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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
董雪红 田敏 季策 马文元 张庆华
副溶血性弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ，Ｖｐ）是目前备受关注的人畜共患病的病原。为了比较７株不同来源的Ｖｐ对斑马鱼的毒力大小及致病能力，采用急性毒性试验测定９６ ｈ内Ｖｐ对斑马鱼的半数致死剂量（ｍｅｄｉａｎ ｌｅｔｈａｌ ｄｏｓａｇｅ，ｌｄ＿（５０）），用累积法和ｂｌｉｓｓ法对比分析ｌｄ＿（５０）指标。结果显示：Ｖｐ Ｋｎｈ１无致病性。其他菌株感染后，均表现出腹部出血，腹腔有腹水，内脏出血等症状。用累积法和ｂｌｉｓｓ法分析人类致病菌株ａｔｃｃ１７８０２、ａｔｃｃ３３８４７及水生动物致病菌株Ｖｐ１３、Ｖｐ３１、Ｖｐ４１、Ｖｐ５７共６株不同来源的副溶血性弧菌的ｌｄ＿（５０），．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘海泉 江春铃 赵伟 钱江 潘迎捷 胡金庆 赵勇
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一种常见的革兰氏阴性细菌，主要分布在海洋、海口和河口沉积物中，能够引起人急性肠胃炎、伤口感染和败血症，同时危害水产品养殖业。由该菌引起的食物中毒事件在全世界范围内频繁发生，该菌被认为是微生物性食物中毒的主要病原菌之一。影响副溶血性弧菌致病性的毒力因素包括溶血素、黏附因子、分泌系统等，尤其在分泌系统中，Ⅲ型分泌系统(TypeⅢsecretion systems, T3SS)和Ⅵ型分泌系统(T6SS)与副溶血性弧菌致病性密切相关。T3SS是一种多亚基针状结构，将分泌蛋白通过供体细胞质直接注入受体细胞质；T6SS是一种接触依赖性蛋白分泌装置，将毒素直接注入目标细胞内。通过对Ⅲ型分泌系统和Ⅵ型分泌系统的研究进展进行梳理，从这两种分泌系统的结构出发，并对其功能和调控机制分别进行分析比较，指出了二者在效应蛋白及产生毒素上的不同，找出了二者与副溶血性弧菌定植的关系，以期通过这两者的联系进而深入了解副溶血性弧菌的致病机制，为防治该菌提供科学指导。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
潘厚军 吴淑勤 董传甫 石存斌 叶美茜 林天龙 黄志斌
从患溃疡病的鳜肾脏中分离出一株病原细菌编号为GYK1。此株病菌人工感染鳜、银鲫、剑尾鱼,实验鱼出现出血、肌肉坏死或溃疡症状;腹腔注射攻毒,对鳜、银鲫、剑尾鱼、小鼠的半致死剂量(LD50)分别为8.33×104、1.06×105、1.26×105、1.05×106CFU/g;菌培养液上清能溶解鳜、加洲鲈、银鲫、小鼠、兔、绵羊、人O型血等的红细胞,在绵羊血平板上为β 溶血,不同代次和保存条件的细菌溶血性稳定。细菌在电镜下的形态、生化特性和ID32E系统自动鉴定的结果均符合嗜水气单胞菌的特征;PCR扩增检测到嗜水气单胞菌特异性的毒力基因气溶素基因(aerA)209bp片段,进一步说明此株病原细菌为含...
关键词：
鳜 嗜水气单胞菌 鉴定 毒力 溶血性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
许愈 张昭寰 赵莉 刘海泉 潘迎捷 赵勇
将酸性电解水与超声波技术相结合，探究其对于副溶血性弧菌的杀灭情况，并与其他杀菌措施进行对比。采用平板计数法进行菌落计数，扫描电镜观察细菌的形态变化，蛋白质泄露揭示细胞膜通透性差异，并结合流式细胞仪分析生物学特征的改变，分别比较了酸性电解水，超声波以及联合处理对副溶血性弧菌的杀菌效果。结果显示：酸性电解水联合超声波处理可使副溶血性弧菌的数量减少2.09 log CFU/mL，亚致死菌数量为1.80 log CFU/mL，而仅用超声波处理，细菌只减少了0.63 log CFU/mL，亚致死菌数量为0.05 log CFU/mL(P<0.05)。进一步的流式细胞仪分析结果显示，经联合处理后细菌细胞明显缩小，颗粒度变化增大。综上所述，相较于酸性电解水或超声波单一处理，通过菌落计数，细菌的形态变化，蛋白质泄露与细胞生物学特征的改变可知，酸性电解水联合超声波的处理方式具有更强的杀菌效果，可作为一种新型的技术应用于水产品中副溶血性弧菌的杀灭。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王璐华 宁喜斌
通过测定2株副溶血性弧菌4~40℃的生长曲线,研究它们的生长规律,运用预测食品微生物学的方法,分别对它们建立初级和二级预测模型。结果表明,副溶血性弧菌的生长曲线在低温阶段,适用线性回归方程拟合;在适温阶段,生长曲线都呈典型的S形,适合用Gompertz模型拟合。二级模型采用平方根方程的扩展式Ratkowsky3式拟合,根据二级预测模型,分别得出副溶血性弧菌的最低生长温度Tmin,最高生长温度Tmax和最适生长温度。模型验证表明,预测值和实测值的残差都在±0.05范围内,偏差因子和准确因子均在可接受范围内,模型是可靠的。最后,讨论了模型的应用前景。
关键词：
预测微生物学 模型 副溶血性弧菌 温度
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
齐家伟 董旭日 柴旭锋 韩乔 张昭寰 檀玲 刘海泉 潘迎捷 赵勇
为了探究食品工厂环境下更为真实的生物被膜形成过程，有效地预防和控制食品加工过程中副溶血性弧菌生物被膜的污染情况，通过模拟不同的食品加工器械振动模式（水平旋转式振动，翘板式振动，垂直翻转式振动），研究了不同振动模式下副溶血性弧菌在玻璃和不锈钢表面培养72 h生物被膜的形成过程，分析了不同振动模式对被膜生物量、被膜结构以及被膜胞外基质中胞外多糖和胞外蛋白的影响。结果发现，振动条件下副溶血性弧菌被膜形成量明显减少；3种振动模式下垂直翻转式振动条件下被膜生成量最少；同种振动方式下副溶血性弧菌在不锈钢表面形成量大于玻璃表面；增加水平旋转转速，被膜生成量减少；振动导致被膜总生物量减少，多孔性和均一性增加，生物被膜结构趋于简单，被膜比较分散。振动导致生物被膜胞外多糖和胞外蛋白含量减少。以上结果说明，不同的器械振动对被膜的影响不同，本研究中模拟的三种振动模式中选择垂直翻转式振动模式可以有效地减少与抑制生物被膜的生长；振动会导致细菌生物被膜胞外多糖和蛋白的减少，影响被膜的孔径、均一性等结构特性，被膜结构变得松散，被膜生成量减少，为进一步研究实际生产环境中生物被膜的清除提供理论参考。
关键词：
生物被膜 副溶血性弧菌 振动 结构
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
马磊 常晶 刘尊英
该文设计了以水产致病菌群体感应系统为靶点的新型防治策略实验，构建了群体感应淬灭酶AiiA酶的原核表达系统，测定了重组酶的酶学性质，探究了该酶对副溶血性弧菌群体感应系统的调控以及对其生长、生物膜、蛋白酶、运动能力和毒力基因tlh表达的影响。结果表明重组AiiA酶可抑制副溶血性弧菌胞外基质的产生，减少生物膜的形成，显著降低细菌蛋白酶活性、运动能力并减少毒力基因tlh的表达。该综合性实验结合了基因工程、酶工程、食品贮藏原理等多领域实验技术，有利于提升学生的创新思维和实验技能。
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘代新 宁喜斌
运用PCR技术成功建立了检测产耐热直接相关溶血素(TRH)的副溶血性弧菌的方法,并应用该方法从1株标准株和其他3种不同来源的37株副溶血性弧菌中的13株扩增出0.5 kb的trh基因特异性扩增带;产TRH的副溶血性弧菌中1株标准株,12株分离自腹泻病人排泄物或呕吐物,1株分离自水产动物养殖用水;并且产TRH与尿素酶阳性的副溶血性弧菌菌株之间的具有一一对应的关系,结果认定尿素酶阳性是产TRH的副溶血性弧菌菌株的表现型。
[期刊] 数理统计与管理
[作者]
杨倩 陈巍璐
以全国6个省份淡水鱼养殖环节中副溶血性弧菌检测结果为样本,对样本进行主成分分析与列联表分析,得出影响副溶血性弧菌是否存在二分类变量的因素为地理位置、温度、盐度、PH值及其交互作用;建立二分类Logistic回归模型和经典决策树模型,预测副溶血性弧菌是否存在;将预测结论与实测结果进行比对,实证检验模型预测效果好,预报准确率高,可用于实际预测预报。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘莹莹 卢瑛 赵勇 潘迎捷
为能够快速检测水产品中副溶血性弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ），本研究首先制备了副溶血性弧菌多克隆抗体，然后将其标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针，再分别以副溶血性弧菌多克隆抗体和山羊抗兔ｉｇ ｇ作为检测线ｔ线和质控线ｃ线，建立了双抗夹心模式的磁性免疫层析试纸条。利用正交试验设计的方法，从ｔｗｅｅｎ－２０、ｂｓａ、蔗糖３种因素对层析体进行优化分析，结果表明这３个因素对层析检测的影响效果为ｔｗｅｅｎ－２０＞ｂｓａ＞蔗糖；当ｔｗｅｅｎ－２０含量为５％（Ｖ／Ｖ），ｂｓａ浓度为０．２ ｍｇ／ｍ ｌ，蔗糖浓度为０ ｍｇ／ｍ ｌ时，阳性信号最强，检测的准确性和灵敏度达到最优，通过单纯的．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
徐马俊坤 冯博 张昭寰 孙晓红 潘迎捷 赵勇
以9∶1和1∶1的比例对致病性副溶血性弧菌(ATCC 33847:tdh+/trh-/tlh+;ATCC 17802:tdh-/trh+/tlh+)和非致病性副溶血性弧菌(G2:tdh-/trh-/tlh+;G8:tdh-/trh-/tlh+)在TSB培养基和熟虾中分别进行了混合和37℃10 h的混合培养,通过菌落原位杂交技术和PCR技术检测致病性菌株在混合培养前后的比例。结果显示,在TSB和熟虾中,致病菌比例均出现了下降。在熟虾样品中致病菌株下降的比例更高,其中ATCC17802和G8在熟虾样品中以9∶
关键词：
副溶血性弧菌 致病性 原位杂交 菌落杂交
[期刊] 水产学报
[作者]
张林鹏 杨诗燚 白艳韩 刘沥涵 陶俊杰 林蠡 秦真东
为研究三联特异性卵黄抗体对哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌的体外抑菌效果，通过制备哈维氏弧菌、溶藻弧菌与副溶血性弧菌三联灭活疫苗，免疫蛋鸡。收集鸡蛋制备卵黄抗体并检测其效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体外抑菌实验初步探究其制备的三联特异性卵黄抗体对3种弧菌的体外抑菌效果。结果显示，ELISA检测特异性卵黄抗体效价高达1∶51 200，并维持5周；SDS-PAGE对分离纯化的卵黄抗体分析显示，随着纯化步骤的进行，卵黄抗体中的蛋白杂带逐渐减少，纯度变高。免疫荧光和免疫印迹实验表明，特异性卵黄抗体与抗原的结合具有较高的特异性。扫描电镜进一步观察发现，相比非特异性卵黄抗体，特异性卵黄抗体处理过的弧菌，菌体互相黏附在一起，菌体细胞表面粗糙，细胞壁破损。在体外抑菌实验中，特异性卵黄抗体对弧菌具有明显的抑制效果，且抑制作用呈现剂量依赖性。研究表明，三联特异性卵黄抗体能够与哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血性弧菌发生特异性结合，通过体外实验发现，卵黄抗体通过凝集和黏附，破坏菌体细胞的完整性，从而发挥抑菌作用。实验结果为研发绿色、安全、高效的抗哈维氏弧菌、溶藻弧菌和副溶血弧菌三联特异性卵黄抗体提供理论和实验基础。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李翠苹 翟倩倩 王想 李健
为了解对虾养殖池中副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的耐药性和毒力基因的携带情况，2018年从山东4个地区的对虾养殖池收集分离副溶血弧菌，采用Kirby-Bauer纸片法检测其对12种抗生素的耐药性，用PCR方法检测其携带耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热相关溶血素基因(trh)的情况。从对虾养殖池共分离副溶血弧菌50株。药敏实验结果显示，副溶血弧菌对庆大霉素、硫酸新霉素和氨苄西林的耐药情况最为严重，耐药率分别98%、90%和86%，对氟苯尼考、氯霉素、头孢他啶等敏感性较高，耐药率分别为10%、10%和20%。88%的菌株具有多重耐药性。毒力基因检测结果显示，所有菌株均不携带tdh基因，4%的菌株表现为trh阳性。本研究提示，对虾养殖水环境中的副溶血弧菌对抗生素的耐药性较为严重，应加强副溶血弧菌的病原学监测，在养殖过程中合理使用抗生素，以实现水产养殖业健康发展。
关键词：
副溶血弧菌 耐药性 毒力基因 对虾养殖池
[期刊] 华北农学报
[作者]
周向阳 王淑娜 周秀锦 方维焕
为了调查浙江沿海地区副溶血弧菌的分布及其携带毒力基因的特征,在舟山、象山、温州三地实地采样385份,包括海水、泥土和水产品等,共分离到副溶血弧菌菌株278份,其中27株为tdh基因阳性,阳性率为9.7%,trh与ureC基因的阳性率分别为22.3%与11.8%,提示浙江沿海地区广泛存在着致病性副溶血弧菌污染。将不同来源副溶血弧菌的tdh和trh基因进行序列测定,进化树分析发现,环境分离株中tdh基因与临床分离株中tdh基因区分为2簇,而环境分离株与临床分离株中trh基因之间却没有明显的差异。研究结果可为浙江沿海地区副溶血弧菌的风险评估提供参考。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄倞 王元 马清扬 英娜 赵姝 吴越 房文红
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是常见的食源性致病菌和海水养殖动物致病菌,目前已知的毒力基因有tlh、tdh、trh、T3SS、pirA、pirB、toxR/S、orf8等。盐度是影响细菌基因表达的关键生态因子之一,为进一步探求副溶血弧菌的致病机理,对2株分别分离自海水和淡水养殖发病凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)中的副溶血弧菌在不同盐度下的生长速率、致病性进行检测,并用q-PCR方法对菌株毒力基因携带和表达情况进行定量研究。实验结果表明:海水菌株383生长速率快于淡水菌株V9,但菌株383在生长稳定期的细菌浓度明显低于菌株V9;菌株383对凡纳滨对虾的致病性明显高于菌株V9,前者的48 h半致死浓度(LD_(50))低于后者2个数量级;2株副溶血弧菌皆携带毒力基因tlh、T3SS1和pirA/B,但未检测到tdh、trh、T3SS2、toxR/S和orf8。部分毒力基因表达量检测结果显示,菌株383和菌株V9均为vcrD1表达量最高,其次是pirA,vopD1表达量最低;4个毒力基因不仅在2菌株间的表达量差别较大,而且盐度对同一菌株不同毒力基因表达的影响也是不同的。2株副溶血弧菌的毒力与pirA和vcrD1的表达量呈正相关性。研究结果为探究环境因素与副溶血弧菌致病力的关系提供了科学依据,同时也提示,淡水养殖凡纳滨对虾要防范副溶血弧菌输入的风险。
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