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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 罗宇良 曾妍雄 魏富兵
从 3种不同血清型的柱状嗜纤维菌中提取菌体脂多糖 (LPS) ,测定了其中蛋白质含量及其成分的变化 ,并分别作为免疫原接种翘嘴鳜 ,对LPS的免疫原性进行了比较。结果表明 ,不同血清型的柱状嗜纤维菌菌体LPS中蛋白质含量没有明显差别 (t测验 ,P >0 .0 5 ) ,而其中蛋白质成分则有明显的血清型特异性。不同血清型的菌体LPS对翘嘴鳜的免疫原性没有明显差别 (t测验 ,P >0 .0 5 )
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 曾妍雄 楠田理一
从培养不同时间后的柱状嗜纤维菌中提取菌体脂多糖 (LPS) ,测定了其中蛋白质含量及成分的变化 ,并分别作为免疫原接种翘嘴鳜对其免疫原性进行了比较。结果表明 ,培养时间对菌体LPS中蛋白质含量没有明显影响 ,对其蛋白质成分则有一定影响 ,而菌体LPS中蛋白质成分与其免疫原性有关 ,从培养 36h的菌体中提取的菌体LPS的免疫原性最强
关键词：
柱状嗜纤维菌 脂多糖 翘嘴鳜 免疫原性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 楠田理一
从柱状嗜纤维菌提取菌体脂多糖（ＬＰＳ）作为免疫原，分别注射接种翘嘴鳜、斑鳜和大眼鳜后，检测了供试鱼血清中凝集抗体效价和血液中白细胞吞噬活性以及采用直接荧光抗体法测定了受免鳜血液中各种淋巴细胞数量的变化。结果表明，接种ＬＰＳ后，３种受免鳜血清中凝集抗体效价均在第３周达到峰值，血液中吞噬细胞的吞噬活性和Ｔ、Ｂ淋巴细胞样细胞的比率均在第２周最高。但是，３种受免鳜对ＬＰＳ的免疫应答水平则显示出种间差异，以翘嘴鳜最高，斑鳜其次，大眼鳜最低。
关键词：
翘嘴鳜 斑鳜 大眼鳜 脂多糖 免疫应答
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福
采用不同方法提取的柱状嗜纤维菌脂多糖（ＬＰＳ）作为抗原，对鲤注射免疫后，通过测定受免鲤血清中凝集抗体效价、沉降抗体、白细胞吞噬活性和进行强毒攻击的方法，比较了不同方法提取ＬＰＳ的免疫原性，结果表明，Ｂｏｉｖｉｎ法和Ｐｈｅｎｏｌ－ｗａｔｅｒ法较ＥＤＴＡ法提取ＬＰＳ的免疫原性强，而Ｂｉｏｖｉｎ法和Ｐｈｅｎｏｌ－ｗａｔｅｒ法提取ＬＰＳ的免疫原性则没有明显差别。
关键词：
鲤 柱状嗜纤维菌 脂多糖 免疫应答
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福
采用不同血清型的柱状嗜纤维菌（Ｃｙｔｏｐｈａｇａｃｏｌｕｍｎａｒｉｓ）Ｇ４，ＣＴＳ５，和Ｍ１５７等３个菌株，分别制备成福尔马林灭活菌苗（ＦＫＣ）和热灭活菌苗（ＨＫＣ），注射接种草鱼４周后，通过测定血清中凝集、交叉凝集抗体效价以及活菌攻毒试验，证明了３个菌株制备的菌苗的抗原性不存在差别。
关键词：
柱状嗜纤维菌 血清型 抗原性
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈昌福
采用从各种患病淡水鱼类上分离到的柱状嗜纤维菌（Ｃｙｔｏｐｈａｇａｃｏｌｕｍｎａｒｉｓ）４０个菌株，通过交叉凝集和琼脂内扩散反应，研究了Ｃ．ｃｏｌｕｍｎａｒｉｓ的血清型。结果表明：根据不同菌株的热稳定性具有明显差别的现象，首次证明了从我国各地收集的Ｃｃｏｌｕｍｎａｒｉｓ菌存在３个不同的血清型。
关键词：
柱状嗜纤维菌,血清型
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 史维舟 李静 樊明兴
从患细菌性烂鳃病的翘嘴鳜分离的柱状嗜纤维菌制作的酚灭活菌苗，接种翘嘴鳜３周后，受免鱼体血清中凝集抗体效价上升到１：２５６～２０４８；血液中白细胞的吞噬活性显著地高于对照鱼（Ｐ＜０．０５）；毒力攻击结果表明免疫保护力达到１００％。
关键词：
翘嘴鳜 细菌性烂鳃病 免疫反应
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李淑芳 唐磊 李杰 李贵阳 王晓冉 王小鹿 丁山 莫照兰
鳗弧菌(Vibrio anguillarum)O3血清型菌株是感染鱼类的重要病原菌,本文研究了3株O3血清型鳗弧菌(SMP1、SMP3和SMP4)灭活疫苗的免疫原性和免疫保护。首先在牙鲆(Paralichthys olivaceus)体内对3株鳗弧菌进行复壮;检测复壮后的菌株毒力,检测的3株鳗弧菌对蓝蔓龙(Trichogaser trichopterus)的半数致死量(LD50)分别为105.1 CFU/ml(SMP1)、104.7 CFU/ml(SMP3)和105.4 CFU/ml(SMP4);制备了3
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福
从鲤胸腺、头肾和血液中分离淋巴细胞，在添加不同剂量的柱状嗜纤维菌脂多糖（ＬＰＳ）的ＲＭＰＩ１６４０培养基中培养一定时间后，采用ＭＴＴ比色法测定ＬＰＳ对淋巴细胞的刺激指数（ＳＩ），比较了ＬＰＳ对不同组织中离体培养淋巴细胞的转化率。结果表明，ＬＰＳ添加量和培养时间对淋巴细胞的转化率都有明显的影响，当ＬＰＳ添加量为２０μｇ／ｍｌ，培养时间为７２ｈ，鲤各种组织中淋巴细胞的转化率达到峰值。血液中淋巴细胞转化率最高，ＳＩ达到１．７７；头肾其次，ＳＩ为１．３３；而胸腺中淋巴细胞的转化率最低，ＳＩ仅为１．０３。
关键词：
鲤 脂多糖 淋巴细胞 转化率
[期刊] 西南农业学报
[作者]
简思杰 晁嘉 孙薇 陈春琳 陆娟 刘勇 刘祥
【目的】旨在评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能，为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列，揭示不同菌株间的亲缘关系；分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件；包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫；Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价；ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用；酸性、碱性磷酸酶（ACP、AKP）测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能；组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性，不同菌株间亲缘关系较近，尤其在气单胞菌间亲缘关系更近；AHA2991的最佳诱导条件为：菌液浓度OD_(600) =1.0，IPTG终浓度0.1 mmol/L，在28 ℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性，其效价为1:800；体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用，滴度可达1:3 200；ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫；组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性，有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张莉 康雪燕 章振华 李永清 盖丽丽 姜世金 张培君
为了获得具有良好免疫活性的基因工程抗原蛋白，利用毕赤酵母真核表达系统，表达猪传染性胃肠炎（河北分离株）的纤突糖蛋白。根据Ｇｅｎ Ｂａｎｋ ＴＧｅＶ Ｓ基因设计一对引物，经ＰＣＲ扩增出长２．２ ｋＢ的目的基因Ｓ，将Ｓ基因亚克隆于Ｐ ＰＩＣ９ｋ载体，转化ＴＯＰ１０感受态，ＰＣＲ、酶切鉴定阳性克隆，ＳａｌⅠ线性化重组穿梭质粒ＰＰＩＣ９ｋ－Ｓ，然后电转ＧＳ１１５感受态，利用Ｇ４１８抗性进行多拷贝整合子初步筛选，提取基因组并做ＰＣＲ鉴定，得到阳性菌株，经诱导发酵后，上清发酵液经ＳＤＳ－ＰａＧｅ电泳检测，显示获得分子量为８２ ｋＤａ左右的目的蛋白，同时用ＷｅＳＴｅＲｎ－ＢｌＯＴＴＩｎＧ检测到一条特异的目的．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐进 周勇 陈倩 曾令兵
为了揭示鲤春病毒血症病毒（ｓｐｒｉｎｇ ｖｉｒｅｍｉａ ｏｆ ｃａｒｐ ｖｉｒｕｓ，ｓｖｃｖ）糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域，本研究对ｓｖｃｖ的糖蛋白基因进行截短表达，并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。通过ｓｏｓｕｉ以及Ｄｎａｓｔａｒ ６．０软件对ｓｖｃｖ糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后，采用ｒｔ－ｐｃｒ对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增，并构建重组表达质粒ｐ ｇｅＸ－ｇｔｒ，对其进行诱导表达后获得截短的ｓｖｃｖ糖蛋白的重组蛋白。将表达的重组蛋白进行纯化复性后，作为免疫原制备兔抗血清，采用ｅＬｉｓａ法检测其效价，采用免疫印迹以及间接免疫荧光．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄辉 毛芝娟 陈吉刚
根据已发表的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)外膜蛋白OmpU的基因序列设计1对特异性引物,应用聚合酶链式反应(PCR)方法,自哈维氏弧菌致病菌株基因组中扩增获得一段约1 000 bp的序列,构建重组载体pMD18-T-OmpU;测序结果表明,该基因与已发表的哈维氏弧菌外膜蛋白OmpU序列存在98%以上的相似性,该序列在GenBank上的登录号为FJ919231。构建表达质粒pET-30a(+)-OmpU后转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3),在IPTG诱导下实现高效表达,SDS-PAGE显示重组蛋白分子质量约为41 ku,与预期基本相符。重组蛋白以包涵体形式表达。以脲素法得到...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
郝贵杰 沈锦玉 潘晓艺 尹文林 曹铮
胞外蛋白酶(ECPase)是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子,经鉴定其为半胱氨酸蛋白酶,分子量约55kD,能够分解脱脂奶中的酪蛋白,命名为1108-ECPase。本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活(YZ为由本实验室构建的能够分泌目的蛋白酶的重组菌),并利用这个方法确定了细菌分泌ECPase达最高峰的培养时间为36h,粗提ECPase最适的饱和硫酸铵浓度为70%。GYC1108-1和YZ培养上清经硫酸铵盐析,SephadexG-25凝胶过柱后,得到较为纯化的1108-ECPase和YZ-ECPase。选择白油、蜂胶和弗氏3种...
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