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[期刊] 水产学报
[作者]
杨志刚 姚琴琴 成永旭 施秋燕 杨青 何杰 马明君 王瑶 常东
根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ６去饱和酶基因（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＪＸ９４６４３４）及菁夜蛾去饱和酶基因（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＫＪ６２２０５５．１）的保守区设计引物，通过逆转录Ｐｃｒ以及ｒＡｃｅ技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ６去饱和酶基因ＦＡＤ６－ｂ的全长序列。经序列分析，中华绒螯蟹ＦＡＤ６－ｂ ｃＤｎＡ全长为２ ３１０ ｂＰ，其中开放阅读框（ｏｒＦ）为１ ３２６ ｂＰ，共编码４４２个氨基酸（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＫＰ８７６０５８），理论分子量为５０．８６ Ｋｕ，理论等电点为８．４７，ＦＡＤ６－ｂ基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ６去饱和酶基因的一致．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王瑶 杨志刚 郭子好 姚琴琴 曾奇韬 杨筱珍 成永旭
根据陆地蟹RXR基因保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹RXR基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明,中华绒螯蟹RXR cDNA全长1 517 bp,编码433个氨基酸。经BLASTn和BLASTx分析表明,中华绒螯蟹RXR基因的氨基酸序列与陆地蟹RXR基因的氨基酸序列相似性最高,为96%。系统进化树分析显示,中华绒螯蟹RXR的氨基酸序列与陆地蟹RXR聚为一支。荧光定量PCR结果显示,RXR在所有检测的组织中均有表达,且在中华绒螯蟹Y器官中表达量最高,肝胰腺、鳃和肌肉中少量表达,心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节...
[期刊] 水产学报
[作者]
王瑶 杨志刚 沈城 姚琴琴 曾奇韬 刘启彬 成永旭
为了研究蜕皮激素受体(EcR)在中华绒螯蟹蜕皮和性腺发育过程中的作用,本实验采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆了中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA序列。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,分析该基因在不同组织、蜕皮过程及卵巢发育阶段的表达特征,并研究了甲基法尼酯(MF)对卵巢中EcR的调控作用。结果显示,中华绒螯蟹EcR cDNA全长2 156 bp,编码422个氨基酸,其序列与招潮蟹相似性最高,为89%。荧光定量PCR结果显示,EcR在Y器官中表达量最高;在卵巢和肌肉中少量表达;在肝胰腺、鳃、心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达...
[期刊] 水产学报
[作者]
施秋燕 杨志刚 姚琴琴 成永旭 杨青 魏帮鸿
为了探究中华绒螯蟹自身脂肪酸合成能力，采用ＲＡＣＥ技术，克隆获得中华绒螯蟹ＥＬＯＶＬ６ Ｃ ＤＮＡ序列全长（ＧＥＮ ＢＡＮｋ ＡＣＣＥｓｓｉＯＮ：ｋＴ７７９２１９）。该序列全长２２４７ Ｂｐ，包括２３５、８７３和１１３９ Ｂｐ的５＇非编码区（５＇－ＵＴＲ）、开放阅读框（ＯＲＦ）和３＇非编码区（３＇－ＵＴＲ），编码２９０个氨基酸（ＡＡ），具有ＥＬＯＶＬ家族的全部特征：６个跨膜区、高度保守的组氨酸簇ＨＸＸＨＨ、多个保守区以及内质网滞留信号ｋＸｋＸＸ。分析发育树表明，ＥＬＯＶＬ２与ＥＬＯＶＬ５聚为一支，ＥＬＯＶＬ６聚为另一支，其中中华绒螯蟹ＥＬＯＶＬ６与其他节肢动物ＥＬＯＶＬ６聚为一支，与凡纳滨对虾．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚琴琴 杨志刚 王瑶 郭子好 刘启彬 施秋燕 成永旭
采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和Ｃ ＤＮＡ末端快速扩增（ＲＡＣＥ）技术，依据锯缘青蟹（ＳＣｙｌｌＡ ＳＥＲＲＡＴＡ）几丁质酶基因的保守区设计引物，克隆了中华绒螯蟹（ＥＲｉｏＣｈＥｉＲ ＳｉＮＥＮＳｉＳ）几丁质酶基因（ｈＸＣｈｉＴ）全长，并通过荧光定量ＰＣＲ（ｑ ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了ｈＸＣｈｉＴ在中华绒螯蟹的同一蜕皮阶段不同组织、不同蜕皮阶段主要几个组织的表达情况。结果显示，ｈＸＣｈｉＴ基因Ｃ ＤＮＡ全长２ ０４２ ｂＰ（ＧＥＮ ｂＡＮｋ ＡＣＣＥＳＳｉｏＮ Ｎｏ．ｋＪ５１３４６６），包括５′非编码区（５′ＵＴＲ）３５ ｂＰ，３′非编码区（３′ＵＴＲ）５３７ ｂＰ，开放阅读框（ｏＲＦ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨志刚 施秋燕 成永旭 姚琴琴 阙有清 杨青 徐蕾 柳梅梅 徐泽文
根据脂肪酸延长酶保守区序列设计引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＡＣＥ技术首次克隆得到中华绒螯蟹（ＥＲｉｏＣｈＥｉＲ ｓｉｎＥｎｓｉｓ）脂肪酸延长酶（ＥＬｏＶＬ）基因全长（ＧＥｎ ＢＡｎｋ登录号：ｋＲ００５６２８）。分析ＥＬｏＶＬ序列表明，该基因Ｃ ＤｎＡ全长２０８９ ＢＰ，开放阅读框（ｏＲＦ）长１０６５ ＢＰ（包含终止密码子），编码的３５４个氨基酸具有典型的延长酶特征：１个高度保守的氧化还原中心组氨酸簇ｈＶｉｈｈ，多个保守区和多个跨膜区（ｋＦＴＥＦＬＤＴ、ｎＴＦＶｈｉＶＭＹＶＹＹ、ＴｎＦＱＭｉ）。经氨基酸同源性和系统发育树分析，中华绒螯蟹ＥＬｏＶＬ预测氨基酸序列与顶切叶蚁（ＡＣＲｏＭＹＲＭＥｘ ＥＣ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚琴琴 杨志刚 王瑶 郭子好 刘启彬 施秋燕 成永旭
采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,依据锯缘青蟹(Scylla serrata)几丁质酶基因的保守区设计引物,克隆了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)几丁质酶基因(HXchit)全长,并通过荧光定量PCR(q RT-PCR)技术研究了HXchit在中华绒螯蟹的同一蜕皮阶段不同组织、不同蜕皮阶段主要几个组织的表达情况。结果显示,HXchit基因c DNA全长2 042 bp(Gen Bank accession no.KJ513466),包括5′非编码区(5′UTR)35 bp,3′非编码区(3′UTR)537 bp,开放阅读框(ORF...
[期刊] 水产学报
[作者]
郭子好 杨志刚 刘志伟 王瑶 杨筱珍 成永旭
根据非洲爪蟾延伸因子-1δ(elongation factor-1δ,EF-1δ)基因的保守序列设计引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆出中华绒螯蟹EF-1δ基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明,中华绒螯蟹EF-1δcDNA全长933 bp,编码263个氨基酸,经BLASTN和BLASTX软件分析表明,此EF-1δcDNA核苷酸序列与非洲爪蟾EF-1δ核苷酸序列的同源性最高,其相似性为70%;所编码的氨基酸序列与大红斑蝶EF-1δ的氨基酸序列相似性为54%。聚类分析表明,中华绒螯蟹EF-1δ的氨基酸序列与鱼虱EF-1δ聚为一支。荧光定量...
关键词：
中华绒螯蟹 EF-1δ 基因 克隆 表达
[期刊] 水产学报
[作者]
郭慧芝 付建平 昌鸣先 郭政 朱邦科 聂品
铁蛋白普遍存在于生物体内,具有铁离子解毒和储存等功能。在构建脂多糖刺激的中华绒螯蟹cDNA文库的基础上,获得了中华绒螯蟹铁蛋白基因EsFer的cDNA序列,其全长为1118bp,包含480bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为159氨基酸,其5′和3′端的非编码区分别为178bp和461bp,预测的分子量为18.3ku,理论等电点为5.81,在15～37aa处有一个跨膜螺旋。在5′非编码区核甘酸序列的135～162的位置有个特殊的结构,即铁反应元件(iron response element,IRE)。通过荧光定量PCR的方法研究了铁蛋白基因在中华绒螯蟹的组织表达分布,以及经脂多糖刺激后在血淋巴...
关键词：
中华绒螯蟹 铁蛋白 表达 脂多糖
[期刊] 水产学报
[作者]
田志环 焦传珍 成永旭 吴旭干
为研究Akt基因在中华绒螯蟹蜕壳前后肌肉生长过程中的功能,应用RACE技术克隆得到编码中华绒螯蟹Akt(命名为Es Akt)的全长为2 200 bp的c DNA序列,包括159 bp的5′非翻译区(5′-UTR)、496 bp的3′非翻译区(3′-UTR)和长度为1545 bp编码514个氨基酸的编码序列。蛋白质结构域分析显示Es Akt含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的3个特征性保守结构域。多序列比对和系统发育分析显示,Es Akt与中国明对虾、凡纳滨对虾的Akt序列一致性都为0.889,在系统发育树中节
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚琴琴 杨志刚 郭子好 成永旭 王瑶 施秋燕 刘启彬 何杰 杨筱珍
根据中华绒螯蟹FAD9基因cDNA序列(Accession Number:JQ693685)设计引物,扩增得到中华绒螯蟹FAD9基因的开放阅读框(ORF),用原核表达载体p Cold-TF DNA成功构建重组表达载体p Cold-fad9,将p Cold-fad9转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S,在异丙-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下进行表达。SDS-PAGE分析表明,诱导后出现的特异性蛋白条带,大小与预期理论值(95.10 k D)相符。当IPTG浓度为0.3 mmol/L时,在15℃条件下诱导20 h,重组蛋白的表达量最高。目的蛋白主要存在于上清溶液中,为可溶性表达。利用...
[期刊] 水产学报
[作者]
宫磊 张亦陈 孙妍 刘逸尘 耿绪云 孙金生
蜕皮激素受体(ecdysteroid receptor,EcR)介导调控甲壳动物蜕皮生长、附肢再生等重要生命活动。为了解EcR在人工控制甲壳动物的繁殖和生长中的作用,采用RACE方法结合同源克隆技术,首次从中华绒螯蟹Y-器官中克隆得到蜕皮激素受体基因全长cDNA序列(Ers-EcR,登录号:KF736985),并进行了结构解析和组织表达分析。结果发现,Ers-EcR编码基因全长2 176 bp,开放阅读框为1 638 bp,编码545个氨基酸,具有DNA结合域(DBD)和配体结合域(LBD)等典型的核受体超家族结构域,但不具有信号肽结构。其中,DBD含有8个保守的Cys残基,可以形成2个锌指结...
关键词：
中华绒螯蟹 蜕皮激素受体 克隆 表达
[期刊] 水产学报
[作者]
庄翠珩 孙金生 张亦陈 田金泽 耿绪云 朱丽娜 李冉
为了解甲壳动物高血糖激素如何调节中华绒螯蟹体内的血糖水平，实验前期进行了转录组和表达谱分析，最终选取Ｅｓｆｌｏｌ作为研究对象。根据转录组数据提示，结合ＲＡＣＥ方法首次从中华绒螯蟹肝胰腺组织中克隆得到Ｅｓｆｌｏｌ基因并进行了序列及组织表达分析。结果显示Ｅｓｆｌｏｌ基因开放阅读框（ｏＲｆ）１ ２８１ ｂｐ，编码４２６个氨基酸，具有典型的ｓｐｆＨ超家族和ｐＨｂ结构域，不含信号肽序列。多重序列比对分析表明，Ｅｓｆｌｏｌ氨基酸序列与中华绒螯蟹ｆｌｏｔｉｌｌｉｎ－１相似度最高，达到５７％。荧光定量ｐＣＲ结果显示成熟中华绒螯蟹Ｅｓｆｌｏｌ基因在肝胰腺组织中的表达量最高，其次为肌肉，另外在心脏、鳃、肠道、胸神．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宋廷宇 侯喜林 吴春燕 何启伟 霍雨猛
以薹菜品种京研薹菜叶片cDNA为模板,采用RT-PCR技术,获得了编码薹菜CYP79B5基因全序列1 847 bp,包含有1 620 bp的开放阅读框,编码540个氨基酸。以薹菜基因组DNA为模板,获得了2 112 bp的目的片段。经比对发现其氨基酸序列与油菜、白芥、拟南芥等CYP79B5编码的氨基酸序列具有较高同源性,与油菜同源性达100%。经过生物信息学分析,发现所推导的氨基酸序列具有明显的CYP蛋白信号域,且可以在SWISS-MODEL数据库中搜索到与之相近的三维结构。扩增CYP79B5完整的编码区序列,构建pET-24α(+)重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导融...
关键词：
薹菜 CYP79B5 基因克隆 原核表达
[期刊] 水产学报
[作者]
杨亚男 黄辉洋 黄小帅 叶海辉 李少菁
采用RACE技术,克隆了近缘新对虾cyclin B基因,该序列全长1 667 bp,编码区1 209bp共编码402个氨基酸,所推导的氨基酸序列N端不存在信号肽。BLAST比对后发现,其氨基酸序列与刀额新对虾的同源性达90%。经RT-PCR检测,cyclin B基因在近缘新对虾的卵巢和肌肉中表达水平最高,胸神经节和心脏次之,鳃、眼柄神经节、肝胰腺几乎没有表达。推测主要与cyclin B在细胞周期中调控细胞分裂的功能有关。原核表达结果显示,pET32a表达载体在0.2 mmol/L IPTG、25℃诱导4 h条件下可得到纯度较高的分子量约67 ku的蛋白。
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