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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
曾燕 孙朋 倪学勤 杨杰 曾东 张洪瑜
为探讨瘤胃细菌多样性,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(Polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)技术结合共性及特异性条带的克隆测序和聚类分析及主成分分析,对牛体外厌氧条件下瘤胃细菌在CMC、PCS、J、K培养基及37和50℃培养温度下的多样性进行研究。结果表明:1)37℃条件下不同培养基的DGGE图谱差异较大,虽然具有较高的平均条带数,CMC和K培养基样品分别为20和27条,但各样品间的相似性系数较低,J和CMC培养基间的相似性系数为0.84,J和PCS培养基间的相似性系数仅为0....
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
毛胜勇 陈洁 姚文 朱伟云
采用体外厌氧共培养技术,研究了山羊瘤胃真菌对瘤胃细菌发酵的影响。结果表明:在瘤胃真菌与瘤胃细菌共培养24 h内,瘤胃真菌对瘤胃细菌表现出一定的抑制作用,共培养组24 h时底物稻草表观干物质消失率(5.85%)、总挥发性脂肪酸浓度(28.21 mmol/L)及乙酸浓度(20.32 mmol/L)显著低于瘤胃细菌培养组(10.49%、32.66 mmol/L和24.39 mmol/L);而共培养组在48 h和72 h时稻草表观干物质消失率(24.37%、29.04%)均高于瘤胃细菌培养组(21.69%、26.41%);试验结果同时显示,经灭菌处理的瘤胃真菌发酵液可显著降低瘤胃细菌对稻草片段的降解活...
关键词：
瘤胃真菌 瘤胃细菌 共培养
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈赞明 韩正廉
在系列Ⅰ（青草、干草、稻草）和系列Ⅱ（稻草添加精料及非蛋白氮）日粮条件下．分别测定了３头装有永久性瘤胃瘘管的去势公水牛瘤胃真菌孢子数量，体外培养１２０ｈ的混合真菌胞外羧甲基纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ）和滤纸酶（ＦＰａｓｅ）的活力变化。结果表明：青草期瘤胃真菌数量及ＣＭＣａｓｅ和ＦＰａｓｅ活力均显著高于稻草期（Ｐ＜０．０５）；干草期ＣＭＣＢｓｅ和ＦＰａｓｅ活力居中。稻草添加精料日粮时．稻草日粮（！期）添加混合精料（２ｋｇ／ｄ）（Ⅱ期），瘤胃真菌数量无明显变化，但ＦＰａｓｅ活力显著降低（Ｐ＜０．０５）；精料加羟甲基尿素（８０ｇ／ｄ）添加于稻草日粮（Ⅲ期）对瘤胃真菌数量基本无影响，ＣＭＣａｓｅ和ＦＰａｓ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈赞明 陈杰 陈伟华
采用3 H -TdR掺入法 ,分 3个系列分别研究了不同剂量五肽胃泌素 ( pentagastrin)对体外原代培养的牛瘤胃上皮细胞DNA合成的影响 ,五肽胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对五肽胃泌素营养作用的影响 ,以及五肽胃泌素对新生奶公牛瘤胃上皮细胞DNA合成的影响。结果如下 :1)用终浓度 10 -11,10 -10 和 10 -9mol·L-1的五肽胃泌素分别处理成年奶牛瘤胃上皮细胞 ,使3 H -TdR掺入量增加 30 4 2 % ,2 4 2 6 %和 4 7 16 % (P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
金鑫 张曼 王云鹤 魏方 温婧怡 杨银凤
本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养。在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定。然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方。结果表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞。经纯化后传代的细胞呈现均一的"铺路石"形态,生长曲线明显呈"S"形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达。此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为V_(FBS)∶V_(DMEM)∶V_(DMSO)=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好。因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法。
[期刊] 草业科学
[作者]
刘俊英 许文博 田沛
为进一步开发利用羊茅属(Festuca)内生真菌，筛选适于内生真菌生长的培养基并比较不同菌株的生长速度，本研究设置了不同的生长培养基，包括不同酸碱度(pH=4、5、6、7、8、9、10)；不同碳源(葡萄糖、麦芽糖、乳糖、D-木糖、D-山梨糖醇、可溶性淀粉)；不同氮源(蛋白胨、胰蛋白胨、硝酸钠、硝酸铵、尿素、草酸铵、硝酸钾)和不同培养基{马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato dextrose agar，PDA)、马铃薯蔗糖琼脂培养基(Potato sucrose agar，PSA)、察氏培养基(Czapek agar)、玉米粉琼脂培养基(Corn meal agar，CMA)和水琼脂培养基(Water agar，WA)}，选择11株从羊茅属植物分离的香柱菌属(Epichlo?)内生真菌(菌株ID：G1、G2、G3、G4、291-4、291-14A、1、2、9、57A、84F)在这些不同培养基进行培养，探究上述菌株在不同培养条件下生长速度的差异。结果表明，培养基种类和pH对内生真菌的生长速度和产孢速度均有显著影响(P<0.05)，内生真菌的最适生长的pH范围为4～7，利用能力最强的碳源为D-山梨糖醇，氮源为蛋白胨，菌丝生长较适宜的培养基为PDA和PSA培养基，其中生长速度最快的是菌株G1，生长速度最慢的菌株是291-4和菌株291-14A。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王梦芝 王洪荣 曹恒春 李国祥 张洁
【目的】研究特定氨基酸在人工瘤胃体外培养条件下如何影响瘤胃微生物群系特征及其发酵。【方法】研究中以3只瘘管山羊作为瘤胃液供体,采用底物去除技术,底物设计分别为:全量必需氨基酸组(TEAA),组氨酸、赖氨酸、蛋氨酸和支链氨基酸(BCAA)的缺省组。【结果】底物对培养液pH均值没有显著性影响,但各组pH值随时间的变化模式有所不同;培养液氨氮浓度较高,在10.99～30.51mg/100ml范围变动,各组氨氮浓度随时间的变化模式也有明显的不同;特定氨基酸缺省对微生物蛋白产量限制程度不同,以BCAA缺省对微生物蛋白产量的限制最大,相对于全量组混合微生物蛋白下降了44.52%。研究还发现底物对微生物区系...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡新军 粟建文 袁祖华 李勇奇 刘志敏
应用二次正交旋转通用组合设计,研究了培养基中蔗糖、Ca2+和硼酸3浓度对苦瓜花粉体外萌发的影响,获得了相应的数学模型,解析了各因素对苦瓜花粉萌发率的主效应和互作效应,通过模型寻优获得了适于苦瓜花粉体外萌发的最优培养基配方.结果表明,3种成分对苦瓜花粉萌发率的影响从大到小依次为蔗糖、硼酸、Ca2+.在本试验条件下,苦瓜花粉萌发率大于73%的培养基配方为:蔗糖质量浓度8.0%～8.8%,硼酸浓度1.59～1.84mmol/L,Ca2+浓度2.98～3.44mmol/L.
关键词：
苦瓜 花粉萌发 培养基
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韦玥瑞 李科南 张晓东 娜梅拉 娜仁花
研究不同饲粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃液细菌多样性及群落结构的影响。选择24只健康的8月龄、体重约25kg的内蒙古绒山羊母羊,随机分为4组,每组6只,分别为苜蓿组(G1)、苜蓿补饲精料组(G2)、玉米秸秆组(G3)和玉米秸秆补饲精料组(G4),试验期共25d,其中预饲期20d。在正式试验期第5天,经口腔采集瘤胃液,利用高通量测序技术进行瘤胃细菌多样性分析。结果表明:基于相似性>97%的原则,4组样品共产生1 399个操作分类单元(OTU),共享OTU 1 040个,约占总数的74.34%;各组α多样性指数指标无显著性差异(P>0.05)。各组门水平最优势菌为拟杆菌门,科水平最优势菌为普雷沃氏菌科,属水平最优势菌为普雷沃氏菌属,在所有占总细菌比例大于1%的瘤胃细菌中,G2组软壁菌门比例显著高于G3和G4组(P<0.05),G1组毛螺旋菌科比例显著(P0.05)。综合得出,不同饲粮类型条件下,内蒙古绒山羊最优势菌门为拟杆菌门,最优势菌科是普雷沃氏菌科,最优势菌属是普雷沃氏菌属;不同饲粮类型对内蒙古绒山羊瘤胃菌群结构影响不明显。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨博智 周书栋 张竹青 戴雄泽 李立恒 谢达平
选用试验前期筛选出的易产生愈伤组织和胚状体的8个不同基因型辣椒进行花药培养,对基本培养基成分、激素种类和浓度、材料基因型等影响花药培养的因素进行研究.结果表明:1)NTH培养基为适宜于辣椒花药培养的最佳培养基,MS和B5培养基次之.2)以NTH为基本培养基培养红艳花药,0.5mg/LNAA+1.0mg/LKT+0.3mg/LBA+1.0mg/L2,4-D是花药愈伤组织诱导培养最适宜的激素组合;0.3mg/LNAA+1.0mg/LKT+0.1mg/LBA是花药胚状体诱导培养最适宜的激素组合.3)在相同条件下,不同基因型辣椒花药培养后的愈伤组织诱导率和产胚率均不同,愈伤组织诱导率为8.0%~23....
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵激 邹学校 张竹青 杨博智 周书栋
以灯笼椒、泡椒、线椒3种类型21个辣椒品种为试材,研究NTH、MS、B5培养基和在NTH、MS、B5培养基中分别添加3g/L活性炭+0.5mg/LNAA+1.0mg/LKT+0.1mg/L6-BA+5mg/LAgNO3的培养基NTH1、MS1、B51对辣椒花药培养效果的影响.结果表明,在供试品种中能诱导出胚状体的品种占71.43%,胚状体诱导率为0.41%～2.69%;按类型统计,分别有83.33%的灯笼椒、69.23%的泡椒、50.00%的线椒能诱导出胚状体;愈伤组织诱导率和胚状体诱导率的平均值从大到小依次为MS1、NTH1、B51、MS、NTH、B5,其中,MS1和NTH1差异不显著,两者...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
刘欢 俞勇 廖丽 刘双 陈波
研究了南极长城湾潮间带海绵共附生可培养细菌多样性及其疑似新种应用有利于放线菌生长的选择性培养基ISP2从长城湾海绵动物组织中分离出120株细菌,基于这些菌株的16S rRNA基因序列开展系统发育分析。结果显示,所分离菌株隶属于三个细菌门五大类群的11个目、22个属,表明长城湾海绵共附生细菌的种属分布较广、多样性非常高。其中红球菌Rhodococcus属占优势,另外包含α-变形菌纲Puniceibacterium属、放线菌门Aeromicrobium属、β-变形菌纲Limnobacter属等罕见种属。16S
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
游玲 魏琴 郭华 张云
【目的】研究山苍子可培养内生细菌的多样性。【方法】利用添加植物组织浸提液的营养琼脂培养基分离山苍子根、茎、叶及果实中的可培养内生细菌,采用16SrDNA序列鉴定法对分离获得的山苍子可培养内生细菌进行鉴定。同一组织内,对16SrDNA序列及形态完全一样的菌株合并冗余,用Clustalx对分离得到的菌株16SrD-NA进行排序,构建Neighbor-Joining系统进化树,并计算Jaccard指数和多样性指数。【结果】共分离得到52株山苍子可培养内生细菌(根23株、茎8株、叶7株、果实14株),分属于芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、Paenochrob...
关键词：
山苍子 可培养内生细菌 多样性
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杨小玲 侯正仿 季静 崔少杰 王罡
以安祖花嫩叶为试材,研究安祖花品种、培养基不同组分和培养温度对叶片愈伤组织诱导率的影响。结果表明,品种是影响安祖花叶片愈伤组织诱导率的主要因素;培养基成分和培养温度影响叶片愈伤组织诱导率,当6-BA浓度为0.5mg·L-1时,嫩叶形成愈伤组织能力较强;将硝酸铵用量减少至MS配方量的1/2时,叶片愈伤组织诱导率没有变化,但当硝酸铵和氯化钙用量同时减至1/2时,叶片愈伤组织诱导率提高;采用21～26℃变温培养较恒温培养更能促进叶片愈伤组织的形成。嫩叶在改良MS(1/2硝酸铵+1/2氯化钙)+0.5mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 NAA培养基中,日温26℃,夜温21℃的变温暗培养,叶片愈...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
徐歆雅 陈晴 吴郡颖 戴林刚 温宇珂 齐浩然 余秀梅 陈强
【目的】明确不同地膜覆盖对白及生长及根际土壤可培养细菌遗传多样性的影响，为生物质膜覆盖在白及种植上的应用提供理论支撑。【方法】采用大田试验种植白及，设置不覆膜（CK）、覆盖生物基质膜（BM）、覆盖塑料地膜（PM）3个处理，分别测定田间杂草去除率、白及农艺性状、白及根际土壤理化性质和根际土壤可培养细菌遗传多样性。【结果】覆膜处理（PM、BM）可有效抑制杂草生长，以BM抑制杂草效果最好，杂草去除率达99.74%。生物质膜覆盖可有效促进白及生长，与CK和PM相比，BM处理的白及叶片长宽比分别显著提高26.55%和22.03%，SPAD值显著增加21.68%和18.98%（P＜0.05）；BM处理可显著提高土壤肥力，土壤有机质、速效氮、速效磷、速效钾含量分别比CK处理上升26.58%、35.34%、49.80%、47.43%（P＜0.05）。本实验从CK、PM和BM处理土壤分别获得26、23和29株细菌，BOXA1R形成42个遗传群，代表菌株的16S rRNA基因系统发育分析表明，供试菌株分布于8个属，较好地揭示了菌株间的遗传多样性。同时，不同处理土壤优势类群也存在差异，CK处理的优势细菌为粘着剑菌，占比15.4%，BM为假蕈状芽孢杆菌，占比13.8%，PM为花椒芽孢杆菌，占比17.4%。单独从BM处理白及根际土壤分离得到枯草芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌等9个具有促生功能的细菌种群。【结论】生物质膜覆盖种植白及在去除杂草、促进白及生长、有效提升土壤养分方面表现出优良的效果，具有良好的应用前景。
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