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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
钱建飞 陈溥言 蔡宝祥
收获马立克氏病病毒(MDV)3个不同血清型的细胞培养上清,用饱和硫酸铵法分别浓缩制备 A 抗原.经琼脂免疫扩散试验和 ELISA 抑制试验初步证明:MDV-GA 株(血清Ⅰ型)产生的 A 抗原 GA-A 与火鸡疱疹病毒 HVT-FCl26株(血清Ⅲ型)的 A 抗原 HVT-A 相似;而 MDV-SB-1株(血清Ⅱ型)的 A 抗原SB-1-A 与 GA-A 和 HVT-A 均不同.GA-A 于感染后第4天就能用琼扩检测到,并维持到第7天以后,而且产量较高;而 HVT-A 仅于感染后第5、6天呈现琼扩阳性,且滴度较低。由 MDV 强毒致弱的毒株 MDV-Mdll/75c 用琼扩未能检测到,可能已丧...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴贤福 蔡宝祥 陈溥言
将ＭＤＶＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中含Ｉ３片段的质粒ｐＡＣＹＣ１８４和Ｋ３片段的质粒ｐＨＣ７９扩增。用碱裂解法抽提质粒后，利用相应的限制性内切酶切出目的基因片段，连接到合适的载体上，构建了完整的ＭＤＶＢ抗原基因克隆载体。通过内切酶分析、地高辛（ＤＩＧ）—探针原位杂交、ＤＮＡ序列测定，确认克隆的Ｂ抗原基因正确。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨宝华 闵永洁 陈溥言 蔡宝祥 王启松
根据已知A抗原基因设计并人工合成了两段寡聚核苷酸片段并进行末端标记作为探针,与pAcyc184 MDV BamHI-B 质粒经过 EcoRI、pvu Ⅱ酶切电泳后作 Southern 转印杂交,其中2.2kb 片段杂交阳性.将此片段与 pBluescript(PBS)载体连接转化 E.coli JM109菌株,经原位杂交、酶切分析鉴定,得到3株 pBSA2.2k 阳性克隆.进一步酶切证明,A 抗原基因存在于此片段中.
关键词：
马立克氏病病毒 A抗原基因 鉴定 亚克隆
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
毛芝娟 楼丹 吴雄飞 楠田理一 陈昌福
采用不同血清型哈维氏弧菌Vibrio harveyi 624、809和106等3个菌株,制备成福尔马林灭活菌苗,注射接种大黄鱼4周后,通过血清中凝集、交叉凝集抗体效价测定以及活菌攻毒试验,证明了3个菌株制备的菌苗抗原性存在差异。
关键词：
哈维氏弧菌 血清型 抗原性
[期刊] 华北农学报
[作者]
宿靖伟 罗俊 王新卫 迟佳琦 禹乐乐 党露 赵朴 滕蔓 张改平
为了解鸡马立克氏病病毒流行毒株的分子特征,对2012-2014年河南省发病鸡群的临床病料进行了采集,并对MDV 132 bp重复序列进行了PCR扩增,同时对meq、g E、g I基因进行了克隆和序列测定。结果表明,9份病料中均可扩增出与132 bp双拷贝大小相符的PCR主产物;meq、g E、g I基因的核苷酸序列同源性与国内外参考毒株相比,分别为98.5%~100%,98.8%~100%和98.0%~100%;基于这些基因构建的系统发生树的分析结果表明,与美国、澳大利亚、日本以及印度的MDV分离株相比,目前,河南省鸡群中流行的MDV与此前分离的河南流行株进化关系较近,并且与其他国内分离株共同...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邱亚峰 葛菲菲 陈溥言
【目的】为了构建MDV1细菌人工染色体,以便快速有效地进行重组病毒的筛选,进行了含E.coli F因子的马立克氏病病毒1型(MDV1)转移载体的构建。【方法】利用DNA重组技术,构建了含有E.coli F因子的马立克氏病病毒1型(MDV1)转移载体,利用脂质体,将线性化的转移载体转染入已感染CVI988病毒的CEF,用MX-HAT药物筛选3代以后,用X-gal染色,挑取阳性克隆。【结果】经测序分析发现,人工体外合成的单一loxP位点,序列正确,另外,同源重组左臂和右臂序列正确,并且相对连接。利用SphⅠ和NheⅠ双酶切,鉴定出含有同向LoxP位点的转移载体,将其命名为pUS-BGS。将该载体用...
关键词：
马立克氏病病毒 细菌人工染色体 F因子
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
缪德年 王秀花 姜法铭 陈溥言 樊生超
将马立克氏病病毒(MDV)超强毒株VP22基因插入真核表达载体pEGFP-C1中EGFP基因的下游,构建EGFP-VP22融合基因真核表达载体pEGFP-VP22。将其转染至中国仓鼠卵巢细胞(CHO-k1)中,通过荧光显微镜观察EGFP的表达情况,并用RT-PCR检测VP22基因的表达。检测证实EGFP和VP22在CHO细胞中均得到了有效表达。
[期刊] 华北农学报
[作者]
周雪媚 霍惠玲 佘锐萍 李永清 冯国民 章振华 王宏俊
本试验首先用RT-PCR方法扩增出H9N2亚型禽流感病的HA基因,大小约1 700 bp,将其克隆到真核表达载体pcDNA中,并将该真核表达载体上的CMV启动子控制的含LacZ和HA基因表达盒克隆入马立克氏病病毒US2基因中,成功的构建了马立克氏病病毒的转移载体。然后,通过脂质体方法转染已感染马立克氏病病毒的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,通过蓝斑筛选获得重组病毒。该重组病毒通过PCR方法鉴定证实其基因组中含有完整的HA基因。免疫酶反应和Western-blot证实重组病毒表达了禽流感HA蛋白,表达的HA蛋白具有血凝活性。
关键词：
禽流感病毒 HA基因 重组马立克氏病病毒
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
任晓明 古市雅哉 林正信
以鸡马立克氏病脾脏淋巴瘤继代细胞系MDCC MB1(MSB1)为研究对象 ,用southern和northern斑点分子杂交放射自显影等方法 ,证明了 5 氮胞苷可以阻断MSB1细胞DNA的甲基化 ,且去甲基化的DNA转录区和部分非转录区有特异增幅的转录产物mRNA ,说明这些区基因转录活性上升。用 5 氮胞苷处理MSB1细胞使其去甲基化后 ,该细胞DNA的内切酶BamHⅠ区域对DNaseI敏感性增高 ,该片段区的基因表达活性也增高。以上结果提示 ,DNA的去甲基化可以提高MDV的基因表达 ,进一步说明MDVDNA的甲基化在抑制MDV基因表达 ,维持MDV在淋巴瘤细胞株中潜伏感染状态可能起...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
缪德年 王秀花 封江南 姚惠娟 吴琼杉 樊生超 陈溥言
以马立克氏病病毒超强毒(RB1B株)UL49为靶基因,利用计算机辅助设计UL49基因特异的siRNA,再定向克隆至pSilencerTM2.1U6neovector载体中构建siRNA表达重组体,转化DH5α菌株,提取质粒酶切鉴定后,进行测序分析,证实为所需序列。以上结果表明,针对马立克氏病超强毒UL49基因的siRNA表达质粒已构建成功。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
余祖华 滕蔓 丁轲 闵亚杰 禹乐乐 宿靖伟 程相朝 罗俊
【目的】了解马立克氏病病毒(Marek’s disease virus,MDV)河南分离株Meq基因的分子特性,为中原地区MDV流行情况提供较详细的信息,为更好地防控MD奠定基础。【方法】应用PCR方法分别扩增了17株MDV河南省野毒分离株的Meq基因片段,克隆测序后,将各毒株Meq基因序列与vv+MDV 648A株、vvMDV RBIB株、vMDV GA株、mMDV疫苗株CVI988株和814株的Meq基因序列进行比对分析。【结果】17株分离株中除HNGS201和HNLC503的Meq基因扩增产物较预期稍大外,其余15个的片段长度为1 020bp,与预期长度相符;MDV河南分离株之间及其与参...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈士友 陈溥言 蔡宝祥
利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌禽呼肠孤病毒(ARVS)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,腹水效价在10~(-3)～10~(-5)之间。用琼脂扩散试验鉴定,5株属 IgGl,2株属IgG2b,1株属 IgG3.ELISA 阻断试验表明,4个 ARVS 分离株的抗原结构明显不同,提示利用 McAb 进行 ARVS 的分型具有很大潜力.在与两个国内毒株(广州分离株和 NAU-8902)分别发生特异性反应的4株 McAb 中,有3株是相同的,说明两者具有很近的亲缘关系.试验还发现,McAb D19株能被试验的所有毒株阻断,提示 D19株有希望成为检测 ARVS 的群特异性 McAb...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗满林 陈溥言 张林元 蔡宝祥 邓小昭
将马立克氏病病毒(MDV)GA 株基因文库中 BamH I I_3和 K_3克隆片段分别用 BamH I 加 Sal I 和 BamH I加 EcoR I 双酶切消化。含有编码 MDV 糖蛋白 B(gB)部分 DNA 的2.B kb、BamH I-Sal I 片段和1.1kb、BamH I-EcoR I 片段与 Sal I-EcoR I 消化的载体 pUR 222通过三聚体连接方式相连接。限制性核酸内切酶分析表明,重组质粒含有 MDV gB 基因,并且 MDV GA 株 gB 基因克隆在 EcoR I,Hind,Ⅲ,Xba I 和 Sal I 切点与 MDVRBIB 株相同。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
魏雪涛 李银 鲍恩东
根据已发表的马立克氏病病毒(MDV)血清I型与鸡白介素2(IL2)DNA序列,设计两对引物,用PCR扩增出MDVgB基因和IL2基因,并克隆入pEGFPC1载体,构建了载体pC1gBIL。通过酶切分离外源基因表达盒,并将外源基因表达盒插入pTK2B质粒,成功构建了转移载体pTCgBIL。将转移载体pTCgBIL转染CEF细胞,培养36～48h后,经荧光显微镜观察,有荧光出现,证明该载体得到表达,并通过Westernblotting鉴定证明MDVgB和IL2的融合基因得到了有效的表达。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗满林 陈溥言 张林元 蔡宝祥 邓小昭
含有马立克氏病病毒糖蛋白Ｂ基因重组质粒的改造及其鉴定罗满林，陈溥言，张林元，蔡宝祥，邓小昭（南京农业大学动物医学院，２１００９５；南京军区军事医学研究所）ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＰＬＡＳＭＩ...
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