提取组份进行了蛋白浓度测定、间接ELISA效价测定、SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果表明,采用硫酸铵分级沉淀法提取的花鲈Ig主要集中在硫酸铵饱和度为30%~50%的区间,其中45%饱和度硫酸铵富集的的抗体比活最高,ELISA效价为2×104/mg蛋白,比血清ELISA效价提高2.2倍;A蛋白柱亲和层析可得单一蛋...
关键词：
花鲈 免疫球蛋白 纯化 亲和层析
[期刊] 水产学报
[作者]
许国晶 绳秀珍 唐小千 邢婧 战文斌
采用饱和硫酸铵分步盐析结合Sephacryl S-300凝胶过滤层析及DEAE Sepharose离子层析法,对牙鲆皮肤黏液中的免疫球蛋白(Ig)进行了分离纯化,并通过SDS-PAGE及Western-blotting技术对纯化蛋白的部分特性进行了分析。结果表明,30%、50%饱和硫酸铵分步盐析可以去除牙鲆黏液中除Ig外的很多杂蛋白,得到粗提黏液Ig;再经Sephacryl S-300纯化,Ig纯度较高,其中含有72和26 ku的条带;DEAE Sepharose层析法可进一步纯化Sephacryl S-300柱层析的产物,所提取黏液Ig经SDS-PAGE检测,只含有72和26 ku两个条带,...
[期刊] 水产学报
[作者]
林娟娟 杨金先 陈强 俞伏松 刘晓东 林天龙
应用亲和层析技术提纯欧洲鳗鲡免疫球蛋白(Ig),并对欧鳗Ig的结构和抗原性进行分析。层析结果表明:Ig蛋白呈现一个锐形曲线,蛋白峰与抗原活性峰高度重叠。SDS-PAGE分析表明:欧鳗Ig重链分子量为68kD,轻链有3条,分子量分别为21kD、23kD和26kD。凝胶电泳结果显示:在非变性非还原条件下,欧鳗Ig有790kD和350kD2条蛋白带,在变性非还原条件下有790kD、593kD和350kD3条蛋白带。Western-blotting试验证实:兔抗欧鳗Ig能识别欧鳗Ig的多种不同聚合体和Ig的重链,但不能识别Ig的轻链。结论:欧鳗Ig在自然条件下可能以四聚体和二聚体的形式存在,这与其它硬...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
林娟娟 杨金先 陈强 刘晓东 俞伏松 林天龙
应用亲和层析技术提纯欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白(Ig),并在结构和抗原性上进行分析。柱层析结果表明,欧洲鳗黏膜Ig经亲和层析分离后出现1个锐形的蛋白峰,蛋白主要分布于收集物的第2-6管,蛋白峰和抗原活性峰重叠。凝胶电泳结果显示,在变性还原条件下,欧洲鳗黏膜Ig重、轻链分子量分别为68kD和26kD,还有1条分子量约为18kD的蛋白带;在非变性非还原条件下,黏膜Ig只有1条蛋白带,分子量约为350kD,略呈扩散拖带现象,这一结果提示自然条件下欧洲鳗黏膜Ig可能以二聚体形式存在;在变性非还原条件下,黏膜Ig有3条蛋白带,分子量约为350kD、138kD和135kD,...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张年国 张颖 曲秋芝 孙大江
采用组织匀浆、饱和硫酸铵分步沉淀和Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析的方法提取和纯化施氏鲟卵黄蛋白,并对其性质进行了研究。结果表明:采用50%和70%饱和度的硫酸铵分步沉淀与Sephadex G-100凝胶层析相结合的方法,可以获得一种卵黄蛋白纯品。Native-PAGE和SDS-PAGE分析表明,该纯化蛋白纯度为100%,由一种同源亚基组成,其亚基的相对分子质量约为30 kD。油红O、免疫印迹(Western-blot)和罗丹明B染色均为阳性,表明该蛋白为施氏鲟卵中的一种脂磷蛋白。
关键词：
施氏鲟 卵黄蛋白 分离纯化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李斌 杨军 黄建华 韩文利 何洪超
通过在杂交鲟(达氏鳇(Huso dauricus)♀×史氏鲟(Acipenser schrenckii)♂)((50.26±0.55)g)饲料中分别添加2000 mg/kg的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、光合细菌和酵母多糖三种微生态制剂,研究其对杂交鲟的生长指标、血液指标和消化酶活性的影响。结果显示,与对照组相比,添加微生态制剂明显提高了杂交鲟的存活率,其平均增重率分别提高了31.95%、21.06%、45.09%,饵料系数分别降低了22.04%、7.50%、28.49%,蛋白质转化效率分别提高了22.90%、13.76%、26.61%;各项血液指标得到明显优化,其中,红...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王改玲 骆彦萍 孙宝剑 徐镇 许巧情 聂品
用RACE-PCR和RT-PCR方法获得鳜(Siniperca chuatsi)膜结合型免疫球蛋白D(Membrane-bounded IgD,mIgD)重链基因的全长cDNA序列。鳜mIgD的cDNA全长为3358bp,其5l非编码区包含30bp,3l非编码区包含337bp;开放阅读框包含2991bp,编码996个氨基酸,基因结构为VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。鱼类IgD恒定区氨基酸序列比对结果显示,鳜mIgD存在半胱氨酸和色氨酸保守位点,与其他鱼类IgD的相似性在37%～72%之间。用邻接法(Neighbor Joining)构建的鱼类免疫球蛋白基因的系统发...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨桂文 安利国 温武军 王长法
以正常生活状态下的非免疫鲤为材料，采用盐析、高速离心、柱层析等方法，从鲤胆汁与血清中分离提取了免疫球蛋白，并对它们的理化性质和免疫原性进行了比较研究。结果表明：鲤胆汁中存在的免疫球蛋白的某些理化性质同血清中免疫球蛋白的相似，并且二者具有相同的免疫原性。由此推断，鲤胆汁中免疫球蛋白的来源可能与血清中免疫球蛋白具有一定的同源性。
关键词：
鲤,免疫球蛋白,血清,胆汁
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张颖 刘晓勇 曲秋芝 孙大江
采用形态学和多变量形态度量方法,对养殖施氏鲟(Acipenser schrenckii)、达氏鳇(Huso dauricus)及其杂交种(大杂交)(达氏鳇(♀)×施氏鲟(♂))的形态差异和判别进行了分析。结果表明:(1)养殖施氏鲟、达氏鳇及大杂交头部形态差异明显,口唇形状、吻须形状及长度、鳃盖膜形态差异显著。在7项可数性状中,大杂交胸鳍、侧骨板、腹骨板和鳃耙数偏母本性状(HI>55),臀鳍条数明显地偏父本性状(HI<55),背骨板数偏离双亲性状,背鳍条数为中间性状。可数性状的平均杂交指数为74.97,总体上偏向于母本。可数性状中鳃耙数可作为判断三者所属的指标;(2)单因子方差分析显示,大杂交与...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周丽 战文斌 宋微波 俞开康
对引起牙鲆体表溃烂的病原纤毛虫—指状拟舟虫诱导牙鲆免疫反应产生的免疫球蛋白IgM进行分析 ,结果表明 ,病原纤毛虫免疫注射牙鲆 ,可诱导牙鲆发生特异性免疫反应 ,产生抗体。牙鲆抗指状拟舟虫血清的凝集试验 ,发现纤毛虫停止游动并发生虫体聚集 ;抗血清经与标准分子量和鼠IgM单克隆抗体以及对照血清的SDS -PAGE电泳比较分析证明 ,牙鲆抗指状拟舟虫血清免疫球蛋白IgM重链分子量为 710 0 0 ,轻链分子量为 2 30 0 0 ;IgM为四聚体 ,分子量为 752 0 0 0。
关键词：
牙鲆 指状拟舟虫 纤毛虫 免疫球蛋白
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
冯建军 郭松林 林 鹏
通过RTGPCR技术克隆欧洲鳗鲡(Anguillaanguilla)Ig轻链基因c DNA全长序列,命名为Aa Ig L,其全长为1016bp,开放阅读框为714bp,编码238个氨基酸.将该基因片段与p ETGhis载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDSGPAGE和Westernblotting分析,结果表明新增的27ku蛋白条带与预期值相符,且与兔抗欧洲鳗鲡Ig M血清发生特异性显色反应,证实了Aa Ig L基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;实时荧光定量PCR检测结果发现:Aa Ig L在欧洲鳗鲡各组织中均有表达,其中脾脏的表达量最高,肾脏和心脏...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王双艳 王磊 陈张帆 崔忠凯 周茜 陈松林
本研究根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)基因组数据库中预测的多聚免疫球蛋白受体(Polymeric immunoglobulin receptor, pIgR)序列,通过PCR和RACE技术获得了半滑舌鳎pIgR基因cDNA,全长为1419 bp,开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,5′UTR区域为109 bp,3′UTR区域为290bp。保守结构域分析显示,半滑舌鳎pIgR蛋白包含1个信号肽,2个免疫球蛋白功能域(Ig-like domain, ILD)和1个跨膜结构域。经蛋白序列同源比对和系统进化树分析,发现半滑舌鳎pIgR与大菱鲆(Scophthalmus maximus)和牙鲆(Paralichthy solivaceus)的pIgR亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析显示,pIgR基因在健康半滑舌鳎的不同组织中均有表达,在鳃中表达较高,在肌肉中表达最低。经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)病原感染刺激后,pIgR基因在半滑舌鳎的5个组织(肝脏、脾脏、肾脏、肠和鳃)中均呈先上升后下降的趋势,其中,在脾脏和鳃中48 h达到最高值,在肝脏、肾脏和肠中72 h达到峰值。与内脏组织不同的是,pIgR基因在皮肤中呈一直上升的趋势。上述结果表明,pIgR基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌的免疫应答中发挥重要作用。
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