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[期刊] 华北农学报
[作者]
崔洪昌 李丽 郑晓鹰 Samuel S.Sun
依次经过抽提、分步硫酸铵沉淀、二乙氨乙基纤维素（ＤＥＡＥＣｅｌｕｌｏｓｅ）柱层析，以及聚丙烯酰胺自然胶制备电泳（ＰｒｅｐａｒａｔｉｖｅＰＡＧＥ）等分离步骤，从耐热性较强的“白阳”大白菜品种的黄化种苗中，分离和纯化了与耐热性密切相关的一个葡萄糖磷酸变位酶（ＰＧＭ）同工酶。通过ＳＤＳＰＡＧＥ电泳，纯化的酶样品在２９ＫＤ处呈现一个显著条带。推测此酶为细胞质来源。我们还同时纯化了与耐热性无关的另一个细胞质ＰＧＭ同工酶。结果表明，它们只有自然电泳迁移率（电荷量）的不同，而没有明显分子大小的差别。在整个纯化过程中巯基保护试剂的存在对于ＰＧＭ酶的稳定性至关重要
[期刊] 华北农学报
[作者]
崔洪昌 刘敬梅 Samuel S. Sun
首先对影响葡萄糖磷酸变位酶（ＰＧＭ）稳定性的因素进行了比较研究，结果发现，在所有被检测的因子中，磷酸根对酶的保护作用最强，而Ｔｒｉｓ－盐酸则效果极差。在磷酸缓冲液中添加二硫苏糖醇、ＰＭＳＦ、葡萄糖和镁离子等可能的保持试剂未能进一步提高酶的稳定性。另外，ｐＨ对ＰＧＭ酶的稳定性有较大影响，酸性ｐＨ不利于酶活性的保持，在ｐＨ８．０时酶最为稳定。因此，本实验对ＰＧＭ同工酶的纯化均在ｐＨ８．０的磷酸缓冲液中进行。依次经过抽提、分步硫酸铵沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱层析以及二乙氨乙基纤维素柱高效液相色谱（ＤＥＡＥ－ＨＰＬＣ）等分离步骤，我们纯化了大白菜品种“白阳”黄化种苗中的３个葡萄糖磷酸变位酶（ＰＧＭ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴国胜 王永健 曹宛虹 姜亦巍 张丽蓉
通过在不同高温条件下６个代表性品种的热害发生发展变化的研究，确定在３２℃恒温下对大白菜幼苗进行１０天的处理是耐热性选择的适宜选择压力。在此胁迫强度下，供试的两个耐热的台湾品种不出现热害症状；两个国内早熟品种出现轻度热害症状；两个晚熟品种热害症状严重。进一步的试验表明，根据苗期热害指数划分的耐热性等级与在田间高温条件下以结球性状为依据的耐热性和电导法测定的结果是一致的。苗期鉴定方法比结球期鉴定方法和电导法更容易控制选择压力，结果较精确，便于操作，能有效地提高选择效率。
关键词：
大白菜,热害指数,耐热性,筛选方法
[期刊] 水产学报
[作者]
王伟继 杨翠华 孔杰 王清印
采用水平淀粉凝胶电泳方法对虾夷马粪海胆(Strongylocentrotus intermedius)、刺参(Apostichopus japonicusSelenka)、半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)、文蛤(Meretrix meretrix)和虾夷扇贝(Pecten yessoensis)不同组织中的葡萄糖磷酸变位酶(PGM)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)进行了检测分析。结果发现,虾夷马粪海胆肌肉组织和成熟性腺组织中的PGM有较强的表达活性和表达位点差异,两种组织中GPI活性稍差。刺参的肠道组织和肌肉组织只有PGM和GPI表达活性的差异,而无位点差异。半滑舌鳎肌肉组...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
况成尘 吴谋成
本文报道了用弱离了交换剂DEAE Sephadex A-25作固定相,K_2SO_4溶液作流动相,采用自动柱层析仪分离制备硫代葡萄糖苷结晶粗品,然后采用制备HPLC,Φ8×250 mm柱,充填Hitachi 3050(ODS),5×10~(-2)乙腈作流动相,进一步分离纯化,制得2-羟基-3-丁烯基硫代葡萄糖苷的钾盐晶体,以质谱(MS),红外图谱(IR),紫外图谱(UV)和HPLC图谱证实,结晶物纯度为色谱纯。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王海波 李芙蓉 杨金翠 高永 郭俊云
为了探究磷酸葡萄糖变位酶(PGM)在植物蔗糖与淀粉代谢中的重要作用,基于同源序列比对的方法,在小桐子基因组中鉴定到1个细胞质型PGM基因(命名为JccPGM)与1个叶绿体型PGM基因(命名为JcpPGM),利用qRT-PCR方法检测JccPGM与JcpPGM基因在小桐子不同器官与低温条件下的表达特性,同时,构建了pGEX-4T-1-JccPGM与pGEX-4T-1-JcpPGM原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达分析。结果表明:两者分别编码582,637 aa的蛋白质。聚类分析表明,小桐子pPGM在其N端包含叶绿体定位信号肽,而cPGM较pPGM多4段肽链序列-~(108)VGVDGS~(113)-、-~(183)SGPE~(186)-、-~(283)GKSNSE~(288)-、-~(470)SLGEVN~(475)-。qRT-PCR表达分析显示,小桐子cPGM与pPGM基因都在叶片中高表达,而在根与种子中表达量较低。通过BL21(DE3)诱导表达,分别得到90.7,97.0 ku的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。综上所述,本研究为开展小桐子cPGM与pPGM基因表达蛋白的功能分析以及其在蔗糖与淀粉积累、逆境应答中的机制研究奠定了基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘波 唐永凯 俞菊华 谢骏 戈贤平
选用360尾翘嘴红鲌(Erythrocutler ilishaeformis Bleeker),体质量约40g。随机分成为2组,分别为高脂组(脂肪质量分数19.93%,碳水化合物质量分数14.45%)、低脂组(脂肪质量分数9.92%,碳水化合物质量分数12.38%),每组设3个重复,饲养8周。分别于摄食后0h、3h、6h、12h、24h测定血液指标、糖代谢酶葡萄糖激酶(Glucokinase,GK,E.C.2.7.1.1)以及葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase,E.C.3.1.3.9)活性及基因表达,并分析高脂肪与低脂肪水平日粮对翘嘴红鲌生长的影响。与...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄小红 罗忠宝 李明伟 黄一帆
【目的】分离纯化猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂,研究其理化性质。【方法】采用硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32阴离子交换柱层析、Sephadex G-100分子筛柱层析和CM-52阳离子交换柱层析方法,分离纯化猪精液的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶分子量测定;采用聚丙烯酰胺等电聚焦圆盘电泳法测定酶的等电点。【结果】经分离纯化获得比活力为17606.15U·mg-1、纯化倍数为270.53倍的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。酶催化对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖(pNP-N...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈以博 侯喜林 陈晓峰
以不结球白菜品种苏州青(耐热)和矮脚黄(不耐热)幼苗为材料进行热激处理(40℃,0、6、12、24、48、72和96 h),测定了热激处理对不结球白菜叶片中保护酶活性、丙二醛(MDA)含量以及膜透性的影响,同时利用实时定量PCR(qPCR)技术检测叶片中BcHsp1和BcHsp2耐热基因的表达变化。结果表明:热激处理后,耐热品种叶片中SOD、POD和CAT活性的增幅大于不耐热品种;不耐热品种叶片中丙二醛含量和电解质渗透率的增幅大于耐热品种;相对于不耐热品种,耐热品种热激蛋白基因具有明显稳定的热激诱导表达特性。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄鹤忠 丁磊 宋学宏 王永玲 杨彩根
选用典型的淡水肉食性鱼类青鱼(Mylopharyngodonpiceus)和草食性鱼类草鱼(Ctenopharyngodonidellus)为对象进行糖耐量初步实验。青鱼和草鱼的体重分别为(63±3)g和(46±2)g,在实验室适应4周后禁食24h,以高剂量(H)1.67g/(kg体重)和低剂量(L)0.42g/(kg体重)灌喂葡萄糖,比较研究其代谢反应。结果显示,2种鱼灌喂不同剂量葡萄糖后都出现持久的高血糖,青鱼血糖含量高于灌喂相同剂量的草鱼,灌喂剂量越高,血糖含量越高。草鱼组及青鱼L组在灌喂葡萄糖后血浆总氨基酸和甘油三酯先降后升,但青鱼H组口服葡萄糖后血浆总氨基酸和甘油三酯先升高。青鱼H组...
关键词：
青鱼 草鱼 糖耐量 糖代谢
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘锦 张冀芳 梁建丽 程锋 武剑 王晓武
【目的】探索硫代葡萄糖甙合成中关键基因-甲基硫代烷烃基苹果酸合成酶(methylthioalkylmalate,MAM)基因在白菜基因组中的进化情况,为研究白菜MAM的功能提供理论指导。【方法】根据白菜数据库BARD信息分析拟南芥、盐芥和白菜MAM的共线性关系,利用MEME在线软件预测MAM序列的高度保守基序(motif),通过R软件分析93份白菜材料MAM的表达模式,并利用MEGA5.05软件构建MAM的系统进化树。【结果】白菜的3个亚基因组均保留着MAM的同源基因。其中与拟南芥具有共线性的5个同源基因可能源自基因组古三倍化复制,其它两个同源基因可能是由转座扩增产生的;基序分析结果表明,与拟...
关键词：
白菜 硫甙 白菜MAM 共线性 进化树
[期刊] 华北农学报
[作者]
毕青 周雪 冀瑞琴 冯辉
为揭示复等位基因遗传的大白菜雄性不育分子机制,通过基于质谱的蛋白质组学同位素相对标记与绝对定量技术技术(i TRAQ),开展了大白菜核基因雄性不育蛋白质组学研究,以找到不育与可育材料中差异表达蛋白,从蛋白水平来进一步揭示大白菜雄性不育的分子遗传机制。通过研究,共发现了358个差异蛋白,其中可育中上调表达的蛋白有226个,下调表达的蛋白有132个,GO分析结果表明,鉴定的蛋白质组数据具有较好的生物学功能覆盖范围。通过双向电泳验证,差异蛋白点差异特性与i TRAQ结果类似,表明i TRAQ用于差异蛋白分析结果可靠。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
余长春 罗本钒 傅强 徐跃进 万正杰
为筛选适合夏季高温气候条件下生产的不结球白菜品种,并为耐热不结球白菜新品种的选育提供种质资源,对笔者所在实验室收集到的78份不结球白菜自交不亲和系进行了遗传多样性分析,并利用武汉夏季自然高温环境进行了热害指数测定。结果发现,四季矮脚特白梗奶白菜(编号C72)的热害指数在所有材料中最低,并且植株对高温具有较强的耐受力。此外,经测定发现C72相比较于其他材料具有更高的POD、SOD酶活性和更低的丙二醛含量及相对电导率。这些生理指标进一步表明C72具有更强的耐热特性。
关键词：
不结球白菜 遗传多样性 耐热性 热害指数
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐晶 梁旭方 蔡文静 高俊杰 旷玉兰 魏君冉 何珊
为了探讨6-磷酸葡萄糖酶催化亚基(glucose-6-phosphatase catalytic subunit,G6PC)在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)糖代谢中的作用,采用同源序列比对的方式,在草鱼基因组中获取了3个g6pc基因的序列,通过序列比对和进化树分析,将其分别命名为g6pca、g6pcb1和g6pcb2,其编码的氨基酸序列与斑马鱼(Danio rerio)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和人(Homo sapiens)具有较高的同源性,相似度分别为85%～94%、64%～83%和54%～66%。同线性分析表明g6pc在草鱼染色体上的分布与斑马鱼等高度相似,表明草鱼g6pc基因在进化中具有较高的保守性。利用RT-PCR检测3个基因在鳃、脂肪、脑、心脏、肝、肾、前肠、中肠、后肠和肌肉10个组织中的表达,结果显示, g6pca在脑和肝中表达量较高,脂肪组织次之; g6pcb1在肝中表达量最高,中肠次之; g6pcb2在心脏表达量最高,其次为脂肪组织。同时探讨了高糖饲料对草鱼不同g6pc亚型转录水平的影响,以及不同浓度葡萄糖和胰岛素刺激草鱼肝细胞(L8824)后对g6pca转录水平的影响。结果显示,饲喂高糖饲料(7周)后,与对照组相比,草鱼肝脏g6pca mRNA水平显著升高, g6pcb1和g6pcb2 mRNA水平无显著变化。离体情况,与5 mmol/L葡萄糖组相比,15 mmol/L葡萄糖显著增加了L8824的g6pca mRNA水平,且1 mol/L胰岛素可以抑制这种作用; 30 mmol/L葡萄糖对L8824 g6pca mRNA水平无显著性影响。本研究表明,草鱼g6pc发生加倍后存在功能分化,高糖可以诱导g6pca mRNA的表达,而对g6pcb1和g6pcb2的转录水平无影响,其具体功能还需进一步研究。
关键词：
草鱼 g6pc 糖异生 组织表达 胰岛素
[期刊] 林业科学
[作者]
叶建仁 黄素红 李传道 程淑婉
松针褐斑病（Ｌｅｃａｎｏｓｔｉｃｔａａｃｉｃｏｌａ）是我国南方重要病害。在湿地松（Ｐｉｎｕｓｅｌｌｉｏｔｔｉｉ）抗褐斑病选育研究的基础上对湿地松针叶中的６－磷酸葡萄糖脱氢酶和苯丙氨酸解氨酶与抗病性的关系进行了研究分析。结果表明二年生健康针叶的６－磷酸葡萄糖脱氢酶的活性水平与针叶的抗病性有密切关系。在测定的１３个无性系和单株中，４个易感株的酶活性较低，９个抗病无性系中除个别酶活性与易感株相近外，其余无性系的酶活性和比活性都明显比易感株高。苯丙氨酸解氨酶的株间差异相对较小，但在总体水平上，抗病无性系的酶活性和比活性也比易感株略高。用松针褐斑病菌毒素液处理后，无论是抗病针叶还是易感针叶，６－磷酸葡萄...
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