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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张小辉 许尚忠 高雪 张路培 任红艳 陈金宝
为了研究不对称PCR-SSCP在基因突变检测中的准确性,以鲁西黄牛和荷斯坦奶牛为研究对象,用不对称PCR-SSCP分析技术分析了牛SMAD4基因3′端非翻译区的碱基突变情况,比较了不对称PCR-SSCP和传统PCR-SSCP分析的优缺点。结果表明,鲁西黄牛和荷斯坦奶牛SMAD4基因3′端非翻译区有1个T碱基插入突变位点和1个G→A突变位点,其中G→A突变产生了1个HhaⅠ酶切位点;不对称PCR-SSCP和HhaⅠ酶切分析116头鲁西黄牛和75头荷斯坦奶牛群体G→A突变位点的频率完全一致,说明不对称PCR-SSCP不仅可以用于基因突变的检测,而且具有较高的准确性;不对称PCR-SSCP较传统PC...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王强 王志跃 杨海明 陈五湖 杨建刚
以新扬州鸡胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因作为控制其生长、发育性状的候选基因,通过对IGF-Ⅰ基因主要部分序列进行PCR-SSCP检测,发现了2个多态位点.测序结果表明,IGF-Ⅰ基因存在2个突变位点:插入(G)和(G→C).分析多态位点与0-12周龄鸡生长发育性状的关联性,结果表明:插入(G)突变基因型中,2周龄鸡体重BB型与AB型差异显著(P<0.05),但AA型与AB型和BB型差异均不显著,而(G→C)突变各基因型间没有显著差异;插入(G)突变位点对0-12周龄鸡的龙骨长、胫骨长均没有显著影响,而(G→C)突变位点仅在鸡6周龄时表现出与龙骨长、胫骨长间的差异显著性.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王洪涛 怀文辉 茹炳根 张绍铃
在胰岛素定点突变体合成中 ,对不对称PCR反应中突变位点的引物和末端引物的比例以及退火温度进行优化。结果表明 :PCR反应 5′末端引物与突变引物的配比为 5 0∶1～ 10 0∶1;第 2轮PCR反应退火温度在 6 5～ 70℃较为理想。
关键词：
胰岛素突变体 不对称PCR 条件优化
[期刊] 工业工程
[作者]
王明照 徐兵
主要分析了供应链发生中断后,供应商在与分销商信息不对称的背景下如何设计最优合同中各主要参数,以降低自己的期望损失,同时通过理论公式和数据模型分析了信息不对称对最优合同中各要素以及整个供应链系统的影响,并联系实际对不同情况下供应商的合理风险储备提出建议。
关键词：
突变管理 恢复供应 不对称信息 合理储备
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈晓军 王敬东 殷延勃 马洪文 宋玉霞
根据米香基因的测序结果,设计了4对引物,在0.8%琼脂糖上电泳检测Fgr基因。结果表明,该方法较好地检测粳稻和籼稻米香基因(Fgr),为大规模进行分子标记辅助育种提供有效手段。
关键词：
ARMSPCR Fgr SNP 香稻
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘翠芳 蒋继志 马平 李岩
转基因植物的安全性问题已成为全球争论与关注的焦点,许多国家都加强了对进出口转基因植物及其产品的管理,因此发展转基因产品的检测方法就显得尤为重要。PCR-ELISA是一种检测转基因植物及其产品的有效方法,现对PCR-ELISA方法的原理、优点及其在转基因植物及其产品检测中的应用进行了综述,并对其发展前景进行了分析。
[期刊] 情报学报
[作者]
彭国超 孔泳欣 王玉文
突变词具有前瞻性和情报意义，研究主题突变可预测学科领域的研究前沿和研究热点。本文构建突变词检测多维指标体系，包括无序性、增长性、突变度三个突变特征指标，以及知识融合度指标和影响力度指标。基于无序性和增长性两个维度，运用K-means聚类出突现型关键词（突现词）、强突型关键词（强突词）、弱突型关键词（弱突词）三类突变词。结合各类突变词的突变度、知识融合度和影响力度，识别不同发展形态的突变词。结果表明，高突变度的突现词在初期能获得更多的关注，形成更大的影响力；知识融合度高的突变词具有较高的交叉融合广度和强度，未来更可能发展成为研究热点；影响力度高的突变词具有广泛的关注和一定的研究基础，未来有更高概率成为研究前沿。
关键词：
主题突变 突变检测 多指标融合 聚类分析
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
符雨嫣 王昊德 孙辉 金春林 王海银
目的：分析与传统基因检测技术相比，二代测序法用于非小细胞肺癌突变基因检测的经济性。方法：对国际二代测序法用于非小细胞肺癌的经济学评价进行系统综述。从卫生体系视角出发，构建决策树模型，测算二代测序法（8基因突变联合检测）对比荧光实时定量PCR法（3基因突变联合检测）的成本-效果，并进行敏感性分析。结果：纳入4篇研究，其中2篇研究认为与传统基因检测技术相比，二代测序法用于非小细胞肺癌的突变基因检测具有一定的经济性，但仍需要结合具体情况进一步研究。模型研究结果表明，对比荧光实时定量PCR法（3基因突变联合检测），采用二代测序法（8基因突变联合检测），非小细胞肺癌患者多存活1年所需要增加的诊断成本为97 501.18元，以3倍人均GDP为阈值时，具有成本-效果。结论：二代测序法用于非小细胞肺癌突变基因检测具有一定经济性，但未来仍需要更新数据和结果。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卢宗志 张朝贤 傅俊范 李茂海 李贵军
【目的】近年来,中国东北水稻田抗药性雨久花发生严重,部分地区用苄嘧磺隆已无法有效控制该杂草的危害。为明确该杂草抗药性发生的根本原因,本试验从分子水平上研究了稻田杂草雨久花(Monochoria korsakowii)对苄嘧磺隆的抗药性机理,以确定导致抗药性产生的乙酰乳酸合成酶(ALS)氨基酸突变位点。【方法】利用PCR技术,通过对抗药性雨久花生物型和敏感性雨久花生物型ALS片段进行扩增和基因克隆,最后对DNA序列进行测序比对。【结果】与敏感性的雨久花ALS相比,抗药性雨久花生物型的ALS共有3处发生突变,即第197位脯氨酸突变为组氨酸,第200位蛋氨酸突变为缬氨酸,第388位精氨酸突变为组氨酸...
关键词：
乙酰乳酸合成酶 苄嘧磺隆 雨久花 抗药性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
康磊 刘珂 王建忠 尹才 邱亚峰 魏建超 李蓓蓓 邵东华 李宗杰 粟硕 马志永
[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用，以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒，将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株，并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似；而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达，而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用，并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
魏太云 林含新 谢联辉
聚合酶链式反应及单链构象多态性 (PCR-SSCP)技术作为一种区分检测基因组之间微小差异的有效方法 ,具有快速、简便、灵敏和适用于大样品量筛选的特点 .本研究从变性剂类型、电泳缓冲液的离子强度、交联度、电泳温度、甘油浓度及变性剂类型等方面对影响 PCR-SSCP的电泳条件进行分析 ,以期对该方法的应用提供参考
关键词：
PCR-SSCP 条件优化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄贺 狄生伟 田亚光 王希彪 李和平 张贵学
【目的】研究民猪促乳素受体基因PRLR的多态性与母猪产仔数的相关性。【方法】采用PCR-SSCP技术检测民猪PRLR基因多态性,最小二乘法分析其多态性对母猪产仔数影响的遗传效应。【结果】PRLR基因在民猪中存在多态性,B等位基因为优势等位基因;在PRLR-1座位,对于初产母猪,BB基因型母猪的TNB和NBA比AA基因型母猪分别多0.93头和0.78头(P<0.05);对于经产母猪,BB基因型母猪的TNB和NBA比AA基因型母猪分别多0.62头和0.74头(P0.05)。在民猪群中这两个座...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴泽辉 储明星 李学伟 方丽 叶素成 刘忠慧 陈国宏
目的寻找与产羔数相关的遗传标记,为山羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。方法以控制Belclare绵羊和Cambridge绵羊高繁殖力的生长分化因子9(growthdifferentiationfactor9,GDF9)基因为候选基因,根据绵羊GDF9基因序列设计4对引物,采用PCR-SSCP技术检测GDF9基因外显子2在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)以及低繁殖力山羊品种(波尔山羊、文登奶山羊、辽宁绒山羊、北京本地山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果山羊与绵羊的GDF9基因外显子2核苷酸序列同源性为99%(955/965)。引物1和引物4存在多态性。对于引...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
靳泽华 谢梦利 易辰阳 黄英 付磊 王晓萍 张安定
为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否可以用于鸡细胞的基因编辑。扩增sgRNA靶向序列1 220 bp片段,经T7E1酶切琼脂糖凝胶分析可见约300 bp和900 bp大小的条带,表明感染sgRNA慢病毒的细胞mavs产生了突变。序列测定结果表明sgRNA靶向序列发生了多个碱基缺失的突变。以上结果表明基于慢病毒系统的CRISPR/Cas9技术可对鸡基因组进行编辑。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵秀 朱小龙 何亚文 梁永恒
[目的]探讨酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变对细胞自噬和液泡形态的影响。[方法]通过尼罗红染色观察酵母中磷脂合成相关基因突变后脂滴的形态;用绿色荧光蛋白(GFP)标记细胞自噬蛋白Atg8后,采用荧光显微镜和免疫印迹试验检测突变体细胞自噬的发生情况,并使用荧光染料FM4-64检测液泡形态;此外,检测相关突变体对吩嗪-1-羧酸(申嗪霉素)的敏感性。[结果]在营养有限条件下,酿酒酵母中磷脂合成相关基因突变体中脂滴的大小或数量受到不同程度的影响,但细胞自噬在常规检测条件下正常;其中磷脂酸胞苷转移酶编码基因CDS1突变导致液泡形态异常(碎片化),而其他磷脂合成相关基因突变不影响液泡形态;回补CDS1后,c...
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