【目的】制备骨蛋白肽（livestock and poultry bone peptides,LBPs）用于功能性骨源食品的开发是畜禽骨副产物高值化加工利用的重要途径之一。选取4种主要畜禽骨原料基于相同工艺分别制备LBPs，对比分析其理化特性与生物活性，为功能性骨源食品的开发及畜禽骨资源的高值化加工利用提供参考。【方法】以牦牛腿骨、黄牛腿骨、猪腿骨及鸡腿骨为原料分别制备牦牛骨蛋白肽（yak bone peptides,YBPs）、黄牛骨蛋白肽（bovine bone peptides,BBPs）、猪骨蛋白肽（porcine bone peptides,PBPs）、鸡骨蛋白肽（chicken bone peptides,CBPs），并对4种LBPs基本营养组分、氨基酸组成、分子量分布、粒径分布等理化性质进行表征；对比分析4种LBPs的促成骨细胞增殖、促巨噬细胞增殖、血管紧张素转换酶抑制（angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI）、抗氧化等生物活性差异。【结果】YBPs、BBPs和PBPs粗蛋白含量分别为（89.70±0.77）%、（90.43±0.88）%和（89.36±1.32）%，显著高于CBPs((79.18±1.49)%);4种LBPs均缺乏色氨酸，CBPs的必需氨基酸和含硫氨基酸均显著高于YBPs、BBPs和PBPs;4种LBPs主要由MW

【目的】探究从大豆分离蛋白双酶分步酶解产物中分离促成骨细胞增殖肽的工艺,为大豆产品的开发提供参考。【方法】以促成骨细胞增殖活性作为测定指标,选用木瓜蛋白酶酶解大豆分离蛋白(SPI),采用MTT法检测不同浓度的木瓜蛋白酶酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。采用pH-Stat法检测水解时间为1、2、3、4、5和6 h的木瓜蛋白酶酶解产物的水解度,并检测相应水解时间的酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。然后分别采用截留分子量为30 kD和10 kD两种超滤膜对活性较高的酶解产物进行超滤,并测定各超滤组分对成骨细胞的促增殖活性。再将具有较高促成骨细胞增殖活性的超滤组分分别在0.5、1、1.5、2和2.5 h进行碱性蛋白酶酶解,并检测相应水解时间的酶解产物对成骨细胞的促增殖活性。然后选用交联葡聚糖(Sephadex G-15)对具有较高促成骨细胞增殖活性的酶解产物进行分离,并检测各分离组分对成骨细胞的促增殖活性。最后,对各分离组分进行氨基酸分析,并采用质谱(ESI-TOF MS/MS)对最高促成骨细胞增殖活性的分离组分进行结构鉴定,并筛选出具有较强促成骨细胞增殖的大豆活性肽。【结果】在浓度为200μg·mL~(-1)时,木瓜蛋白酶酶解物对成骨细胞的促增殖活性随着酶解时间的增加逐渐增强,当酶解时间为5 h时达到最高促增殖活性((118.24±2.73)%)。木瓜蛋白酶酶解产物经超滤分离、碱性蛋白酶酶解和凝胶过滤色谱分离后,对各分离组分进行氨基酸分析并筛选得到对成骨细胞具有最强增殖活性的组分F3,该组分的成骨细胞增殖率为(125.80±2.94)%,且F3中丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等疏水性氨基酸以及芳香族氨基酸和必需氨基酸的含量明显高于其他组分。进一步通过质谱鉴定出F3主要由10个肽段组成。其中,DAMDGWFRL、GQTPLFPR、ADFYNPK、KDWYDIK的疏水性氨基酸、芳香族氨基酸以及必需氨基酸占比较高。对上述4个肽段进行活性测定,发现GQTPLFPR的促成骨细胞增殖活性最强,在浓度为100μmol·L~(-1)时,其成骨细胞增殖率为(129.11±3.12)%。【结论】采用双酶分步酶解结合超滤和凝胶过滤色谱等蛋白分离纯化技术,从大豆分离蛋白中分离纯化出了具有较强促成骨细胞增殖活性的多肽,为促成骨细胞增殖活性肽的制备和应用提供了技术参考。

以孔鳐软骨为材料,采用盐酸胍抽提、丙酮分级沉淀,制备孔鳐软骨蛋白;以DPPH·和HO·清除活性为导向,采用胰蛋白酶酶解、膜超滤、DEAE-52阴离子交换层析、Sephadex G-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等技术,制备抗氧化肽,并对其活性进行系统评价。结果显示,孔鳐软骨蛋白经胰蛋白酶酶解和分离纯化得到2个抗氧化肽RCPE-A和RCPE-B,经氨基酸序列分析确定其序列分别为Gly-Glu-Glu-Gly-ProArg-Gly (GEEGPRG)和Gly-Glu-Glu-Gly-Thr-Met-Gly-Leu (GEEGTMGL),质谱(ESI-MS)测定其分子量分别为700.71和792.87 u。体外自由基清除实验结果显示,RCPE-A与RCPE-B对DPPH·(EC50 2.94和1.16 mg/mL)、HO·(EC_(50) 0.34和0.54 mg/mL)、ABTS~+·(EC_(50) 0.34和0.10mg/mL)和O_2~-·(EC_(50) 0.11和0.03 mg/mL)具有良好的清除作用,RCPE-A与RCPE-B亦显示出较强的脂质过氧化抑制作用。研究表明,孔鳐软骨蛋白酶解物及制备多肽可用于抗氧化相关的功能食品开发,也可以用作抗氧化剂延长相关产品的货架期。

【目的】以高温花生粕(HPM)为试验材料,通过复合改性交联制备胶合强度高、耐水性好的HPM蛋白基胶黏剂(HPMA),为HPMA的产业化应用提供技术和理论依据。【方法】采用十二烷基硫酸钠(SDS)、纳米SiO_2(nSiO_2)和聚酰胺多胺环氧氯丙烷(PAE)树脂复合改性交联制备HPMA,研究HPMA制备的杨木胶合板胶合强度以及HPMA外观、黏度、固体含量、pH、热稳定性、蛋白质二级结构和表面结构的变化。【结果】HPMA制备的杨木胶合板干态、温水湿态和沸水湿态胶合强度分别提高113%、114%和81%,达到国家Ⅰ类杨木胶合板标准。HPMA呈棕褐色,黏度、固体含量、pH分别为6 448 m Pa·s、31.33%和5.83,热分解温度高达317℃。HPMA制备过程中蛋白质二级结构和基团均发生显著变化,表面结构由粗糙无序变得紧致均一。【结论】HPMA胶合强度和耐水性显著提高的主要原因是SDS使蛋白质二、三级结构打开,疏水基团暴露,并与nSiO_2和PAE发生超支化交联形成不溶水的三维网络结构。

【目的】对胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase双酶组合水解黄粉虫蛋白制备生物活性肽的工艺进行优化,为获得高活性黄粉虫蛋白多肽及有效利用黄粉虫蛋白提供科学依据。【方法】以水解度和酸溶性肽得率为指标,研究了酶解时间、酶活比、料液比、加酶量、pH和酶解温度6种因素对酶解反应的影响。在此基础上设计了3因素(加酶量、pH和酶解温度)3水平的响应面试验。【结果】胰蛋白酶与碱性蛋白酶Alcalase双酶水解黄粉虫蛋白的最佳酶解条件为:酶解时间120 min,酶活比1∶1,料液比1∶3,加酶量23.41 mg/g,pH 8.77,酶解温度53.41℃。【结论】利用优化双酶水解条件制得的低分子多肽的水解度高达2...

为获得具有生物活性的骨钙素蛋白,以鸡颅骨提取的总RNA为模板,RT-PCR法克隆鸡骨钙素成熟肽DNA,连接至原核表达载体pET-32a(+),构建表达质粒pET-32a(+)-rchOC。质粒转化Rosetta-gami(DE3)pLyS宿主菌,IPTG诱导表达含His标签的重组蛋白His-rchOC。肠激酶酶切去除融合蛋白中的His标签后获得重组骨钙素蛋白(rchOC)。通过与羟基磷灰石结合试验、MTT及PNPP法分析该蛋白生物学活性。结果显示:重组骨钙素蛋白能与羟基磷灰石结合,抑制成骨细胞中碱性磷酸酶的表达,但不影响成骨细胞的增殖。结论:经原核表达系统已成功获得鸡重组骨钙素蛋白,且该蛋白具...

为了开发牛骨胶原蛋白肽(BBP)的抗疲劳功能，对BBP的氨基酸组成和肽段序列进行表征；选取16只7周龄、SPF级的Balb/c小鼠并随机分为2组，包括对照组(生理盐水)和肽干预组(w(BBP)=200 mg/kg)),每日定时灌胃。BBP干预4周后，测定小鼠的负重游泳时间和运动后血清代谢积累物含量。BBP干预18周后，测定血清氧化因子、炎症因子含量和肠道菌群组成。结果表明：1)BBP疏水性氨基酸比例为61.37%,大部分肽段来源于蛋白P02453(I型胶原蛋白的α1链)。2)BBP干预后小鼠负重游泳时间显著提高，且运动后血氨浓度显著降低、谷胱甘肽浓度显著升高(P<0.05),表明了BBP潜在的抗疲劳能力。3)BBP干预后，在非运动状态下小鼠血清SOD和GSH-Px显著升高，MDA浓度显著降低(P<0.05),表明了BBP潜在的抗氧化能力；在免疫方面，BBP干预后小鼠血清抗炎因子IL-10和促炎因子IL-6、TNF-α浓度均显著下降(P<0.05),主要的免疫器官胸腺指数显著下降(P<0.01),脾指数显著上升(P<0.05);在粪便中，潜在的有益菌Akkermansia、Lactococcus在肽干预后上调。综上，BBP具有潜在的抗疲劳作用，这种作用可能是通过调节体内抗氧化能力以及肠道菌群结构实现的。

为系统考察酶解时间、酶种类和酶加入的顺序对猪血浆蛋白酶解产物抗氧化性的影响,采用风味蛋白酶、碱性蛋白酶及双酶(风味蛋白酶,碱性蛋白酶不同的加入顺序)在各自最适条件下对猪血浆蛋白进行酶解,并研究酶解产物的功能特性。结果表明:0~120min内,随着酶解时间的延长,水解度升高,各酶解产物的抗氧化性均有所增强;60~180min内,双酶酶解产物的清除DPPH自由基的能力、亚铁离子螯合能力和还原力显著高于单酶酶解产物(P<0.05);90~150min内,先加碱性蛋白酶后加入风味蛋白酶酶解的酶解产物的水解度、清除DPPH自由基能力和还原力显著高于先加风味蛋白酶酶解后加入碱性蛋白酶酶解的酶解产物(P<0...

以草鱼（Ｃｔｅｎｏｐｈａｒｙｎｇｏｄｏｎ ｉｄｅｌｌｕｓ）鳞为原料，采用３种常用工业蛋白酶酶解３种经不同预处理方法处理过的鱼鳞，经酶解、离心分离、冷冻干燥等工序制备胶原蛋白肽，比较不同预处理方法制得胶原蛋白肽的产率及产物特性。结果表明，预处理方法对鱼鳞酶解产物的氮收率、水解度和氨基氮生成量有显著影响（ｐ

【目的】获得KillerRed蛋白(KRP)脂质体的制备配方,测定其物理化学性质及生物活性,为优化该蛋白的使用性能提供依据。【方法】用逆相蒸发法制备KRP脂质体,用荧光分光光度法测定脂质体包封率,以包封率为指标通过正交试验优化配方,并考察脂质体的形态、粒径、Zeta电位和泄漏率以及生物活性。【结果】按优化配方制得的脂质体颗粒呈球形,平均粒径为520.9 nm、Zeta电位为-83.78 mV、包封率为77.05%;不同时段脂质体对白纹伊蚊4龄幼虫毒力回归方程分别为y=3.0499x+0.0368(r=0.9771)、y=2.6003x+1.1592(r=0.9600)和y=2.7702x+1....

为降低抗生素替代品———大豆活性肽绿色饲料添加剂的生产成本 ,采用紫外线与亚硝基胍 (NTG)多重诱变的方法选育芽孢杆菌CAU2 0 8,以提高产蛋白酶能力。结果显示 :15W紫外灯最适照射时间 3min ,距离 30cm ;亚硝基胍最适质量浓度为 1mg/mL ,且效果好于前者 ,两者复合诱变比单一诱变效果好。将诱变选育的蛋白酶高产菌株No .111用于液态发酵制备大豆肽饲料添加剂 ,6 0h发酵液的水解度为 2 6 9% ,比母本菌株CAU2 0 8的水解度 18 5 %提高了 8个百分点。如果两者达到相同的水解度 (19 0 % ) ,则No .111比CAU2 0 8的发酵周期缩短约...

【目的】探究能有效地从小麦胚芽清蛋白二步双酶酶解物中分离得到高活性抗氧化肽的工艺。【方法】以小麦胚芽清蛋白为原料，ＤＰＰＨ自由基清除率和Ｆｅ～（２＋）螯合能力为抗氧化活性的评价指标，通过胰蛋白酶进行酶解，依次采用超滤膜和凝胶过滤色谱（ＳｅＰＨａＤｅｘ Ｇ－７５）对酶解产物进行分离纯化，筛选出活性较高的组分；采用碱性蛋白酶对获得的活性较高组分进行酶解，通过凝胶过滤色谱（ＳｅＰＨａＤｅｘ Ｇ－１５）和反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ）分离纯化其酶解产物；采用质谱技术（ｅＳＩ－ＴＯＦ ＭＳ／ＭＳ）对抗氧化活性最高的组分进行结构鉴定。【结果】分离得到３个活性组分（峰）Ｐ＿ａ、Ｐ＿ｂ、Ｐ＿Ｃ，采用ＤＰＰ．．．

以竹节为原料,采用水蒸气活化法制备提金活性炭,研究温度、保温时间、水蒸气流量等因素对活性炭性能的影响,并对其孔隙结构进行表征。结果表明:随着温度和保温时间的增大,活性炭的吸附性能总体呈上升趋势;随着水蒸气流量的增加,活性炭的吸附性能呈先升后降的趋势;N2吸附等温线的分析表明,竹节活性炭具有发达的微孔、中孔、大孔结构。在较佳的试验条件下,活性炭的强度、亚甲基蓝吸附值、碘吸附值、比表面积、总孔容积和微孔容积分别为97.5%,262mg·g-1,1072.7mg·g-1,1334.2m2.g-1,0.671mL.g-1和0.574mL.g-1。

以缢蛏为试验材料,采用羟自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适水解用酶,在单因素试验基础上使用响应面法优化酶解工艺条件,考察缢蛏蛋白肽的羟自由基清除能力并通过Sephadex G-15凝胶层析测定其分子质量分布。结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的缢蛏蛋白肽清除羟自由基能力明显强于其他蛋白酶,优化后的碱性蛋白酶水解缢蛏蛋白工艺条件为底物浓度6mg/ml、加酶量3%、pH8.0、温度55℃、酶解时间4h,蛋白肽的羟自由基清除率为76.60%,IC50值为1.89mg/ml,蛋白肽中80%以上是分子质量小于1500Da的小分子肽。

随着畜牧行业"禁抗"的落实,寻找合适的"替抗"饲料添加剂已然成为行业内的重要探索方向。单宁是一种植物源性多酚类化合物,广泛存在于多种植物中,在过去,由于过量摄入会影响机体对营养物质的消化与吸收,甚至产生一定的生理毒性,故其一直被归类为抗营养因子。但由于单宁的多酚属性,在适当的摄入量下,其具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫和抗氧化等生物活性。近几十年来,大量的研究报道了适量的单宁可有效改善畜禽的饲料利用率和生产性能、促进肠道健康和提高动物产品品质,具有非常广阔的应用前景。但当前的研究显示,对于不同的动物类型、不同的动物生长阶段、不同的单宁来源及其不同的添加形式,单宁的最适添加剂量及其作用效果均不相同。本研究就单宁的理化性质和生物活性,以生猪、反刍动物以及家禽为例,对单宁在畜禽生产中的应用进行综述及展望,探讨单宁作为饲料添加剂的开发潜力及价值,为养殖生产中非粮饲料的应用提供参考。