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[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 李林  喻子牛  
研究了用溴化乙锭诱变、升温和添加SDS等 3种处理对苏云金芽胞杆菌质粒稳定性的影响。结果表明 ,用 4.5 μg/ml的溴化乙锭处理野生菌株YBT 1 5 2 0和HD 5 6 7,对其携带ICPs基因的质粒的稳定性无影响。升温至 42℃时 ,野生菌株YBT 1 4 6 3和YBT 96 0 3的携带ICPs基因的质粒分别有 0 .41 %和 0 .37%发生丢失 ,一些小质粒 (
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 乐超银  喻子牛  
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 季思思  朱义广  彭东海  阮丽芳  孙明  
利用特异引物从基因组BAC文库筛选到1个35kb的片段,对该片段测序比对分析发现可能含有p26的复制区。为了验证该片段中是否含有p26的复制区,首先,将大肠杆菌和苏云金芽胞杆菌穿梭载体pHT304用EcoRⅠ酶切切掉苏云金芽胞杆菌复制子后自连,获得复制子克隆载体pHT304E;随后,将12kbEcoRⅠ片段亚克隆到载体pHT304E上电转化无晶体突变株BMB171,获得具有抗性的转化子,证明该片段具有复制功能。缺失实验证明最小复制功能区包含2个必需的ORF。经过40代无抗培养,最小复制区复制稳定性达到90%以上。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 陈慧杰  刘晓艳  曹诗云  阮丽芳  孙明  
苏云金芽胞杆菌CT-43高产苏云金素,其内生质粒pBMB0558上virD4基因编码的VirD4蛋白与Ⅳ型分泌系统中结合底物的偶合蛋白(T4CPs)高度同源。本研究利用插入缺失突变方法,构建同源双交换载体,敲除CT-43中的virD4基因,得到1株突变株BMB1122。HPLC检测结果显示,突变株BMB1122发酵上清液中未检测到苏云金素特征吸收峰;进一步通过LCMS-IT-TOF飞行质谱检测突变株胞内代谢物,结果显示其含有与苏云金素合成途径中的所有前体物分子质量相符的质荷比(m/z),这与出发菌株CT-43的结果一致。初步推测,virD4基因与苏云金素的分泌相关,virD4基因的敲除影响苏云...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 沙莉  黄振吉  关雄  
研究了不同氮源对苏云金芽胞杆菌(Bt)BRC-HZP7菌株产几丁质酶活力的影响.结果表明:在不添加几丁质的LB培养基和牛肉膏培养基中,菌株都能合成几丁质酶,最高酶活力分别为1368.72、103.39 U;在含2%(质量分数)几丁质的产酶培养基中添加酪蛋白,能有效提高产酶活力,最高酶活力为563.57 U;在产酶培养基中分别添加质量分数为1%的谷氨酰胺、天门冬酰胺、脯氨酸、甲硫氨酸4种氨基酸,产酶活力与对照组相比都大大下降,最高酶活力较对照分别下降了32.5%、33.7%、80.6%、82.6%,故推断氨基酸可抑制Bt合成几丁质酶.
[期刊] 华北农学报  [作者] 宋健  曹伟平  王金耀  冯书亮  杜立新  
为明确磁处理水对苏云金芽孢杆菌生长的影响,用恒定磁场处理的磁化水配制液体培养基进行苏云金芽孢杆菌菌株的培养,结果表明,在28~50 Gs磁场强度处理水可以提高G-02菌株的产孢量,G-02在43 Gs磁场强度处理水配制的培养基中产孢量最大,达到6.1×108孢子/mL,比对照提高了11%;在7~43 Gs磁场强度内处理水可以提高HD-1菌株的产孢量,HD-1磁场强度处理水配制的培养基中在14 Gs产孢量最大,达到6×108孢子/mL,比对照提高了28%。在43 Gs处理2~12 h的磁处理水可以提高G-02菌株的产孢量,而在14 Gs处理2~14 h的磁处理水可以提高HD-1菌株的产孢量。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 吴怀光  叶伟星  喻子牛  孙明  
【目的】摸索提高AiiA蛋白对AHLs分子的降解活性和对胡萝卜软腐欧文氏菌感染马铃薯产生病害的抑制能力的方法。【方法】苏云金芽胞杆菌的AiiA蛋白是一种胞内蛋白,能降解参与诱导调控多种植物病原菌致病基因表达的N-乙酰高丝氨酸内酯信号分子。本文采用两种方式来提高AiiA蛋白的活性,即利用苏云金芽胞杆菌S-层蛋白在细胞表面表达该蛋白以及利用苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry3Aa启动子来提高aiiA基因的表达量。为此构建该蛋白基因与细胞表面S-层蛋白的锚定区结合而成的融合蛋白基因slh-aiiA以及带有基因cry3Aa启动子的融合基因pro3A-aiiA。为了提高表达的稳定性以及去掉重组菌中非苏...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 李建洪  万秋英  王沫  姜锡权  喻子牛  
为筛选对昆虫有高毒力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株 ,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株 K980 5和 K990 3,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种 ,形成典型的双金字塔型伴胞晶体 .两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生物活性 ,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒 .K980 5含有 cry Aa,cry Ab,cry C,cry D和 cry 基因 ,K990 3含有 cry Aa,cry Ab,cry Ac,cry E和 cry 基因
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 刘明秋  戴经元  喻子牛  
以小菜蛾、棉铃虫为生物测定昆虫 ,通过测定 5种无机盐 (Na2 CO3,K2 CO3,CaCl2 ,MgSO4 ,和MgCl2 )对苏云金芽胞杆菌油剂的增效作用进行增效因子的筛选。结果表明 ,以小菜蛾为供试昆虫 ,除CaCl2 外 ,其余 4种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 10 %MgCl2 效果最好 ,增效比为 1.5 6。以棉铃虫为供试昆虫 ,5种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 12 5 %MgSO4 效果最好 ,增效比为 1.6 9,0 .0 2 5 %的Na2 CO3 次之 ,增效比为 1.5 9
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 刘华亮  陈守文  孙明  喻子牛  
在15-50℃、电机转速为75-750 r/min下测定了苏云金芽胞杆菌发酵液及其微滤浓缩液的流变特性。分析结果显示:幂律方程适于描述发酵液及其微滤浓缩液的流变曲线,它们的流变指数n值均小于1(n= 0.735-0.975),这表明苏云金芽胞杆菌发酵液及其微滤浓缩液均为拟塑性流体。随着浓度的上升,流体的稠度系数上升,流变指数下降;随着温度的上升,稠度系数下降,流变指数略有上升。经回归分析发现,温度对稠度系数的影响符合Arrhenius方程K=K0exp(Eu/RT),浓度与稠度系数的关系符合关系式K=aexp(bC2),不同温度下的流变指数平均值nave和浓度的关系可表示:nave=1.35e...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 丁德武  刘丽  陈守文  须文波  
代谢网络的研究是当前的一个新热点,越来越多的证据表明对代谢网络的拓扑结构进行分析有助于理解细胞的行为和生命现象。本研究首先从KEGG数据库中获取了苏云金芽胞杆菌的基因组与所有代谢途径信息,构建了基因-酶以及酶-反应的列表,并参照Ma和Zeng所建立的数据库对所得的列表进行必要的修正。然后,用节点表示代谢物,连线表示代谢物之间的反应,即用代谢物图来表示所得的代谢网络,该网络包含了830个节点,1132条连线。随后,基于代谢网络的蝴蝶结结构对该网络进行模块划分并提取了网络的最重要组成部分:巨强连通体。最后,分析了巨强连通体及其10个关键节点的生物学功能意义。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 鲁松清  喻子牛  
在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株CT-43的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出3个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成、芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成7个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第2阶段开始,由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株CT-43中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 张学贤  周俊初  莫才清  李阜棣  
pMN53是以pMN2为载体克隆有菜豆根瘤菌(Rhizobiumlegumilosarumbv.phaseoli)共生基因的R-prime质粒,将pMN53接合转移到快生型大豆根瘤菌(Rhizobiumfredii)B52,慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobiumjaponicum)2210以及紫云英根瘤菌(Rhizobiumhuakuii)7653R后,分别考察了pMN53在3种转移接合子中的稳定性。结果表明由pMN53携带的卡那霉素抗性(Kmr)在3种供试菌株中都能稳定传代,但电泳分析都只能检测到载体质粒pMN2,载体上所携带的外源基因脱落。用Tn5为探针进行的斑点杂交,结果证明转移...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 张剑冰  欧广东  孙明  陈亚华  喻子牛  
对可毒杀家蝇幼虫的苏云金杆菌中华亚种(Bucillus thuringiensis subsp. chinensis)CT-43菌株进行了质粒消除处理,从中分离出15株突变株,其中7个突变株缺失了140kD ICP(杀虫晶体蛋白Insecticidal crystal protein),8个菌株缺失了130和68 kD ICP,缺失140 kD ICP的菌株同时失去了苏云金素的产生能力。对这些菌株进行质粒检测的结果表明,130 kD和68 kD ICP的产生与一个大质粒L-1有关,而对家蝇幼虫有毒性的140 kD ICP的产生与另一个大质粒L-2有关,同时,质粒L-2还决定着该菌株苏云金素的产...
[期刊] 华北农学报  [作者] 宋萍  郭丽伟  苏俊平  王勤英  王晖  
对我室所保存的18株含cry7类基因的菌株进行晶体形状、生物活性和蛋白型基因型等进行分析。结果表明:这些菌株能产生菱形、小菱形和不规则形伴胞晶体,SDS-PAGE检测主要蛋白的分子量是130kDa,PCR扩增得到1300bp条带。对马铃薯瓢虫二龄幼虫的生物活性测定结果表明,菌株WZ-9具有很高的杀虫率,72h校正死亡率达到了93.1%;菌株WCG-10活性次之,72h校正死亡率达到44.8%,而其他菌株杀虫活性低或没有活性。对杀虫活性最高的WZ-9菌株扩增全长基因,得到cry7Ab3基因(GenBank Number:BI1015188)。
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