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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陶瑜 李燕 柏艾梅 虞章红 侯喜林 李英
[目的]本文旨在研究不结球白菜BcGR2.1基因在光氧化胁迫下的表达模式，并探索过表达或沉默该基因对植物抗光氧化胁迫的影响，以明确基因的功能。[方法]从不结球白菜 (Brassica campestris ssp. chinensis Makino) 中克隆了BcGR2.1基因CDS序列，对其编码的氨基酸序列进行进化树和保守区域分析；采用RT-qPCR技术，对BcGR2.1基因在光氧化胁迫处理下的表达水平进行分析；利用农杆菌介导的蘸花法和病毒诱导的基因沉默 (VIGS) 技术分别获得BcGR2.1过表达拟南芥和BcGR2.1沉默不结球白菜植株，并验证过表达或沉默BcGR2.1基因对植物抗光氧化胁迫能力的影响。[结果]不结球白菜BcGR2.1基因ORF全长1626 bp，与芜菁GR2蛋白进化关系最近。在甲基紫精 (Methyl Viologen，MV) 处理诱导的光氧化胁迫下，该基因一定时间内表达量上调，随后下调。超表达转基因拟南芥中抗坏血酸 (AsA) 含量上升，而沉默植株中AsA含量下降。光氧化胁迫条件下，超表达转基因拟南芥中的H_(2)O_(2)含量显著低于野生型，而BcGR2.1沉默植株中H_(2)O_(2)含量显著高于PTY空载；此外，过表达BcGR2.1拟南芥中相关叶绿素荧光动力学参数F_(v)/F_(m)、Y(Ⅱ)、ETR以及qP均显著高于野生型。[结论]在拟南芥和不结球白菜中BcGR2.1正调控AsA含量，抑制光氧化胁迫处理下植株体内H_(2)O_(2)的爆发，一定程度上维护了植株叶绿素荧光参数的正常状态，提高了植物对光氧化胁迫的耐受性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周颖 李燕 陶瑜 王建军 侯喜林 李英
[目的]本文旨在验证单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)多基因家族中MDHAR2基因的功能,以探索其对不结球白菜抗坏血酸(AsA)含量的影响。[方法]以不结球白菜‘苏州青’cDNA为模板,扩增BcMDHAR2基因的ORF全长,利用生物信息学分析其氨基酸序列;通过亚细胞定位研究BcMDHAR2在细胞中的表达位置,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测非生物胁迫和激素处理下BcMDHAR2基因的表达量;通过病毒诱导的基因沉默(VIGS)验证该基因对抗坏血酸含量的影响。[结果]BcMDHAR2基因包含1个1 308 bp的开放式阅读框(ORF),编码435个氨基酸。进化树分析表明,BcMDHAR2蛋白与芜菁的进化关系最近。亚细胞定位显示,BcMDHAR2定位于细胞核和细胞质、细胞膜上。RT-qPCR表明,低温、盐胁迫、重金属离子以及外源激素处理下,在一定时间内BcMDHAR2表达量上调,随后下调。该基因对光周期有一定的响应,随着光照时间变长,表达量上调,黑暗后,BcMDHAR2表达量下调。BcMDHAR2基因沉默后植株中AsA含量降低,AsA循环中相关基因的表达量发生了一定变化,而植株中SOD活性升高。[结论]BcMDHAR2表达量随外界条件变化而变化,响应不同的激素诱导和胁迫,在不结球白菜中该基因正调控AsA含量。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李妍 王雪花 陈忠文 段伟科 侯喜林 李英
［目的］本文旨在探究逆境下ＢｃＧＭＥ基因与抗坏血酸（Ａｓ Ａ）含量的关系，为培育高品质的不结球白菜品种奠定理论基础。［方法］以不结球白菜‘苏州青’为材料，同源克隆了ＢｃＧＭＥ基因的全长，应用生物信息学分析了其氨基酸序列，通过实时荧光定量ＰｃＲ技术测定了ＢｃＧＭＥ基因在过氧化氢胁迫和水淹胁迫下的表达水平，利用高效液相色谱（ＨＰＬｃ）测定了相应的抗坏血酸含量。［结果］ＢｃＧＭＥ基因包含一个长度为１ １３７ ＢＰ的开放式阅读框（ＯＲＦ），编码３７９个氨基酸。推测其蛋白理论相对分子质量为４２．９７×１０３，理论等电点Ｐ Ｉ值为５．８４，分子式为ｃ１９０７Ｈ２９４９Ｎ５１９Ｏ５７０ｓ２２，属于不稳定蛋白．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘燕燕 沈火林 刘以前
根据多年夏季露地自然高温下的观察和36℃高温胁迫下的热害指数,筛选出了耐热品系196-3、197-5、196-8和198-9,不耐的品系197-7、196-12以及介于耐热和不耐热之间的品系197-4、197-6,并测定了这8个品系40℃高温胁迫下的膜稳定性;进一步在20℃/12℃(d/n)(ck)、32℃/20℃(d/n)、36℃/28℃(d/n)人工模拟高温胁迫条件下,测定了这8个品系的幼苗生长量、MDA、游离脯氨酸、游离氨基酸、以及总糖相对含量。结果表明:在32℃/22℃(d/n)和36℃/28℃(d/n)处理下,相对生长量、游离脯氨酸、游离氨基酸和总糖的相对含量品系间差异都极显著;相关...
关键词：
不结球白菜 高温胁迫 生理指标 相关
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李林 陈丽 吴小婷 邵帅旭 李英 侯喜林 刘同坤
[目的]本文旨在研究不结球白菜Br CDF1基因的功能,验证其与CO启动子之间的调控关系,以及其在植物抽薹开花中所起的作用。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,采用酵母单杂交技术,验证Br CDF1转录因子与CO启动子是否能够结合;构建过表达载体p Early Gate101-Br CDF1,利用农杆菌介导法将过表达载体导入拟南芥中,筛选阳性苗,同时对阳性苗进行Western blot检测,观察转基因植株的表型变化;采用RT-q PCR技术,检测Br CDF1、CO、FT基因在转基因和野生型植株中不同时间点的相对表达量。[结果]酵母单杂交和β-半乳糖苷酶试验分析结果显示,Br CDF1转录因子和CO启动子之间具有较高的结合活性。Western blot检测结果表明:转基因拟南芥植株中的Br CDF1蛋白成功表达。RT-q PCR结果表明,Br CDF1基因在转基因植株中的相对表达量比野生型植株高;CO、FT基因在转基因植株中的相对表达量比野生型低,同时Br CDF1过表达植株较野生型开花晚。[结论]Br CDF1转录因子能与CO启动子结合,从而抑制CO、FT基因的表达,进而影响不结球白菜光周期开花途径。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王惠玉 任海波 李林 刘同坤 程奕秋 侯喜林
[目的]本文旨在揭示不结球白菜GIGANTEA(GI)基因的功能,验证其与CONSTANS(CO)、FLOWERING LOCUS T(FT)基因之间的调控关系以及其在植物抽薹开花中的作用。[方法]以不结球白菜品种‘苏州青’为材料,提取RNA并反转录成cDNA,同源克隆BcGI基因,Gateway构建表达载体pEarleyGate101-BcGI-YFP,利用农杆菌介导法将表达载体注射入本氏烟草中,激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。Gateway构建沉默载体BcGI-RNAi,利用农杆菌介导法将沉默载体导入拟南芥中,观察野生型和转基因植株抽薹期的表型变化。采用RT-qPCR技术,检测GI、CO、FT基因在转基因和野生型拟南芥植株抽薹期的基因表达量。[结果]通过同源克隆,得到BcGI基因,其含有1个3 516 bp的开放阅读框(ORF),编码1 171个氨基酸。亚细胞定位结果显示,BcGI定位于细胞核中。RT-qPCR结果表明,BcGI基因在沉默转基因植株中的相对表达量比野生型植株低;同时当GI基因表达受到抑制时,CO、FT基因在沉默转基因植株中的相对表达量也比野生型明显降低,沉默转基因植株与野生型相比表现为开花延迟且抽薹期莲座叶数明显增多。[结论]BcGI定位于细胞核,参与正向调控下游CO、FT基因的表达,进而影响不结球白菜光周期开花途径。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
彭剑涛 赵大芹 王天文 周秋菊 李桂莲
为揭示结球白菜低温抗性的机理,指导抗寒品种的选育和冬春淡季反季节生产,测定了黔白5号、早皇白、四季王(耐抽薹品种),81-1、C×38、3×C、3-4×C、小杂55(中等抽薹品种),贵蔬3号、亚春19(易抽薹品种)等10个结球白菜品种(品系)的光合及叶绿素荧光特性。结果表明:黔白5号的净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)均最大;耐抽薹品种的净光合速率、气孔导度和胞间CO2浓度(Ci)均高于易抽薹品种,且Pn和Ci主要受气孔因素影响。不同抽薹特性结球白菜品种的光系统II(PSII)最大光化学效率(Fv/Fm)差异不显著,而PSII实际光化学效率(Yield)与光合速率以及抽薹特性之间的关系较为一...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘唱 杨洋 俞静 李燕 刘海龙 张昌伟 侯喜林 李英
[目的]CC-NBS-LRR(卷曲螺旋-核苷酸结合位点-富含亮氨酸重复,CNL)是高度保守的植物抗病蛋白家族。本文旨在克隆和研究CNL基因在不结球白菜抗霜霉病中的作用。[方法]以‘苏州青’c DNA为模板克隆获得BcCNL基因全长,并进行生物信息学分析、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测、亚细胞定位及病毒诱导基因沉默(VIGS)验证。[结果]BcCNL基因含有2 790 bp开放阅读框,编码929个氨基酸,蛋白质相对分子质量为226.7,等电点为2.7。系统进化树结果显示,不结球白菜BcCNL蛋白与野甘蓝的进化关系最近,含有RX-CC、NB-ARC和LRR-3结构域;亚细胞定位显示其定位于细胞膜上。霜霉菌侵染后,BcCNL基因在抗病品种‘苏州青’中的表达量高于感病品种‘矮脚黄’; BcCNL基因的沉默降低了‘苏州青’对霜霉病的抗性。[结论]BcCNL蛋白在进化过程中保守性较高,定位于细胞膜上,BcCNL基因的沉默降低了‘苏州青’对霜霉病的抗性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
任海波 刘同坤 袁敬平 吴小婷 王惠玉 侯喜林
[目的]本文旨在分析不结球白菜BcICE1基因的表达模式并探索其在冷胁迫中的功能。[方法]以不结球白菜品种‘NHCC001’为材料,采用同源克隆的方法获得BcICE1基因的全长序列,并进行生物信息学分析;对‘NHCC001’进行4℃低温和PEG-6000模拟干旱处理,检测BcICE1基因对胁迫的响应;构建过表达载体pEarly Gate-BcICE1,利用注射法将载体农杆菌菌液导入烟草细胞进行BcICE1基因的瞬时表达并检测;构建酵母诱饵载体p GBKT7-BcICE1,转化AH109验证其转录激活活性;将pEarly Gate-BcICE1农杆菌菌液利用蘸花法进行BcICE1基因的遗传转化,并用RT-qPCR和Western blot对阳性苗进行鉴定。通过RT-qPCR对BcICE1过表达拟南芥中冷胁迫相关基因的表达水平进行分析。[结果]克隆获得不结球白菜BcICE1基因,其含有1 338 bp的开放阅读框,编码466个氨基酸,相对分子质量为47.40×103,等电点为5.42;氨基酸的多序列比对和系统进化树结果表明,BcICE1蛋白与欧洲油菜、荠菜和拟南芥ICE1蛋白同源关系较近。亚细胞定位表明BcICE1蛋白定位在细胞核中,具有转录激活性且对冷胁迫与干旱胁迫有响应。BcICE1过表达株系能增强植株的抗寒性,同时在低温处理后BcICE1过表达植株中冷胁迫相关基因At CBF3和COR15A的表达量显著高于野生型植株。[结论]克隆并获得BcICE1过表达拟南芥植株,功能分析表明BcICE1基因能增强植株抗寒性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
文锴 王远 胡蝶 袁敬平 侯喜林 李英
[目的]12-氧-植物二烯酸还原酶(12-oxo-phytodienoic acid reductase,OPR)是茉莉酸生物合成途径的关键酶,催化12-氧-植物二烯(OPDA)还原反应生成茉莉酸化合物,广泛参与植物生长过程中的防御系统。本文旨在克隆和研究不结球白菜Bc OPR3基因,研究其对信号分子和非生物胁迫应答的影响。[方法]对不结球白菜OPR3基因进行克隆、生物信息分析、亚细胞定位,并对其在霜霉病菌、脱落酸(ABA)、茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)、机械伤害、低温和热激胁迫下的表达水平进行了分析。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王松华 杨志敏 吕波 林国庆 李少琼 卢亚萍 徐朗莱
研究了印度芥菜对不同浓度 (0、 2、 4、 8和 1 6 μmol·L-1 )Cu处理的响应。结果表明 ,4～ 1 6 μmol·L-1 Cu抑制印度芥菜根和地上部生物量的积累 ,植株中H2 O2 和丙二醛 (MDA)含量上升 ;根和叶中超氧物歧化酶 (SOD ,EC1 1 5 1 1 )和过氧化物酶 (POD ,EC1 1 1 1 7)活性均随着Cu浓度增加而上升 ;2～ 8μmol·L-1 Cu能提高根中抗坏血酸过氧化物酶 (APX ,EC1 1 1 1 1 1 )活性 ,叶中APX活性最高时的外界Cu浓度为 4 μmol·L-1 ;过氧化氢酶 (CAT ,EC1 ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘世拓 肖栋 许玉超 侯喜林 徐玮玮 韩克 董慧杰 胡春梅
[目的]双半胱氨酸型硫氧还蛋白过氧化物酶Brc2-Cys Prx是过氧化还原蛋白Peroxiredoxins(Prxs)的亚家族。Prxs是植物抗氧化酶防御系统的成员,对清除植物体内活性氧具有重要作用。本文旨在克隆和研究Brc2-Cys Prx基因在不结球白菜处于不同胁迫条件下的表达模式。[方法]以不结球白菜霜霉病抗病自交系‘苏州青’和霜霉病感病自交系‘矮脚黄’为试验材料,利用RACE技术克隆得到不结球白菜Brc2-Cys Prx基因。利用生物信息学方法对该基因进行信息学分析。采用qRT-PCR技术对不结
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董慧杰,韩克,侯喜林,张志硕,胡春梅*
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙艳 王亚娟
在黄瓜幼苗四叶期分别喷施浓度为0,50,100和200μmol/L的水杨酸溶液,1d后,各处理同时涂抹500μmol/L的甲基紫精溶液,4h后测定黄瓜幼苗叶片的生理生化指标,以探讨水杨酸对黄瓜幼苗光氧化胁迫伤害的缓解效应。结果表明,不同浓度的水杨酸溶液对黄瓜幼苗叶片在光氧化胁迫下遭受的伤害有不同程度的缓解作用,可使相对电导率降低19.11%～38.03%,SOD活性增加8.06%～19.32%,丙二醛含量下降11.22%～26.07%,且以100μmol/L的水杨酸溶液效果最佳。
关键词：
黄瓜 水杨酸 光氧化胁迫 缓解效应
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
侯喜林 宋小明
系统总结了南京农业大学近60年来进行不结球白菜种质资源的研究与利用的进展。从研究方法,种质资源的调查、搜集和整理,形态学的观察研究,生物学特性的研究,园艺学分类法的提出,抗性鉴定与分析,主要经济性状的遗传动态,种质资源遗传多样性分析与核心种质构建,种质资源的利用等方面,论述了不结球白菜种质资源研究所取得的成果,并对该项研究进行了展望。
关键词：
不结球白菜 种质资源 研究 利用 展望
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