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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沈少炎 吴玉香 荣俊冬 何天友 郑郁善
以2年生花吊丝竹的扦插苗为研究材料,对2种方法(TCA/酚提结合法和PEG法)提取的蛋白质的2-DE差异进行研究.结果表明:PEG法的5个组分的条带差异明显,全蛋白得到了有效分离,在F3中富集到了2条高丰度蛋白带;2种方法的2-DE图谱的均一性分析发现,PEG法中F3富集了高丰度蛋白,提高了2-DE中蛋白质的检测率和分辨率,PEG法中F1-F5共检测的蛋白总数超过了1700个,但是相邻组存在一定的重叠率,而TCA丙酮/酚提结合法只检测到约571个蛋白点,5个组与NF平均有439个蛋白点匹配,达到77.9%
[期刊] 华北农学报
[作者]
齐建双 王彦玲 铁双贵 卢彩霞 岳润清 韩小花 燕树锋 孙若楠
为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法,提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质,并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明:TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压,而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合;对电泳胶图分析后可知,TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个,低丰度蛋白质得到充分显现,大多数蛋白点分子量为20~80 k Da,p H值为4~7,蛋白点的形状较规则;TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个,表明样品中蛋白质分离种类较少,高丰度蛋白质过度显现,...
关键词：
玉米叶片 蛋白质提取方法 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张宇 唐志鹏 秦荣耀 焦丁华 王长江
【目的】采用4种不同方法进行金柑叶片蛋白质提取的相关研究,摸索出一套适合金柑叶片蛋白质的提取方法,也为其他近缘植物高质量蛋白质的提取提供科学参考依据。【方法】选择‘桂金柑一号’为供试材料,分别采用Tris-HCl提取法、尿素提取法、DTT/丙酮提取法和TCA/丙酮提取法提取叶片组织蛋白质,分析比较获得的蛋白质产率、单向电泳图和双向电泳图。【结果】不同方法的提取效果各异,Tris-HCl提取法提取的蛋白质产率、单向电泳以及双向电泳结果较理想,单双向电泳图辨识度高,蛋白点数丰富,蛋白点整齐且少有纵横纹现象。【结论】Tris-HCl提取法能够兼顾产率和质量,在4种方法中综合提取效果最好,是适用于金柑叶片蛋白质提取的理想方法。
关键词：
金柑 蛋白质 Tris-HCl法
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈香玲 任惠 黄章保 苏伟强 刘业强 李果果 刘要鑫 王小媚
为建立一套适用于鉴别＂四季芒＂成花蛋白表达差异的双向电泳方法，摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以＂四季芒＂芒果叶片为材料，采用ＴＣＡ－丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等３种芒果叶片蛋白提取方法，进行ＳＤＳＰＡＧＥ和双向电泳，比较这些方法的提取效果。结果表明，改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高ＴＣＡ－丙酮法蛋白提取质量。提取液Ｐ Ｈ能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、２－ＤＥ凝胶蛋白点数量和分布。Ｐ Ｈ ８．５提取液所提蛋白获得最多的２－ＤＥ蛋白点，但在小分子区域蛋白分辨率比Ｐ Ｈ９．０提取液所提蛋白低．．．
关键词：
芒果 蛋白提取 双向电泳 蛋白质组
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张楠 洪永聪 丁兆堂 王玉
本文研究冷驯化过程中茶苗叶片细胞膜相对透性和可溶性蛋白含量的变化,采用不同方法提取分离冷驯化茶苗叶片的低温诱导蛋白。结果表明:①与离体叶片相比,冷驯化茶苗叶片更适宜用来分离茶树低温诱导蛋白,其表现为质膜相对透性变化不大,而且可溶性蛋白含量保持在较高水平。②与丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法、硫酸铵沉淀法和直接提取法相比,改良Tris-HCl法最适于冷驯化茶苗叶片低温诱导蛋白的分离提取,其特点是蛋白样品得率高、蛋白条带多且清晰、杂质干扰程度少、操作步骤简易。另外,在冷驯化蛋白提取样品中还发现了大小分别为25、35和90 KDa的蛋白差异条带。
关键词：
茶 冷驯化 低温诱导蛋白 提取分离
[期刊] 华北农学报
[作者]
曾广娟 李春敏 张新忠 陈东玫 赵永波 董文轩
为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白...
关键词：
苹果 SDS-PAGE 蛋白质提取
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孟祥南 张迪 范海延 于洋 崔娜 宋铁峰
以黄瓜幼苗的叶片为材料,分别采用酚提取法、盐提法、尿素提取法和真空渗透提取法分离细胞壁蛋白,比较不同提取方法的提取效果,以期为黄瓜细胞壁蛋白质组学研究的开展奠定基础。结果表明:盐提法的蛋白产率最高,尿素提取法次之,真空渗透提取法和酚提取法的蛋白产率较低;采用六磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定法检测细胞质蛋白的污染率,其中,真空渗透提取法获得的细胞壁蛋白污染率最低(1.07%),其次为盐提法(2.17%),而酚提法和尿素提取法的污染率分别高达25.90%和2.60%;SDSPAGE电泳分析表明盐提法的蛋白条带清晰,且细胞质中高丰度蛋白Rubisco的条带不明显。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡敏 徐凌飞 张军科 仇宗浩 丁勤 张静
【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDS-PAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1h,选用长17cm、pH 4～7的IPG胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100V30min、180V 6h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。
关键词：
梨 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李红兵 康振生
【目的】建立一种小麦叶片蛋白质组分析时去除全蛋白提取物中高丰度蛋白Rubisco酶的方法,为富集低丰度蛋白,提高双向电泳灵敏度提供技术支持。【方法】采用分离技术,以铭贤169小麦苗期叶片为材料,使用不同浓度(1,2,5,10 mmol/L)的肌醇六磷酸钠,结合二水氯化钙在不同温度(4,20,37℃)去除小麦叶片蛋白中的Rubi-sco酶,筛选去除小麦叶片蛋白Rubisco酶的最佳条件,并采用一维凝胶电泳(1-DE)、Western blot方法检测去除Rubisco酶的有效性,用二维凝胶电泳(2-DE)评估该方法对样品在二维凝胶上分辨率的影响。【结果】在37℃条件下,采用10 mmol/L肌醇...
[期刊] 华北农学报
[作者]
袁金海 刘自刚 孙万仓 曾秀存 马骊 方园 刘海卿 郭仁迪 王治江 陈奇 王凯音 刘林波
为了研究质外体蛋白在低温胁迫下白菜型冬油菜抗寒的作用机理，以陇油７号五叶期叶片为试材，采用２种不同提取液（提取液Ａ：０．１ ｍｏｌ／ｌ ｐ Ｈ值＝７．６ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、０．２ ｍｏｌ／ｌ ＫＣｌ、１ ｍｍｏｌ／ｌ ｐｍｓＦ，提取液Ｂ：０．０５ ｍｏｌ／ｌ ｐ Ｈ值＝７．６ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、０．０１ ｍｏｌ／ｌ ＥＤＴＡ－ＮＡ２、０．０２ ｍｏｌ／ｌ ＶＣ、１ ｍｍｏｌ／ｌ ｐｍｓＦ）进行质外体蛋白提取效果比较。结果表明：提取液Ａ的蛋白提取率达到了（０．０７３±０．００４ ６）ｍｇ／ｇ，比提取液Ｂ提高了４２．８８％；经六磷酸葡萄糖脱氢酶（ｇ６ｐＤＨ）活性检测，提取液Ａ提取的蛋白质污染率较提．．．
关键词：
质外体 陇油7号 蛋白 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨文鹏 王伟 王明春 王秀影
为了比较Ptotein Assay和2-D Quant Kit两种方法测定玉米蛋白质浓度的差异,用Plant Total Protein Extraction试剂盒提取8个玉米高赖氨酸近等基因系的苗期心叶、抽雄期旗叶,授粉后10、20、30和40 d籽粒的总蛋白质,用Ptotein Assay和2-D Quant Kit2种方法测定其浓度。结果表明:籽粒中高于叶片中的总蛋白浓度,且籽粒发育越成熟提取的总蛋白质浓度越高。两种方法测定中,在不同组织提取的总蛋白质间的变化趋势相同,但授粉后10、20、30和40 d籽粒提取的总蛋白浓度间存在极显著差异;苗期心叶提取的总蛋白浓度间存在显著差异;抽雄期旗...
关键词：
总蛋白 浓度测定 方法 玉米
[期刊] 华北农学报
[作者]
邵媛媛 柳展基 王龙龙 毕玉平
以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
雷玲 王红霞 张志华 何富强 高仪 赵书岗 孙红川
以13个河北核桃优系(罗汉头、南安庄、艺核1号、C12、J16、M3、H12、C15、M10、MB、C13、M9、A7)的叶片为材料,比较了高盐低pH法(2%PVP40,3%PVP40)、SDS法(0.5%,1%,1.5%)和CTAB法(2%,3%)提取基因组DNA的效果,旨在筛选出适合河北核桃DNA提取的最佳方法,为进一步开展河北核桃的分子群体遗传研究奠定基础。通过紫外分光光度计法和琼脂糖凝胶电泳等方法对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的纯度和质量。结果表明,几种提取方法均能提取到核桃叶片的基因组DNA,其中含3%PVP40的高盐低pH法所提取的DNA浓度适中,蛋白质、RNA、多糖...
关键词：
河北核桃 叶片 基因组DNA 提取 方法
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