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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
叶志彪 Grierson D.
油梨果实在7℃下贮藏一定时期,取果实样品抽提总RNA,通过oligo dT纤维素柱纯化,获得poly(A)~+mRNA,利用λZap—cDNA合成试剂盒合成双链cDNA,再将cDNA连接到克隆载体Uni—ZapXR上,构成与油梨果实成熟有关的cDNA文库。同时,利用纤维素酶和乙烯形成酶克隆探针,对文库作了筛选。
关键词：
油梨 果实成熟 cDNA文库
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈琳 余海翔 张忠明
以蒺藜苜蓿(A17)的成熟根瘤为材料,联合应用Gibson克隆技术和SMART cDNA技术构建cDNA文库,其转化效率达到7.74×105cfu/3μg pGADT7-Rec-New。随机菌落PCR检测结果表明,插入DNA片段的大小为0.52.0kb,其中插入片段>0.75kb的占45.6%,文库的重组效率达到91.7%,构建的cDNA文库以质粒形式保藏备用。采用此法不仅可以构建用于酵母单杂交或双杂交的文库,同样也适用于其他质粒文库的构建。利用酵母单杂交技术,以在根瘤中高表达基因启动子元件为诱饵,筛选构
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
林明 徐波 王育娜 曹蕾 夏信明 何水林
紫外线胁迫可导致花生产生白藜芦醇的诱导合成防御反应,本研究在利用UV处理花生幼果、激发花生幼果防御反应的基础上提取总RNA,应用SMART-cDNA文库构建试剂盒构建了花生幼果的cDNA文库.该文库含有1.0×106独立克隆,插入片段平均1 kb左右.利用所构建的cDNA文库,采用96孔板PCR筛选方法,分离获得2个白藜芦醇合成酶cDNA.
关键词：
UV 花生 cDNA文库 白藜芦醇合成酶
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王志成 蒋建雄 钟军 易自力 刘清波
建立了一种利用PCR-96孔板法快速筛选棉纤维cDNA噬菌体文库,分离全长基因序列的技术体系.首先根据已知EST片段设计一至两对特异PCR引物,通过在96孔滴定板上逐级稀释cDNA文库,利用特异引物以及特异引物与通用引物组合逐级从cDNA文库中筛选目标克隆,最终可获得目标全长cDNA.
关键词：
聚合酶链式反应 cDNA文库 筛选
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胡建 戴华国 符文俊
从寄生在亚洲玉米螟 (Ostriniafurnacalis)幼虫体内 6d的腰带长体茧蜂 (Macrocentruscingulum)胚胎中提取总RNA和mRNA ,用分离到的微量mRNA合成cDNA第 1链。通过长距离PCR扩增得到足够量的双链cDNA。将SfiⅠ酶切后并纯化的cDNA片段连接到经SfiⅠ酶切的噬菌体λTripIEX2上 ,并对噬菌体进行包装 ,建成cDNA的全长库。经大肠杆菌XL1 Blue平板检测 ,未扩增文库的滴度为 0 75× 10 6pfu·mL-1,克隆重组百分率为 96 77% ,扩增后文库的滴度为 0 5×10 10 pfu·mL-1。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭九峰 孙国琴 沈传进 乔惠蕾 贾利敏 郭志杰
为研究沙冬青抗逆的分子机理,分离克隆其抗逆基因,以pBluescript II SK为载体构建了沙冬青(Ammopip-tanthus mongolicus)越冬叶片cDNA文库,并对文库的部分克隆进行了5'端随机测序,结果表明,该文库容量为2.16×105cfu,重组率为89.6%;插入片段的平均长度大于1 kb。随机测序得到542个EST,拼接成360个uniEST,经网上BlastN及BlastX分析,其中313个是已知功能的基因的标签,包括能量代谢、物质转化、细胞生长等生物过程,其中与抗逆相关的48条。
关键词：
沙冬青 cDNA文库 表达序列标签
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李晓颖 曹雪 杨光 王晨 沈玉英 房经贵
以果梅品种'细叶青'不同时期的花和果实为实验材料,应用Creator SMART cDNA Construction Kit构建了我国果梅第一个花和果实的cDNA文库。结果表明,该文库的库容量约为1.4×106pfumL,从扩增文库中随机挑取30个克隆进行PCR鉴定,其重组率达97%,插入片段多分布在1～3kb之间,平均大于1kb。说明本研究成功构建了果梅花和果实的cDNA文库,为进一步开展果梅开花调控和果实发育等相关基因的克隆及其表达与功能分析等研究奠定了重要基础。
关键词：
果梅 果实 花 cDNA文库 RNA提取
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
何学军 李思发
用Stratagene技术构建了吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,GIFT strain)肝cDNA文库。首先用TRIZOL法提取肝总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测,表明总RNA纯度高且完整性良好。然后分离纯化mRNA,合成双链cDNA之后,加EcoRⅠ接头、EcoRⅠ末端磷酸化、XhoⅠ消化,并用葡聚糖凝胶柱层析分级收集cDNA样品,得到300 mg cDNA,符合建库要求。双链cDNA与Uni-ZAP XR Vector连接后,用GigapackⅢGold Packaging Extract进行体外包装得到cDNA文库。测得的文库滴度为1.25×1...
关键词：
尼罗罗非鱼 肝 cDNA文库
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
刘士成 杜道海 张成武 周志刚
缺刻缘绿藻(Myrmecia incise)富含花生四烯酸(arachidonic acid,AA),是迄今为止所知道的花生四烯酸含量最高的藻类。采用Trizol法提取总RNA,然后按照Clontech公司的SMART cDNA文库构建的方法,构建了缺刻缘绿藻的cDNA文库,测得的原始文库滴度为6×106pfu/mL,随机挑选文库的阳性单克隆进行PCR鉴定,扩增出的片段主要集中在0.5~1.5kb,平均插入片段长度约为1kb,文库的重组率达95.83%,说明本实验所构建的cDNA文库质量合格。
关键词：
缺刻缘绿藻 cDNA文库 花生四烯酸
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨长庚 刘姗姗 孙冰 陈松林
为了研究牙鲆(Paralichthys olivaceus)免疫及抗病相关蛋白和大分子物质的功能及相互作用机制,构建了牙鲆酵母双杂交cDNA文库。原始文库滴度为1.6×106 CFU/mL,随机选取单克隆菌落进行PCR扩增,根据PCR扩增结果表明插入片段大部分大于500 bp,平均长度约为1.5 kb,随机调取了115个EST进行了序列测定。扩增后放大文库库容约为1.8×1012 CFU。转化酵母后,文库转化效率为3.6×105CFU/μg,文库库容为5.4×106CFU。牙鲆酵母双杂交文库的构建成功为鲆蝶类免疫机理的研究,尤其是信号分子通路研究提供有效的工具。
关键词：
牙鲆:酵母双杂交 免疫相关基因 信号通路
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李江红 刘振 欧阳昊 彭文君 梁勤
从400只人工培育的处女蜂王中解剖受精囊及其腺体,利用其mRNA构建了一个cDNA文库.该文库的滴度为1.1×106,重组效率大于99%.进一步对文库克隆进行小规模测序和分析,获得了一批编码蜂王受精囊腺内溶蛋白的基因克隆,同时从中也检测到编码3种蜂毒蛋白(明肽、镇静肽和icarapin)、2种王浆蛋白(MRJP8-9)以及睾丸增强因子等克隆.
关键词：
意大利蜜蜂 受精囊腺 cDNA文库
[期刊] 水产学报
[作者]
殷志新 翁少萍 叶巧真 何建国
用Tripure试剂盒提取斜带石斑白细胞总RNA ,反转录合成第一链cDNA ,进行长距离PCR ,蛋白酶K消化 ,SfiI酶切 ,通过CHROMASPIN - 4 0 0柱 ,回收大于 5 0 0bp的cDNA ,与λTripIEx2载体连接 ,体外包装后构建了斜带石斑白细胞的cDNA文库。库容 1.6 5× 10 6,重组频率 82 % ,扩增后滴度 7.5× 10 9pfu·mL-1。插入片断长度 5 0 0～ 2 30 0bp ,最多的是在 75 0～ 10 0 0bp范围。本文库可作为筛选斜带石斑细胞因子基因的重要资源
[期刊] 中国农业科学
[作者]
迟吉娜 蔡肖 张建宏 甄军波 刘琳琳 田海燕 唐丽媛 刘存敬 崔瑞敏 张香云
【目的】构建优质陆地棉栽培品种冀２２８纤维均一化全长ｃＤＮＡ文库，降低纤维中存在的高峰度基因的拷贝数，提高发现纤维发育相关基因随机序列和稀有基因的效率，为公共数据库提供丰富的陆地棉ＥＳＴ资源。【方法】以优质陆地棉冀２２８开花后８—４０ Ｄ纤维为材料，将纤维全长ｃＤＮＡ与ＧＡＴＥｗＡｙ供体载体ｐ ＤＯＮＲ２２２重组，构建了棉花纤维的非剪切型全长ｃＤＮＡ原始文库。利用均一化技术获得均一化全长ｃＤＮＡ文库，进而测序获得大量的ＥＳＴ序列。采用生物信息分析手段，对所测ＥＳＴ进行拼接、比对、ｃＯＧ功能注释和ＧＯ注释。【结果】构建了优质陆地棉冀２２８纤维均一化全长ｃＤＮＡ文库，该文库初级文库库容为１．０６×．．．
关键词：
陆地棉 纤维 均一化 cDNA文库
[期刊] 林业科学
[作者]
齐刚 苏智先 李劲涛 阮期平
以休眠期27个uniEST,经网上BlastN及BlastX分析,其中75个序列是已知功能的基因标签,相似性较高,而32个序列在GenBank中相似性较低,13个序的珙桐种子为材料,利用SMARTTMcDNA Library Construction Kit构建珙桐种子的cDNA文库。结果表明:该文库的滴度为1.5×106pfu.mL-1,重组率为98%,cDNA文库插入片段大小主要集中在0.5~1.0kb。随机测序获得148个EST序列,拼接成1列在GenBank中没有匹配。这些数据有助于对珙桐种子的相关功能蛋白及分子机制的研究。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
蒙涛 丁峰 褚武英 周瑞雪 宾石玉 胡松年 张建社
以鳜(Siniperca chutasi)肌肉为实验材料,采用非均一化引物定向克隆技术构建了鳜肌肉组织cDNA文库,并进行大规模EST测序和序列分析。结果显示,cDNA文库的库容量为2.3×105,重组率达96.5%,平均插入片段长度为1.2 kb。随机挑选5456个克隆,成功测序5191个,其中高质量序列5063个,达97.5%。利用PHRAP程序聚类拼接后,得到1625条非冗余序列,包括443个重叠群(Contigs),1182个单拷贝(Singlets)。使用BLAST软件将这些序列同GenBank等数据库进行比对、注释,发现1625个非冗余序列与鳜肌肉结构和发生相关,而其中991条序列...
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